中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

職業(yè)性慢性鉛中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則

Gs11504一89

Diagnosticcriteriaandprinciplesofmanagement

ofoccupationalchronicleadpoisoning

職業(yè)性慢性鉛中毒是生產(chǎn)中長(zhǎng)期接觸鉛煙或鉛塵所致的全身性疾病。其早期表現(xiàn)為葉啡代謝障礙、

神經(jīng)衰弱綜合征和消化系統(tǒng)癥狀，中毒較重時(shí)出現(xiàn)貧血、腹紋痛，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)鉛性麻痹或中毒性腦病。

1主頤內(nèi)容與適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了職業(yè)性慢性鉛中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于生產(chǎn)中接觸鉛煙或鉛塵而引起的慢性中毒。

2診斷原則

應(yīng)根據(jù)確切的職業(yè)史和以神經(jīng)、消化、血液系統(tǒng)損害為主的臨床表現(xiàn)及有關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查，參考作業(yè)

環(huán)境調(diào)查，進(jìn)行綜合分析后，方可診斷。

3診斷及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

3.1鉛吸收

有密切鉛接觸史，尚無(wú)鉛中毒的臨床表現(xiàn)，尿鉛)0.39pmol/L(0.08mg/L)或。.48pmol/24h

(0.1mg/24h);或血鉛)2.41pmol/L(50jig/d1-);或診斷性驅(qū)鉛試驗(yàn)后尿鉛)1.45pmol/L

(0.3mg/L)而<3.86pmol/1-(0.8mg/L)者。

3.2輕度中毒

3.2.1常有輕度神經(jīng)衰弱綜合征，可伴有腹脹、便秘等癥狀，尿鉛或血鉛量增高。具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，

可診斷為輕度中毒:

a.尿S-氨基乙酞丙酸)30.5pmol/1-(4mg/L)或45.8pmol/24h(6mg/24h);

b.尿糞葉琳半定量)(++);

c.血紅細(xì)胞游離原葉琳(FEP))2.311-mol/1-(130pg/d1-)，或紅細(xì)胞鋅原葉琳(ZPP))2.08

pmol/1-(130pg/d1-),

3.2.2經(jīng)診斷性驅(qū)鉛試驗(yàn)，尿鉛)3.86pmol/L(0.8mg/L)或4.82pmol/24h(1mg/24h)者。

3.3中度中毒

在輕度中毒的基礎(chǔ)上，具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，可診斷為中度中毒:

a.腹絞痛;

b.貧血;

c·中毒性周?chē)窠?jīng)病。

3.4重度中毒

具有下列一項(xiàng)表現(xiàn)者，可診斷為重度中毒:

a.鉛麻痹;

中華人民共和國(guó)衛(wèi)生娜1989一03一25批準(zhǔn)1990一02一01實(shí)施

GB11504一89

b.鉛腦病。

4治療原則

可用金屬絡(luò)合劑如依地酸二鈉鈣、二琉墓丁二酸鈉等驅(qū)鉛治療，同時(shí)輔以對(duì)癥療法。鉛吸收者是否

需予驅(qū)鉛治療，可根據(jù)具體情況而定。

5勞動(dòng)能力鑒定

5.1鉛吸收

可繼續(xù)原工作，3^-6月復(fù)查一次。

5.2輕度中毒

驅(qū)鉛治療后可恢復(fù)工作，一般不必調(diào)離鉛作業(yè)。

5.3中度中毒

驅(qū)鉛治療后原則上調(diào)離鉛作業(yè).

5.4重度中毒

必須調(diào)離鉛作業(yè)，并根據(jù)病情給予治療和休息。

6健康檢查的要求

鉛作業(yè)工人應(yīng)作就業(yè)前體檢，并每年定期體檢一次。體檢時(shí)需作內(nèi)科檢查、尿鉛或血鉛、尿糞葉琳或

尿s-氨基乙酞丙酸、紅細(xì)胞游離原外琳或鋅原葉琳測(cè)定。

7職業(yè)禁忌證

明顯貧血;

神經(jīng)系統(tǒng)器質(zhì)性疾病

明顯的肝、腎疾病;

心血管器質(zhì)性疾病;

妊娠和哺乳期婦女。

..…

皿bCde

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附錄A

尿中鉛的測(cè)定—雙硫膝比色法

(補(bǔ)充件)

Al原理

在酸性介質(zhì)中，利用硫酸、硝酸、高抓酸的氧化作用，破壞尿中的有機(jī)質(zhì)，使鉛呈離子態(tài)，然后在

pH8.5^-11.0與雙硫除反應(yīng)，生成紅色絡(luò)合物，經(jīng)氛仿萃取后比色定量。

A2儀器

分光光度計(jì)。

A3試荊

a.硫酸(優(yōu)級(jí)純);

b硝酸(優(yōu)級(jí)純)。

c.高抓酸(優(yōu)級(jí)純);

d.1.1XlO-amol/L(0.04/")酚紅指示劑:稱取0.1g酚紅放在小乳缽中，加2滴無(wú)鉛水研磨溶解，再

加無(wú)鉛水至250mL;

氯仿:每100mL抓仿中加1mL乙醉，

緩沖液:稱取100g檸檬酸溶于70mL無(wú)鉛水中，置冷水浴中，分次加入100mL氨水，邊加邊振

e.L

搖，冷卻后加人3g無(wú)水亞硫酸鈉，溶解后加氨水至250mL，將此液移至1L分液漏斗中，用透光度60%

雙硫腺抓仿溶液萃取鉛，至雙硫腺抓仿液保持綠色不變?yōu)橹?。再用適量抓仿洗去殘留的雙硫蹤至抓仿層

呈無(wú)色透明為止，棄去抓仿層，加500mL氨水，于冰箱內(nèi)保存;

g.1.5mol/L(10%)佩化鉀溶液:取10g銀化鉀(優(yōu)級(jí)純)，溶于無(wú)鉛水中，井稀釋至100mL;

h.雙硫腺抓仿溶液。雙硫腺的提純:溶解0.05g雙硫腺于50mL抓仿中，如有不溶物可過(guò)濾，然后

移入250mL分液漏斗中，用1,100氮水萃取2-3次(每次約25mL)，此時(shí)雙硫腺轉(zhuǎn)入氨水層中，合并氨水

溶液，過(guò)濾后放至分液漏斗中，用鹽酸酸化，使雙硫蹤析出，用抓仿萃取2-3次，每次約20mL，此時(shí)雙硫

腺轉(zhuǎn)入抓仿層，將此濃雙硫腺抓仿溶液用重燕餾水洗滌抓仿提取液2次，然后放在棕色瓶?jī)?nèi)，于冰箱中保

存。

取提純的雙硫蹤用抓仿稀釋至透光度為60%(于波長(zhǎng)510nm下測(cè)量);

1.雙硫腺洗除液:取10mL1.5mol/L(100o)氛化鉀溶液與30mL氨水混合，用無(wú)鉛水稀釋至500

mL;

1.鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取1.5984g硝酸鉛(1050C烘2h)，用少量水溶解，移入1L量瓶中，加10mL硝

酸，用無(wú)鉛水稀釋至刻度，此溶液濃度為4.8X10-'mol/L(1.0mg/mL)的鉛，作為貯備液，將此液用1:99

硝酸稀釋100倍，成為4.8X10-'mol/L(10pg/mL)的鉛溶液，作應(yīng)用液。

A4尿樣分析步駐

A4.1取50mL尿樣于錐形燒瓶中，同時(shí)另取2個(gè)錐形燒瓶，各加50mL無(wú)鉛水，作為空白對(duì)照，各加3

mL硫酸,5mL硝酸，加熱消化至炭化，離火稍冷。

A4.2加。.5mL高氯酸，搖勻，加熱使瓶?jī)?nèi)產(chǎn)生大量白色煙霧，繼續(xù)加熱使白色煙霧升至瓶口且溶液為

無(wú)色透明，取下放冷。

A4.3混色法:用40mL無(wú)鉛水分次溶解內(nèi)容物，并轉(zhuǎn)移至125mL分液漏斗中，加2滴階紅指示劑，搖

GB11504一89

勻。加緩沖液至溶液呈紅色，再加1mL緩沖液，冷卻后，加1mLl.5mol/L(10%)氛化鉀溶液，搖勻，加10

mL60緯透光度的雙硫蹤氯仿溶液，振搖100次，待分層后，將氯仿層用脫脂棉過(guò)濾，于波長(zhǎng)510nm下以

氯仿為參比液比色。

A4.4單色法:向混色法所得的雙硫腺鉛氯仿萃取液中加入30mL雙硫膝洗滌液，振搖50次，分層后吸

去水層，再加20mL雙硫蹤洗滌液，振搖30次，分層后，將抓仿層用脫脂棉過(guò)德。于波長(zhǎng)510nm下以氯仿

為參比液比色。

A5標(biāo)準(zhǔn)曲線的給制

A5.1取0,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9mL鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(相當(dāng)于0,1,3,5,7,9wg鉛)分別置于150mL錐形

燒瓶中

A5.2

A5.3

A5.4

A6

，各加50mL無(wú)鉛水。

各加3mL硫酸、5mL硝酸，加熱消化至水分蒸盡，離火稍冷。

按A4.2-A4.4操作，

以吸光度為縱坐標(biāo)，鉛量為橫坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

計(jì)算

根據(jù)測(cè)得樣品吸光度減去試劑空白吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得樣品中鉛的含量，按式(Al)計(jì)算:

尿中鉛的含量CPmol/L(mg/L)J=

樣品中鉛的含量CNcnol(Fig)D

分析樣品的體積C10-9L(mL))

.，.?，。二(Al)

A7說(shuō)明

A.本法的檢測(cè)下限為0.0006mg,

b.本法的回收率為98-100%,

e本法的精密度(以變異系數(shù)表示)為3.09.2%(1--9u&Pb范圍);

d.應(yīng)取新鮮尿樣進(jìn)行測(cè)定，如樣品需要放置，則按50mL尿加30mL硫酸保存;

e.所用試劑可根據(jù)空白試驗(yàn)結(jié)果，決定是否需要提純，一般試劑空白的吸光度不超過(guò)。.02;

f.玻瑞儀器使用前需用0.79mol/L(5%)硝酸浸泡、洗滌，再用無(wú)鉛水沖洗;

9.雙硫晾易被氧化，日光、高溫、一些金屬離子及氧化劑均能氧化雙硫膝為二苯硫代偕二蹤，因此

在提純、保存、分析各個(gè)環(huán)節(jié)應(yīng)注意保持雙硫蹤的純度和穩(wěn)定性;

h酚紅指示劑在酸性溶液中呈橙紅色，中性溶液中呈黃色，堿溶液中(PH8.5及以上時(shí))才呈紅

色。

附錄B

血中鉛的側(cè)定—無(wú)焰原子吸收光訟法

(補(bǔ)充件)

B1原理

血液經(jīng)稀硫酸處理后，隨即導(dǎo)入石墨爐原子化器原子化，并根據(jù)其特征譜線的吸收強(qiáng)度定量。

82儀器

配有石墨爐的原子吸收分光光度計(jì);

鉛空心陰極燈;

石璧管原子化器，

:，

.bC

218

GB11504一89

微量取樣器;

具塞聚四氟乙烯(塑料)樣品杯(管);

旋渦混勻器。

已e.f.

03試荊

‘鉛標(biāo)準(zhǔn)液:精確稱取光譜純金屬鉛1.0000g溶于少量濃硝酸后，移至1L容量瓶?jī)?nèi)，以超純水稀

釋至IL，此液濃度為4.8X10-'mot/L(1.0mg/mL),測(cè)試時(shí)將此液用0.024mot/L(G.15%)硝酸逐級(jí)稀

釋成4.8X10-'mol/L(0.1gg/mL)和9.7X10-'mol/L(0.2pg/mL)的鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液;

b.硝酸(MOS級(jí));

實(shí)驗(yàn)用水:由純水器制成的超純水(18MS2"cm)或?qū)⒅卣羲?jīng)石英亞沸蒸餾提純;

肝素。

c.d.

血樣分析步驟

.1取20pL血樣，置于盛有。.18mLO.024mol/L(0.15%)硝酸的具塞樣品杯中，充分搖勻使溶血。

試劑空白，以0.024mol/L(O.15%)硝酸作為試劑空白

自動(dòng)進(jìn)樣(手動(dòng)進(jìn)樣)10pL注入石墨管中進(jìn)行原子化，測(cè)其原子吸光度，測(cè)得樣品的吸光度減去

‘，J﹃J月‘q

B日BB

試劑空白吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，得樣品中鉛的含量，再乘以稀釋倍數(shù)。

B5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取新鮮人血(肝素抗凝)，用旋渦器充分混勻，在6個(gè)具蓋樣品杯中，分別加入鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液4.8x10-'

mol/L(0.1pg/mL)O.00,0.02,0.05,0.10,0.15mL和鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液9.7X10-'mol/L(0.2pg/mL)0.1mL,

用0.024mol/L(0.15%)硝酸使各管體積為0.18mL，加入正常人血20pL，此時(shí)各管相應(yīng)濃度為0-4.8

X10-'mol/L(0-100pg/L)，加蓋劇烈振搖，使其溶血，按上述分析步魏進(jìn)行測(cè)定，以不同濃度所測(cè)得的

吸光度為縱坐標(biāo)，鉛濃度為橫坐標(biāo)，繪成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

B6說(shuō)明

本法的檢測(cè)下限為2.08X10-emol/以0.43pg/L)稀釋血樣;

b.本法的回收率為98^-104%,

本法的精密度(以變異系數(shù)表示)為1.7^-4.2寫(xiě)(0.02^-0.05pgPb范圍);

d.使用的玻璃、塑料器皿及注射器等洗凈后，必須在1'1硝酸中浸泡過(guò)夜，用重蒸水淋洗干凈后，

最后用超純水至少淋洗三次，烘干包裝備用;

e.采血房間應(yīng)潔凈，防止環(huán)境中的鉛污染血樣;

f.采血時(shí)，用。.48mol/L(3%)硝酸棉球、超純水棉球、酒精棉球依次擦凈被檢者取血部位的皮

膚;

9.儀器工作條件(P-E3030型原子吸收分光光度計(jì)，HGA-500型石墨爐,AS-40自動(dòng)進(jìn)樣器):

波長(zhǎng)

燈電流

狹縫

石墨容器

能量

283.3nm

smA

so.

0.7nm

熱解涂層石墨管

59

原子化

凈化

載氣流量為300mL/min

原子化時(shí)停氣

10s

log

4S

9s

八﹄55

3nl

燥化

干灰

GB11504一89

附錄C

血中原.卜咐的測(cè)定—熒光光度法

(補(bǔ)充件)

C飛原理

原葉琳(FEP)為一熒光物質(zhì).血樣經(jīng)生理鹽水稀釋后，用乙酸乙醋和冰乙酸混和液破壞血中紅細(xì)

胞，使原葉琳溶解于混和液中，再以稀鹽酸萃取原葉琳，在激發(fā)光波長(zhǎng)403nm時(shí)，發(fā)射光在605nm波長(zhǎng)

處顯示其熒光譜峰，根據(jù)熒光強(qiáng)度定量。

C2儀器

離心機(jī):80-1型;

b.旋渦混合器,XW-80ffl,

c.電磁低壓吸引器:CX-1型;

d.具塞試管;

。.熒光分光光度計(jì)或930型熒光光度計(jì)。

c3試荊

。.肝素抗凝劑:取一支12500u肝素抗凝劑，用0.154mol/L(0.9%)氯化鈉溶液稀釋至25mL(500

u/mL);

b.50g/L(5%)硅藻土生理鹽水懸浮掖:稱取5g硅藻土(kiesl-gubr化學(xué)純)，以生理鹽水配制成

100mLa

c.40乙酸乙酷一冰乙酸混和液;

d.0.5mol/L鹽酸;

e原葉琳標(biāo)準(zhǔn)貯備液:用十萬(wàn)分之一天平精確稱取。.00100g原葉琳加入12.5mL鹽酸溶解，移

入100ml,容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，此溶液濃度為18pmoi/L(10.0pg/mL)原葉琳;

f.原葉琳標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液:取。.50mL貯備液置于50mL容量瓶中，用4,1乙酸乙醋一冰乙酸混合液稀

釋至刻度，此溶液為0.18pmol/L(0.1gg/mL)的原葉琳。

C4血樣分析步較

C4.1取20吐耳垂或手指血置于盛有0.1ml,肝素抗凝劑溶液的小試管中.加人2滴硅藻土生理鹽水懸

浮液，混勻.加入4.0mL乙酸乙醋一冰乙酸混和液。

C4.2另取2個(gè)小試管，一為空白管，一為標(biāo)準(zhǔn)管，各加2滴硅藻土生理鹽水懸浮液;在空白管中加入4.0

mL乙酸乙醋一冰乙酸混合液，標(biāo)準(zhǔn)管中加人。.5mL原葉琳標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(含原葉琳0.05。幼再加3.5mL

乙酸乙酷一冰乙酸混和液。

C4.3將溶液混勻后，離心(3000r/min)15min，將上清液分別移入25mL具塞試管中，各加4.0mLO.5

mot/L鹽酸，用旋渦混合器旋渦2min或手振搖5min，待分層后，棄去上層有機(jī)溶劑。

C4.4將下層稀鹽酸溶液在30min內(nèi)，分別用比色皿，在激發(fā)光波長(zhǎng)403nm狹縫10nm)、發(fā)射波長(zhǎng)

605nm(狹縫5nm)處，靈敏度3+0,測(cè)其熒光強(qiáng)度。

C5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取6支離心管，向各管中加入2滴硅藻土生理鹽水混懸液，然后配制表C1中標(biāo)準(zhǔn)系列:

220

GB11504一89

表表C1

管號(hào)

原葉啡標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液

CO.18pmol/L(0.Ipg/.L)),.L

4:1乙酸乙醋一冰乙酸混合液，

mL

原外嗽含量,pmol(Pg)

0.3

3.7

0.018(0.01)0.054(0.03)0.090(0.05)0.126(0.07)0.180(0.10)

將溶液混勻后，按上述操作步驟C4.3-C4.4進(jìn)行操作，以峰高(扣除空白的峰高)為縱坐標(biāo)，原葉

琳量為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注如用930型熒光光度計(jì)側(cè)定，則應(yīng)選用第一建色片波長(zhǎng)420nm(581G型光電比色計(jì)上42號(hào)濾色片);第二濾

色片波長(zhǎng)550nm#機(jī)械調(diào)零;調(diào)節(jié)10。開(kāi)關(guān)至最大;靈敏度開(kāi)關(guān)至5檔時(shí)，測(cè)定熒光強(qiáng)度.

C6計(jì)算

在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，根據(jù)樣品測(cè)得的峰高((cm或格數(shù))按式((C1)計(jì)算:

血中原葉琳(FEP)的含量印mol/L(ug/100mL血)〕

樣品管峰高((cm

標(biāo)準(zhǔn)管峰高(cm

或格數(shù))一空白管峰高((cm

或格數(shù))一空白管峰高(cm

、黯x1000·??(。，

說(shuō)明

…

︸了，rl了.，了

CCCC

C7

1本法的檢測(cè)下限為。.005wg,

2本法的回收率為9000^'100寫(xiě)。

3本法的精密度(以變異系數(shù)表示)為:

a.0.23^-1.06%(0.01^-0.14g)-熒光分光光度計(jì)。

b.0.24^-8.330x(0.01-0.1pg)-930型熒光計(jì)。

4樣品收集和保存的要求:

a.采血時(shí)，血樣中要加入肝素抗凝劑，防止血液凝固;

b.血樣要冷藏保存，一般可保存3天。

5操作中的有關(guān)注意事項(xiàng):

a.操作中使用的玻璃器皿，要用清潔液浸泡，不能用肥皂粉清洗

b.各種試劑一定要用去離子水配制。

附錄D

血中鋅原外琳的測(cè)定—儀器法

(補(bǔ)充件)

Dl原理

鋅原葉琳(ZPP)具有特征性的熒光光譜，在激發(fā)光波長(zhǎng)420nm時(shí)，發(fā)射光波長(zhǎng)為594nm，用表面

熒光法測(cè)量其熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量。

D2儀器

a·血液熒光計(jì)(AVIVHematofluorometet);

b.蓋玻片24mmX24mm,

Gs11504一89

c.血紅蛋白吸管。

D3血樣分析步驟

將ZPP標(biāo)準(zhǔn)片置于儀器的測(cè)量架上進(jìn)行測(cè)定，如顯示數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)片一致，說(shuō)明儀器工作正常。換上

清潔的蓋玻片，先測(cè)空白時(shí)的讀數(shù)，然后加一滴血(約10-20faL)，使鋪滿測(cè)量區(qū)測(cè)樣品讀數(shù)。

D4計(jì)算

如儀器測(cè)定值用pg/gHb表示，則需同時(shí)測(cè)定血紅蛋白，并用式(DD,(D2)計(jì)算:

ZPPpg/gHb=樣品讀數(shù)一空白讀數(shù)·..........................(D1)

ZPPCpmol/L(pg/dL))=ZPPpg/gHbXHbg/L(g%).....................(D2)

式中:Hbg/L—用氰化高鐵血紅蛋白法測(cè)定的1000mL血中血紅蛋白的克數(shù)。

D5注意事項(xiàng)

a.所用蓋玻片必須很清潔，如手指觸及測(cè)量區(qū)即能引起結(jié)果偏高;

b.血液標(biāo)本如未鋪滿測(cè)量區(qū)，或內(nèi)有氣泡，都能影響測(cè)定結(jié)果;

c.缺鐵性貧血患者鋅原葉琳亦可能增高;

d.本儀器宜在室溫1825℃下操作。

附錄E

尿中6-氮墓乙酸丙酸的測(cè)定—乙酸乙酩萃取比色法

(補(bǔ)充件)

E1原理

在pH為4.6及溫度100c的條件下，尿中8-氨基乙酞丙酸(8-ALA)與乙酞乙酸乙酷縮合生成毗咯

化合物。此化合物可被乙酸乙醋萃取，并與改良顯色劑(對(duì)二甲氨基苯甲醛)作用生成紅色化合物，根據(jù)

顏色深淺進(jìn)行比色定量。

E2儀器

a.具塞比色管(10mL)，具塞離心管((10mL);

b.離心機(jī);

c水浴鍋;

d.分光光度計(jì)。

E3試劑

a.乙酞乙酸乙醋;

b.乙酸乙醋;

c.乙酸鹽緩沖液(pH4.6):于700mL水中加入57mL冰乙酸,82g無(wú)水乙酸鈉，溶解后加水

1000mL;

d.對(duì)二甲氨基苯甲醛改良顯色劑:于50mL量筒中，依次加入30mL冰乙酸,1g對(duì)二甲氨基苯

甲醛,5mLll.6mol/L(70環(huán))高氯酸(原裝),5mL水，溶解后，用冰乙酸稀釋至50mL,混勻，轉(zhuǎn)人試劑

瓶中，貯于冰箱中;

e.S-ALA標(biāo)準(zhǔn)液

貯備液:準(zhǔn)確稱取氨基乙酞丙酸鹽酸鹽(8-ALA·HCl)12.8mg，用水溶解，并稀釋至100mL。此液濃

GB11504一89

度為71;'.8川nol/L(1mL=100pg)bALA,貯于冰箱中可保存兩個(gè)月以上，

應(yīng)用液:取貯備液10mL于100mL容量瓶中.并稀釋至刻度，此液濃度約等于76.28pmol/L(1mL

=10pg)b-ALA.

尿樣分析步駭

"1分別量取2mL尿樣于兩支10mL具塞比色管內(nèi)，各加人2mL乙酸緩沖液，混勻，其一為樣品

，另一為尿樣空白管。向樣品管中加人。.4mL乙酞乙酸乙醋，向尿樣空白管中補(bǔ)加。.4mL乙酸緩沖

，分別混勻，同時(shí)置沸水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫。

以下步驟按標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制E5.3-E5.5進(jìn)行。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的給制

則E4管液E4

1取10mL具塞離心管6支，按表El配制標(biāo)準(zhǔn)色列:

E5E5

表E1

，一--一-‘-一-一一--一一-一.-_

管號(hào)

b-ALA標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液,.L

水。.L

6-AL^含量.pmol(pg)

0.20.61.01.4

1.81.41.00.6

015.3(2)45.8(6)76.3(10)106.8(14)152.5(20)

.2各加2mL乙酸緩沖液，0.4mL乙酞乙酸乙醋，混勻，于沸水浴中加熱10min，取出冷至室溫。

.3各加4mL乙酸乙醋，加塞振搖50次，離心5min，取出靜置分層。

.4各取2mL乙酸乙酷萃取液，于另外6支10mL具塞比色管中，各加改良顯色劑2mL功口塞振

，靜置10min,

用比色皿在波長(zhǎng)553nm(或綠色濾光片)下，以乙酸乙醋作參比，測(cè)得各標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。

以吸光度(扣除空白吸光度)為縱坐標(biāo)，‘人LA量為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

ES助ES搖ES

E5.6

E6

計(jì)算

樣品管吸光度減去尿空白管吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線得樣品管中‘ALA含量(pmol(pg)).

尿中‘ALA的含量。mol/L(mg/L))

_~生顯史全叢A竺熟pmol(gg)3

分析樣品的體積C10-'L(mL))

.........(El)

E了說(shuō)明

二乙酸乙酷、乙酞乙酸乙醋最好為近期產(chǎn)品。改良顯色劑宜新鮮配制:

b.加入顯色劑后，應(yīng)靜置10min，比色應(yīng)在30min內(nèi)完成;

尿液易腐敗，可導(dǎo)致pH升高.影響測(cè)定結(jié)果。如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)將尿液保存在冰箱中;

其他與對(duì)二甲氮荃苯甲醛顯色劑反應(yīng)的陽(yáng)性物質(zhì)，由于不被乙酸乙醋萃取，故不干擾測(cè)定;

c.d，

e.測(cè)定尿樣時(shí)，可同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定(取2mL標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液)。

計(jì)算:

b-ALA(pmol/L(mg/L))=(書(shū)X0.02X纓11尹X10............(E2)

式中:(測(cè)定管吸光度;

O—空白管吸光度;

S-標(biāo)準(zhǔn)管吸光度。

GB11504一89

附錄F

尿中6-盆基乙政丙酸的測(cè)定—撅仿萃取比色法

(補(bǔ)充件)

Fl原理

尿中‘ALA與乙酞乙酸乙醋在pH6.8及100℃條件下，作用生成毗咯衍生物，與對(duì)二甲氨基苯甲醛

反應(yīng)生成紅色化合物，用氯仿提取，比色定量(尿中干擾物質(zhì)在弱酸性條件下先用正丁醉抽取去除)。

F2儀器

721分光光度計(jì)。

F3試劑

3.5mol/L(20%)乙酸溶液(V/V);

b.正丁醉(分析純);

氯仿(分析純);

d.0.5mol/L(M)磷酸鹽緩沖液(PH6.8):

0.5mol/以M)Na,HPO,溶液:稱取Na,HPO,"12H,089.54g，用蒸餾水稀釋至500mL,

0.5mol/L(M)NaH2P04溶液:稱取NaHzPO,"2H,030.01g，用燕餾水稀釋至500mL,

以上兩種溶液等量混合即成pH6.8磷酸鹽緩沖液;

0.2mol/L(M)二氯化汞液:稱取二氯化汞5.4304g，用蒸餾水稀釋至100mL置棕色瓶，保存在

37℃水溫箱中，

f.顯色劑:稱取對(duì)二甲氨基苯甲醛4g，加入冰乙酸128mLll.6mol/L(70%)濃高氯酸40mL,0.2

mol/L(M)二抓化汞液10mL，濃鹽酸40mL,混勻，置棕色瓶，冰箱備用;

9.乙酞乙酸乙酷磷酸鹽緩沖液:乙酸乙酸乙醋1份加入19份磷酸鹽緩沖液即成((Ir,}用時(shí)需振搖);

h.6-AL人貯存標(biāo)準(zhǔn)液。1;2,8pmo1/L(100pg/mL)〕準(zhǔn)確稱取氨基乙酞丙酸鹽酸鹽(CsHgNOs"HCI)

12.8mg置于100mL容量瓶中，用蒸餾水溶解并稀釋至刻度;

l.6-AL^應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液〔1.,2.5pmol/L(20pg/mL)):精確吸取‘ALA貯存標(biāo)準(zhǔn)液20mL,置于100

mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。

F4尿樣分析步駭

F4.1提取:于25mL具塞試管中加入尿液2mL,3.5mol/L(20%)乙酸溶液2mL及正丁醉8mL,緊塞，

用力振搖30s,靜置分層，另取具塞試管2只，作為空白管和測(cè)定管。各管加入經(jīng)正丁醉抽提后的下層尿

液0.5mLe

F4.2顯色:在測(cè)定管中加入1.5mL乙酞乙酸乙酷緩沖液，空白管中加入pH6.8磷酸鹽緩沖液1.5mL,

分別混勻后置沸水浴中加熱10min，取出用冷水迅速冷卻后，各管中加入2ml,顯色劑，混勻，放置10

min，加入抓仿8mL,緊塞振搖20次，分層后用水泵或毛細(xì)管吸棄上層水液。加入無(wú)水硫酸鈉約1g，振搖

除去水分，在1030min內(nèi)，用光徑(1cm)比色杯于556nm處比色，以空白管校正吸光度至零點(diǎn)，讀取

吸光度，查閱標(biāo)準(zhǔn)曲線。

F5標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取具塞試管6只，分別標(biāo)號(hào)為1,2,3,4,5,6,然后按表F1進(jìn)行操作:

224

GB11504一89

表F1

管號(hào)123456

表

6-AL^應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液〔1.9_.'..gmol/L(20pg/mL)),mL

蒸餾水，.L

相當(dāng)b-ALA含量，(pmol(pg))

0.40.81.2

1.61.20.8:.:

11.9(2)23.8(4)35.7(6)

47.6(8)59.500)

加3.5mol/L(20%)乙酸溶液2mL及正丁醉8mL，緊塞，用力振搖30s，靜置分層，吸取經(jīng)正丁醉抽

提后的下層液0.5mL于另外6只具塞試管中，然后按尿樣分析法中顯色步驟進(jìn)行操作，以1號(hào)管作空白

管，讀取各管吸光度讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

F6計(jì)算

測(cè)定時(shí)，尿液、乙酸和正丁醉混勻抽提后，下層液0.5mL仍相當(dāng)于原來(lái)的尿標(biāo)本0.5mL.

尿b-ALA(gmol/L(mg/L)〕二0.5mL尿內(nèi)

0.5mL尿中

b-ALA之pmol(pg)數(shù)‘標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出，X擊

b,ALA之pmol(pg)數(shù)X2·················??(F1)

F7說(shuō)明

當(dāng)尿中‘ALA含量在76.28pmol(10pg