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文檔簡介
1、放射性同位素檢測技術(shù),同位素示蹤法(isotopic tracer method)是利用放射性核素作為示蹤劑對研究對象進行標記的微量分析方法,示蹤實驗的創(chuàng)建者是Hevesy。Hevesy于1923年首先用天然放射性212Pb研究鉛鹽在豆科植物內(nèi)的分布和轉(zhuǎn)移。繼后Jolit和Curie于1934年發(fā)現(xiàn)了人工放射性,以及其后生產(chǎn)方法的建立(加速器、反應堆等),為放射性同位素示蹤法的更快的發(fā)展和廣泛應用提供了基本的條件和有力的保障,同位素示蹤法基本原理和特點,靈敏度高:它比目前較敏感的分析天平要敏感107-108倍,而迄今最準確的化學分析法很難測定到10-12克水平。 .方法簡便:不受其它非放射性物
2、質(zhì)的干擾,可以省略許多復雜的物質(zhì)分離步驟 。 定位定量準確:能準確定量地測定代謝物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和轉(zhuǎn)變 符合生理條件 :重量改變是微不足道 ,體內(nèi)生理過程仍保持正常的平衡狀態(tài) 。,示蹤實驗的設(shè)計的三個階段,實驗準備階段 正式實驗階段 放射性去污染和放射性廢物處理,實驗準備階段,示蹤劑的選擇 :選定放射性示蹤劑的比活度q的值必須足夠大,以保證實驗所需要的靈敏度,而又要盡可能地小,使得在該實驗條件下輻射自分解可忽略。 放射性同位素測量方法的選擇 :測量方法的選擇取決于射線種類,對于射線通??捎昧蚧\晶體、電離室、核乳膠等方法探測 。 進行非放射性的模擬實驗,把實驗全過程預演一遍,正式實驗階段,選擇放射性
3、同位素的劑量 :應以相關(guān)部位對示蹤劑的蓄積率來考慮示蹤劑用量。 選擇示蹤劑給入途徑:根據(jù)實驗目的,選擇易吸收、易操作的給入途徑 。 放射性生物樣品的制備:根據(jù)實驗目的和示蹤劑的標記放射性同位素的性質(zhì)制備放射性生物樣品 。 放射性樣品的測量:要糾正一些因素對測量結(jié)果的影響 。,放射性去污染和放射性廢物處理,放射性實驗,無論是每次實驗或階段性實驗結(jié)束后,都可能有不同程度的放射性污染和放射性廢物的出現(xiàn),因此,在實驗結(jié)束后,要作去污染處理和放射性廢物處理。必要時在實驗過程進行中,就要作除污染和清理放射性廢物的工作 。,同位素示蹤法在生物化學和分子生物學中的應用,放射性同位素示蹤法在生物化學和分子生物學
4、領(lǐng)域應用極為廣泛。近幾年來,同位素示蹤技術(shù)在原基礎(chǔ)上又有許多新發(fā)展,如雙標記和多標記技術(shù),穩(wěn)定性同位素示蹤技術(shù),活化分析,電子顯微鏡技術(shù),同位素技術(shù)與其它新技術(shù)相結(jié)合等。闡明了一系列重大問題,如遺傳密碼、細胞膜受體、RNA-DNA逆轉(zhuǎn)錄等,使人類對生命基本現(xiàn)象的認識開辟了一條新的途徑。,物質(zhì)代放謝的研究,體內(nèi)存在著很多種物質(zhì),究竟它們之間是如何轉(zhuǎn)變的,如果在研究中應用適當?shù)耐凰貥擞浳镒魇聚檮┓治鲞@些物質(zhì)中同位素含量的變化,就可以知道它們之間相互轉(zhuǎn)變的關(guān)系,還能分辯出誰是前身物,誰是產(chǎn)物 ,分析同位素示蹤劑存在于物質(zhì)分子的哪些原子上,可以進一步推斷各種物質(zhì)之間的轉(zhuǎn)變機制。,物質(zhì)轉(zhuǎn)化的研究,物質(zhì)
5、在機體內(nèi)相互轉(zhuǎn)化的規(guī)律是生命活動中重要的本質(zhì)內(nèi)容,在過去的物質(zhì)轉(zhuǎn)化研究中,一般都采用用離體酶學方法,但是離體酶學方法的研究結(jié)果,不一定能代表整體情況,同位素示蹤技術(shù)的應用,使有關(guān)物質(zhì)轉(zhuǎn)化的實驗的周期大大縮短,而且在離體、整體、無細胞體系的情況下都可應用,操作簡化,測定靈敏度提高,不僅能定性,還可作定量分析。,動態(tài)平衡的研究,闡明生物體內(nèi)物質(zhì)處于不斷更新的動態(tài)平衡之中,是放射性同位素示蹤法對生命科學的重大貢獻之一,向體內(nèi)引入適當?shù)耐凰貥擞浳?,在不同時間測定物質(zhì)中同位素含量的變化,就能了解該物質(zhì)在體內(nèi)的變動情況,定量計算出體內(nèi)物質(zhì)的代謝率,計算出物質(zhì)的更新速度和更新時間等等。,生物樣品中微量物質(zhì)的分析,在放射性同位素示蹤技術(shù)被應用之前,由于制備樣品時的丟失而造成回收率低以及測量靈敏度不高等問題,使得對機體正常功能起很重要作用的微量物質(zhì)不易被測定。近年來迅速發(fā)展、應用愈來愈廣泛的放射免疫分(radioimmunoassay)技術(shù)是一種超微量的分析方法,它可測定的物質(zhì)300多種,其中激素類居多,包括類固醇激素,多肽類激素,非肽類激素,蛋白質(zhì)物質(zhì),環(huán)核苷酸,酶,腫瘤相關(guān)的抗原,抗體以及病原體,微量藥物等其它物質(zhì)。,最近鄰序列分析法,放射性同位素示蹤技術(shù),是分子生物學研究中的重要手段之一,對蛋白質(zhì)生物合成的研究,從DNA復制、RNA轉(zhuǎn)錄到蛋白質(zhì)翻譯
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