1、無菌操作,1,學(xué)習(xí)交流PPT,用于防止微生物進(jìn)入人體組織或其它無菌范圍的操作技術(shù)稱為無菌操作。如外科手術(shù)需防止細(xì)菌進(jìn)入傷口。 在各種生物實(shí)驗(yàn)中，為了防止微生物的生長和繁殖影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，也要在無菌的環(huán)境下進(jìn)行。,2,學(xué)習(xí)交流PPT,無菌操作的要求是: 1 、操作前將界面上的細(xì)菌和病毒等微生物殺滅。 2 、操作過程中是界面與外界隔離，避免微生物的侵入,3,學(xué)習(xí)交流PPT,細(xì)菌的無菌操作包括： 1.細(xì)菌的分離培養(yǎng)與接種 2.細(xì)菌的鑒定 做到這些首先來看一下需要的條件： 1.細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室 2.培養(yǎng)基,4,學(xué)習(xí)交流PPT,細(xì)菌的分離培養(yǎng)與接種 一、基本條件 (1) 細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室 1 、 細(xì)菌室必須安裝嚴(yán)密

2、的門窗，以防室內(nèi)環(huán)境受到外界的污染，且室內(nèi)禁用風(fēng)扇，避免細(xì)菌的播散。 2 、 細(xì)菌室必須安裝供空氣消毒的紫外燈，置于操作臺面上一米處，每天工作開始前照射20分鐘，對其消毒效國要定期檢查，及時(shí)更換失效的燈管。,5,學(xué)習(xí)交流PPT,3 、室內(nèi)應(yīng)備有消毒劑，用于試驗(yàn)中發(fā)生菌液濺灑時(shí)的及時(shí)消毒處理。同時(shí)還應(yīng)備有供工作人員浸手用的盛有消毒劑的水盆，肥皂及自來水源等。 4 、 室內(nèi)操作臺必須每天用消毒劑檫洗，地面至少一周用消毒劑檫洗一次。,6,學(xué)習(xí)交流PPT,5 、 對接收的標(biāo)本，無菌器具，用過的物品等應(yīng)明顯分開并放在指定位置。同時(shí)要對用過的物品及時(shí)進(jìn)行滅菌處理。 6 、 實(shí)驗(yàn)室根據(jù)當(dāng)?shù)氐氖覝靥攸c(diǎn)安裝空調(diào)

3、機(jī)，以適合細(xì)菌室工作。同時(shí)室內(nèi)應(yīng)設(shè)置必要的消防設(shè)備。,7,學(xué)習(xí)交流PPT,(2)無菌實(shí)驗(yàn)室 無菌實(shí)驗(yàn)室是細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用于無菌操作的小室，其內(nèi)部裝飾，消毒條件要求更嚴(yán)格。 1.無菌室應(yīng)完全封閉，人員出入應(yīng)有兩道門，其間應(yīng)有緩沖區(qū)。 2.用前以紫外線消毒30分鐘，定期用甲醛熏蒸，徹底消毒。 3.在無菌室中一般僅限于分裝無菌的培養(yǎng)基及傳染性強(qiáng)的細(xì)菌的接種，不進(jìn)行有菌標(biāo)本的分離及其他操作。,8,學(xué)習(xí)交流PPT,4.無菌室內(nèi)應(yīng)僅限操作人員進(jìn)入，而且進(jìn)入無菌室應(yīng)穿隔離衣和專用鞋，操作是戴口罩，隨時(shí)保證室內(nèi)的無菌狀態(tài)。 5.條件有限的實(shí)驗(yàn)室，可用超凈工作臺代替無菌實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相應(yīng)的無菌操作。超凈工作臺應(yīng)選擇垂

4、直氣流通風(fēng)方式。 6.無菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備空調(diào)設(shè)備，保證不因室溫而影響工作。,9,學(xué)習(xí)交流PPT,(3)基本設(shè)備和器具 細(xì)菌實(shí)驗(yàn)內(nèi)必須具備的設(shè)備和器具有： 用于無菌培養(yǎng)的溫箱，二氧化碳培養(yǎng)箱，厭氧培養(yǎng)設(shè)備；顯微鏡，高壓蒸汽滅菌器，干烤箱，培養(yǎng)基，接種環(huán)，接種針等。,10,學(xué)習(xí)交流PPT,二、培養(yǎng)基 培養(yǎng)基是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。適宜的培養(yǎng)基不僅可用于細(xì)菌的分離化培養(yǎng)、傳代、菌種保存，還可用于研究細(xì)菌的生理、生化特性，是對病原菌分離鑒定的重要環(huán)節(jié)和必不可少的手段。,11,學(xué)習(xí)交流PPT,（一）培養(yǎng)基的組成成分,1、營養(yǎng)物質(zhì) 盡管不同的細(xì)菌對營養(yǎng)的要求不同，但細(xì)

5、菌需要的營養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有氮源、碳源、無機(jī)鹽類和生長因子等，常用的營養(yǎng)物質(zhì)如下： （1）蛋白胨 （2）肉浸液 （3）牛肉膏 （4）糖類、醇類 （5）血液 （6）無機(jī)鹽類 （7）雞蛋和動物血清 （8）生長因子,12,學(xué)習(xí)交流PPT,2、凝固物質(zhì) 制備固體培養(yǎng)基時(shí)，需要在液體中加入凝固物質(zhì)。最常用的凝固物質(zhì)為瓊脂，特殊情況下也可用明膠、卵白蛋白、血清等。,13,學(xué)習(xí)交流PPT,3、抑制劑和指示劑 在制備培養(yǎng)基時(shí)常加入抑制劑和指示劑，這些并不是細(xì)菌生長繁殖所必需的物質(zhì)，而是由于選擇、鑒定及判斷結(jié)果的需要。 （1）抑制劑：抑制劑必須具有選擇抑制作用，在制備營養(yǎng)基時(shí)加入一定種類的抑制劑，目的在于抑制非檢出菌

6、的生長，以利于檢出菌的生長。 （2）指示劑：在培養(yǎng)基中加入一定種類的指示劑，是為了便于觀察細(xì)菌是否利用和分解培養(yǎng)基中的糖、醇類。,14,學(xué)習(xí)交流PPT,（二）培養(yǎng)基種類,1、基礎(chǔ)培養(yǎng)基 2、營養(yǎng)培養(yǎng)基 3、鑒別培養(yǎng)基 4、選擇培養(yǎng)基 5、特殊培養(yǎng)基,15,學(xué)習(xí)交流PPT,（三）分離培養(yǎng)基的選擇,臨床標(biāo)本送往細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)立即接種到適當(dāng)?shù)姆蛛x培養(yǎng)基上。依據(jù)衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦，細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有如下分離培養(yǎng)基： 1、血平板 2、巧克力血平板 3、中國藍(lán)平板或伊紅美藍(lán)平板 4、麥康凱平板 、瓊脂 、堿性瓊脂或瓊脂 、血液增菌培養(yǎng)基 、營養(yǎng)肉湯,16,學(xué)習(xí)交流PPT,細(xì)菌的保存方法與無菌操作,細(xì)菌

7、的保存方法 1 、細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物中：一般細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物可以維持兩年。具體方法如下：用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落，針緩慢穿過瓊脂到達(dá)瓶底，連續(xù)幾次，蓋上瓶蓋擰緊，做好標(biāo)記。室溫下存放于暗處。（最好一點(diǎn)可以將瓶蓋放松，在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)過夜，再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜，室溫或最好在4度避光保存）。,17,學(xué)習(xí)交流PPT,2 、細(xì)菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中： （1）在液體培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌培養(yǎng)物：取0.85ml細(xì)菌培養(yǎng)物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻，然后轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的保存管內(nèi)，密封，在乙醇干冰或液氮中凍結(jié)后再轉(zhuǎn)至70度長期保存。在復(fù)蘇時(shí)，用滅菌接種針

8、刮取凍結(jié)的培養(yǎng)物表面，然后立即把黏附于接種針上的細(xì)菌劃于含適當(dāng)抗生素的LB瓊脂平板表面，于37度過夜。,18,學(xué)習(xí)交流PPT,（2）在瓊脂平板上生長的細(xì)菌培養(yǎng)物：從瓊脂平板表面刮下細(xì)菌放入裝有2mlLB的無菌試管內(nèi)，再加入等量的含有30滅菌甘油的LB培養(yǎng)基，振蕩使甘油完全分布均勻后，分裝于無菌保存管內(nèi)，密封，再按前述方法冰凍保存。這一方法的優(yōu)點(diǎn)在于可用于保存在質(zhì)粒載體上建立的cDNA文庫。,19,學(xué)習(xí)交流PPT,菌種保存方法 微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。 低溫、干燥和隔絕空氣是使

9、微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。 保藏方法大致可分為以下幾種：,20,學(xué)習(xí)交流PPT,1傳代培養(yǎng)保藏法 2液體石蠟覆蓋保藏法 3載體保藏法 4寄主保藏法 5冷凍保藏法 6冷凍干燥保藏法,21,學(xué)習(xí)交流PPT,三、器材 細(xì)菌、酵母菌，放線菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基，滅菌脫脂牛乳，滅菌水，化學(xué)純的液體石蠟，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黃土或紅土，冰塊、食鹽，干冰，95酒精，10鹽酸，無水氯化鈣； 滅菌吸管，滅菌滴管，滅菌培養(yǎng)皿，管形安瓿管，淚滴形安瓿管（長頸球形底），40目與 100目篩子，油紙，濾紙條（0512cm），干燥器，真空泵，真空壓

10、力表，噴燈，L形五通管，冰箱，低溫冰箱（-30），液氮冷凍保藏器。,22,學(xué)習(xí)交流PPT,操作步驟、各保藏法的應(yīng)用范圍及優(yōu)缺點(diǎn),1斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至28的冰箱中保藏。 保藏時(shí)間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細(xì)菌保存24個(gè)月，移種一次。酵母菌兩個(gè)月，細(xì)菌最好每月移種一次。,23,學(xué)習(xí)交流PPT,此法為實(shí)驗(yàn)室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點(diǎn)是操作簡單，使用方便，不需特殊設(shè)備，能隨時(shí)檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點(diǎn)是容易變異，因?yàn)榕囵B(yǎng)基的物理、化學(xué)特性不是嚴(yán)格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變

11、，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機(jī)會亦較多。,24,學(xué)習(xí)交流PPT,2液體石蠟保藏法 （1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶內(nèi)，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，105kg/cm2，1213滅菌30分鐘，然后放在40溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。 （2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子。 （3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準(zhǔn)（圖-12），使菌種與空氣隔絕。,25,學(xué)習(xí)交流PPT,（4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時(shí)間還要長）。此法實(shí)用而效果好。霉菌、放線菌、芽孢細(xì)菌可保藏2年以上不死，酵母

12、菌可保藏12年，一般無芽孢細(xì)菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37溫箱內(nèi)，亦可保藏3個(gè)月之久。此法的優(yōu)點(diǎn)是制作簡單，不需特殊設(shè)備，且不需經(jīng)常移種。缺點(diǎn)是保存時(shí)必須直立放置，所占位置較大，同時(shí)也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時(shí)，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應(yīng)特別注意。,26,學(xué)習(xí)交流PPT,3濾紙保藏法 （1）將濾紙剪成0512cm的小條，裝入068cm的安瓿管中，每管12張，塞以棉塞，105kg/cm2，1213滅菌30分鐘。 （2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。 （3）取滅菌脫脂牛乳12ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿

13、或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。,27,學(xué)習(xí)交流PPT,（4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）將安瓿管放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。 （6）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖-13熔封，保存于低溫下。,28,學(xué)習(xí)交流PPT,（7）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。 細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏1417年之久。此法較液氮、冷

14、凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備。,29,學(xué)習(xí)交流PPT,4沙土保藏法 （1）取河沙加入10稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機(jī)質(zhì)。 （2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。 （3）烘干，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。 （4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。,30,學(xué)習(xí)交流PPT,（5）烘干，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。 （6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據(jù)需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進(jìn)行滅菌，烘干。,31,學(xué)習(xí)交流PPT,（7）抽樣進(jìn)行無菌檢

15、查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中，37培養(yǎng)48小時(shí)，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗(yàn)，直至證明無菌，方可備用。 （8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養(yǎng)細(xì)胞用此法效果不好）優(yōu)良菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。,32,學(xué)習(xí)交流PPT,（9）于每支沙土管中加入約05ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。 （10）放入真空干燥器內(nèi)，用真空泵抽干水分，抽干時(shí)間越短越好，務(wù)使在12小時(shí)內(nèi)抽干。 （11）每10支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長，則說明制作的沙土

16、管有問題，尚須進(jìn)一步抽樣檢查。,33,學(xué)習(xí)交流PPT,（12）若經(jīng)檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內(nèi)干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。 （13）需要使用菌種，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。 此法多用于能產(chǎn)生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在抗生素工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應(yīng)用于營養(yǎng)細(xì)胞效果不佳。,34,學(xué)習(xí)交流PPT,5液氮冷凍保藏法 （1）準(zhǔn)備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用7510mm的，或能容12mm液體的。 （2）加保護(hù)劑與滅菌保存細(xì)菌

17、、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細(xì)胞時(shí)，則將空安瓿管塞上棉塞，105kg/cm2，1213滅菌15分鐘：若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內(nèi)預(yù)先加入保護(hù)劑如10的甘油蒸餾水溶液或10二甲亞砜蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限，而后再用105kg/cm2，1213滅菌15分鐘。,35,學(xué)習(xí)交流PPT,（3）接入菌種將菌種用10的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內(nèi)切取菌落圓塊，放入含有保護(hù)劑的安瓿管內(nèi)，然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。 （4）凍結(jié)再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1的慢速凍結(jié)至-30。若細(xì)胞急劇冷凍，則在細(xì)胞內(nèi)會形成冰的結(jié)

18、晶，因而降低存活率。,36,學(xué)習(xí)交流PPT,（5）保藏經(jīng)凍結(jié)至-30的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器（圖-14）的小圓筒內(nèi)，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內(nèi)。液氮保藏器內(nèi)的氣相為150，液態(tài)氮內(nèi)為-196。,37,學(xué)習(xí)交流PPT,（6）恢復(fù)培養(yǎng)保藏的菌種需要用時(shí)，將安瓿管取出，立即放入3840的水浴中進(jìn)行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內(nèi)容物移入適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細(xì)菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細(xì)胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點(diǎn)是需要特殊設(shè)備。,38,學(xué)習(xí)交流PPT,無菌操作注意事項(xiàng)

19、體外培養(yǎng)細(xì)胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室。若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，技術(shù)操作不規(guī)范,也會導(dǎo)致污染。因而為在一切操作中為最大可能的保證無菌每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和完全靠。,39,學(xué)習(xí)交流PPT,【培養(yǎng)前準(zhǔn)備】在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會。,40,學(xué)習(xí)交流PPT,【操作和消毒】無菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面次(拖布要專用)紫外線照射消毒30-

20、50min，超凈工作臺臺面每次實(shí)驗(yàn)前要用75酒精擦洗。然后紫外線淌毒30min。在工作臺面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線，消毒時(shí)工作臺面上用品不要過多或重疊放置否則會遮擋射線降低消毒效果。些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺內(nèi)同時(shí)紫外線消毒。,41,學(xué)習(xí)交流PPT,【洗手和著裝】原則上和外科手術(shù)相同。平時(shí)僅做觀察不做培養(yǎng)操作時(shí)，可穿裝細(xì)胞培養(yǎng)室內(nèi)紫外線照射30min的清潔工作服。在利用超凈臺工作時(shí)，因整個(gè)前臂要伸入箱內(nèi)，應(yīng)著長袖的清潔工作服，并于開始操作前要用75酒精消毒手。如果實(shí)驗(yàn)過程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。進(jìn)入原

21、代培養(yǎng)室需徹底洗手還要戴口罩、著消毒衣帽。,42,學(xué)習(xí)交流PPT,【火焰消毒】 在無菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意：金屬器械不能在為焰中燒的時(shí)間過長，以防退火，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會把有害物帶入營養(yǎng)液中。開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞。另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。,43,學(xué)習(xí)交流PPT,【操作】 進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動，增加污染機(jī)會。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。為拿取方便，工作臺面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過早暴露在空氣中。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過早開瓶；用過之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會。吸取營養(yǎng)液、PBS、細(xì)胞懸液及其它各種