中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB14752—2010

中華人民共和國衛(wèi)生部中華人民共和國衛(wèi)生部

發(fā)布

2010-12-21發(fā)布2011-02-21實(shí)施

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品添加劑維生素B2（核黃素）

GB14752—2010

I

前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替GB14752—1993《食品添加劑維生素B2（核黃素）》。

本標(biāo)準(zhǔn)與GB14752—1993相比,主要變化如下：

——鑒別試驗(yàn)增加了紫外-可見分光光度法和紅外分光光度法鑒別，修改了熒光法鑒別；

——砷指標(biāo)由≤3mg/kg修改為≤2mg/kg。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A和附錄B為規(guī)范性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

——GB14752—1993。

標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)免費(fèi)下載

GB14752—2010

1

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品添加劑維生素B2(核黃素)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于經(jīng)化學(xué)合成法及生物發(fā)酵法制得的食品添加劑維生素B2（核黃素）。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的

版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3化學(xué)名稱、分子式、結(jié)構(gòu)式和相對(duì)分子質(zhì)量

3.1化學(xué)名稱

7,8-二甲基-10-[（2S,3S,4R）-2,3,4,5-四羥基戊基]-3,10-二氫苯并蝶啶-2,4-二酮

3.2分子式

C17H20N4O6

3.3結(jié)構(gòu)式

N

N

N

H

N

OH

CH3

H3C

O

O

OHH

HO

HOH

H

3.4相對(duì)分子質(zhì)量

376.36（按2007年國際相對(duì)原子質(zhì)量）

4技術(shù)要求

4.1感官要求：符合表1的規(guī)定。

表1感官要求

項(xiàng)目要求檢驗(yàn)方法

色澤橙黃色

取適量樣品置于清潔、干燥的白瓷盤中，

在自然光線下，觀察其色澤和組織狀態(tài)，

嗅其氣味。

氣味微臭

組織狀態(tài)結(jié)晶性粉末

性狀

約在280℃時(shí)熔融，同時(shí)分解。溶液易變質(zhì)。在堿

性溶液中或遇光變質(zhì)更快

4.2理化指標(biāo)：應(yīng)符合表2的規(guī)定。

GB14752—2010

2

表2理化指標(biāo)

項(xiàng)目指標(biāo)檢驗(yàn)方法

維生素B2（核黃素）（以干基計(jì)），w/%98.0～102.0附錄A中A.4

比旋光度αm(20℃,D)/〔(o)·dm2·kg-1〕-120～-140附錄A中A.5

感光黃素的吸光度≤0.025附錄A中A.6

干燥減量，w/%≤1.5附錄A中A.7

灼燒殘?jiān)?，w/%≤0.3附錄A中A.8

重金屬（以Pb計(jì)）/（mg/kg）≤10附錄A中A.9

砷（As）/(mg/kg)≤2附錄A中A.10

標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)免費(fèi)下載

GB14752—2010

3

附錄A

（規(guī)范性附錄）

檢驗(yàn)方法

A.1安全提示

本標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)方法中使用的部分試劑具有毒性或腐蝕性，按相關(guān)規(guī)定操作，操作時(shí)需小心謹(jǐn)慎。

若濺到皮膚上應(yīng)立即用水沖洗，嚴(yán)重者應(yīng)立即治療。在使用揮發(fā)性酸時(shí)，要在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。

A.2一般規(guī)定

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T6682—2008中規(guī)

定的三級(jí)水。未指明的溶液為水溶液。

試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液和其他所需溶液，在未注明其他要求時(shí)，均按GB/T601、GB/T602、

GB/T603之規(guī)定制備。

A.3鑒別試驗(yàn)

A.3.1熒光試驗(yàn)

A.3.1.1方法原理

維生素B2（核黃素）具芳香環(huán)和雜環(huán)，有長共軛結(jié)構(gòu)的π→π*躍遷，具有熒光性，在酸、堿性

條件下及加入各種還原劑均會(huì)使維生素B2（核黃素）轉(zhuǎn)變?yōu)闊o熒光的物質(zhì)。

A.3.1.2試劑和材料

A.鹽酸溶液：1+2。

A.氫氧化鈉溶液：40g/L。

A.連二亞硫酸鈉。

A.3.1.3分析步驟

取約1mg實(shí)驗(yàn)室樣品，加100mL水溶解后，溶液在透射光下顯淡黃綠色并有強(qiáng)烈的黃綠色熒

光；分成二份：一份中加鹽酸溶液或氫氧化鈉溶液，熒光即消失；另一份中加連二亞硫酸鈉少許，

搖勻后，黃色即消褪，熒光亦消失。

A.3.2紫外-可見吸收光譜鑒別

A.3.2.1方法原理

維生素B2（核黃素）具苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有多個(gè)共軛雙鍵，其紫外-可見吸收光譜中有三個(gè)吸收峰（444

nm，375nm與267nm），用A444nm/A267nm及A375nm/A267nm的比值來鑒別維生素B2（核黃素）。

A.3.2.2試劑和材料

A.冰乙酸。

A.乙酸鈉溶液：14g/L。

A.實(shí)驗(yàn)室樣品溶液：避光操作。取約0.075g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.001g，置燒杯中，加1mL

冰乙酸與75mL水，加熱溶解后，加水稀釋，冷卻至室溫，移置500mL棕色容量瓶中，再加水稀釋至

GB14752—2010

4

刻度，搖勻；精密量取10mL，置100mL棕色容量瓶中，加7mL乙酸鈉溶液，并用水稀釋至刻度，搖

勻。

A.3.2.3儀器和設(shè)備

A.紫外-可見分光光度儀。

A.石英池（1cm）。

A.3.2.4分析步驟

取實(shí)驗(yàn)室樣品溶液掃描，在波長444nm±1nm、375nm±1nm與267nm±1nm處有最大吸收，

并測(cè)定吸光度（A），計(jì)算A375nm/A267nm的比值為0.31～0.33和A444nm/A267nm的比值為0.36～0.39。

A.3.3紅外光吸收?qǐng)D譜鑒別

A.3.3.1試劑和材料

溴化鉀：光譜純，干燥品。

A.3.3.2分析步驟

在紅外燈下進(jìn)行，以防止吸潮。

將實(shí)驗(yàn)室樣品和溴化鉀粉末置入瑪瑙乳缽中研勻，裝入壓片模具制備樣片并進(jìn)行掃描。本品的

紅外光吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜（附錄B）一致。

A.4維生素B2的測(cè)定

A.4.1方法原理

維生素B2（核黃素）具苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有多個(gè)共軛雙鍵，在波長444nm處有最大吸收，將樣品溶

液于該波長處測(cè)定吸光度，以百分吸光系數(shù)（

1%

1cm

E）計(jì)算即得其質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

A.4.2試劑和材料

A.4.2.1冰乙酸。

A.4.2.2乙酸鈉溶液：14g/L。

A.4.3儀器和設(shè)備

同A.3.2.3。

A.4.4分析步驟

取實(shí)驗(yàn)室樣品溶液（A.），在波長444nm±1nm處，以水為空白對(duì)照，測(cè)定吸光度（A）。

A.4.5結(jié)果計(jì)算

維生素B2（核黃素）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1，數(shù)值以%表示，按公式（A.1）計(jì)算：

1

2

5000

100%

323(1)100

A

w

mw

×

=×

××?×

……（A.1）

式中：

5000——實(shí)驗(yàn)室樣品稀釋體積，單位為毫升（mL）；

323——維生素B2（核黃素）的百分吸光系數(shù)（

1%

1cm

E）；

A——實(shí)驗(yàn)室樣品溶液(A.)的吸光度數(shù)值；

m——實(shí)驗(yàn)室樣品質(zhì)量的數(shù)值，單位為克（g）；

2

w——A.7測(cè)得的干燥減量的數(shù)值，%。

兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于1.5%。

標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)免費(fèi)下載

GB14752—2010

5

A.5比旋光度的測(cè)定

A.5.1方法原理

維生素B2（核黃素）的核糖醇側(cè)鏈2,3,4-位有三個(gè)不對(duì)稱碳原子，具有旋光活性，在堿性條件

下，呈左旋光性，以此檢查樣品的比旋度。

A.5.2試劑和材料

A.5.2.1二硝基苯肼試液：取1.5g2,4-二硝基苯肼，加20mL硫酸溶液（1+1），溶解后，加水使成

100mL，過濾。

A.5.2.2無醛乙醇：取2.5g乙酸鉛，置具塞錐形瓶中，加5mL水溶解后，加1000mL乙醇，搖勻，

緩緩加25mL乙醇制氫氧化鉀溶液（1→5），放置1h，強(qiáng)力振搖后，靜置12h，傾取上清液，蒸餾即得。

檢查：取25mL無醛乙醇，置錐形瓶中，加75mL二硝基苯肼試液，置水浴上加熱回流24h，蒸

去乙醇，加200mL硫酸溶液（2→100），放置24h后，應(yīng)無結(jié)晶析出。

A.5.2.3鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液：c（HCl）=0.1mol/L。

A.5.2.4無碳酸鹽氫氧化鉀溶液：取20g氫氧化鉀，加100mL無醛乙醇，放置過夜后，吸取上清液，

加無醛乙醇稀釋成0.1mol/L的溶液，用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液標(biāo)定后，再精密量取18mL，加新

沸過的冷水至100mL，搖勻。

A.5.2.5實(shí)驗(yàn)室樣品溶液：稱取約0.25g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.0001g，加無碳酸鹽氫氧化鉀溶液

溶解并定量稀釋制成每1mL中約含維生素B2（核黃素）5mg的溶液，搖勻。

A.5.3儀器和設(shè)備

A.5.3.1旋光儀。

A.5.3.2旋光測(cè)定管。

A.5.4分析步驟

取實(shí)驗(yàn)室樣品溶液，按GB/T613測(cè)定。

A.5.5結(jié)果計(jì)算

維生素B2（核黃素）的比旋光度

m

α（20℃，D）按公式(A.2)計(jì)算：

()20C,D

m

l

α

α

α

ρ

°=…………(A.2)

式中：

α

——測(cè)得的旋光角,單位為度(°)；

l——旋光管的長度,單位為分米(dm)；

α

ρ——溶液中有效組分的質(zhì)量濃度,單位為克每毫升(g/mL)。

A.6感光黃素的測(cè)定

A.6.1方法提要

維生素B2（核黃素）幾乎不溶于三氯甲烷，雜質(zhì)感光黃素溶于三氯甲烷，在440nm處有紫外

吸收，因此用三氯甲烷提取感光黃素，排除維生素B2（核黃素）的干擾后，在此波長處測(cè)定，作限

量檢查。但維生素B2（核黃素）在乙醇中稍有溶解，為克服測(cè)定時(shí)的干擾，所以必須使用無醇三氯

GB14752—2010

6

甲烷。

A.6.2試劑和材料

A.6.2.1無水硫酸鈉。

A.6.2.2無醇三氯甲烷：取500mL三氯甲烷，用水洗滌3次，每次50mL，分取三氯甲烷層，用無

水硫酸鈉干燥12h以上，用脫脂棉過濾，蒸餾，即得。臨用前配制。

A.6.3儀器和設(shè)備

A.6.3.1紫外-可見分光光度儀。

A.6.3.2石英池（1cm）。

A.6.4分析步驟

A.6.4.1實(shí)驗(yàn)室樣品溶液的制備：稱取約0.025g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.0001g，加10mL無醇三氯

甲烷，振搖5min，過濾。

A.6.4.2測(cè)定

取實(shí)驗(yàn)室樣品溶液，在波長440nm處，以無醇三氯甲烷為空白，測(cè)定吸光度（A）。

A.7干燥減量的測(cè)定

A.7.1儀器和設(shè)備

A.7.1.1扁形稱量瓶。

A.7.1.2恒溫干燥箱。

A.7.2分析步驟

稱取約0.5g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.0001g，置于105℃±2℃干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚

度不可超過5mm，105℃±2℃干燥至恒重。

A.7.3結(jié)果計(jì)算

維生素B2（核黃素）干燥減量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

2

w，數(shù)值以%表示，按公式（A.3）計(jì)算：

12

2

100%

mm

w

m

?

=×………………（A.3）

式中：

1

m——干燥前實(shí)驗(yàn)室樣品和稱量瓶的總質(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）；

2

m——干燥后實(shí)驗(yàn)室樣品和稱量瓶的總質(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）；

m——實(shí)驗(yàn)室樣品的質(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）。

取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.05%。

A.8灼燒殘?jiān)臏y(cè)定

A.8.1方法原理

樣品加硫酸經(jīng)灼燒后所留的硫酸鹽，用重量法測(cè)定。

A.8.2試劑和材料

硫酸。

A.8.3儀器和設(shè)備

A.8.3.1瓷坩堝。

A.8.3.2高溫爐。

標(biāo)準(zhǔn)分享網(wǎng)免費(fèi)下載

GB14752—2010

7

A.8.4分析步驟

稱取約1.0g實(shí)驗(yàn)室樣品，精確至0.0001g，置于已在550℃±50℃灼燒至恒重的瓷坩堝中，

用小火緩緩加熱至完全炭化，冷卻至室溫后，加1mL硫酸使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，移

入高溫爐中，在550℃±50℃灼燒至恒重。

A.8.5結(jié)果計(jì)算

維生素B2（核黃素）灼燒殘?jiān)馁|(zhì)量分?jǐn)?shù)

3

w，數(shù)值以%表示，按公式（A.4）計(jì)算：

34

3

100%

mm

w

m

?

=×……………（A.4）

式中：

3

m——?dú)堅(jiān)哇釄宓目傎|(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）；

4

m——坩堝的質(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）；

m——實(shí)驗(yàn)室樣品的質(zhì)量數(shù)值,單位為克（g）。

取平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果，兩次平行測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于0.02%。

A.9重金屬的測(cè)定

A.9.1方法原理

樣品中雜質(zhì)金屬在酸性（pH3.5）條件下，與硫化氫或硫化鈉試液顯色。樣品與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同法

測(cè)定，以此檢查其限度。

A.9.2試劑和材料

A.9.2.1硝酸。

A.9.2.2硫酸。

A.9.2.3鹽酸。

A.9.2.4甘油。

A.9.2.5乙酸銨。

A.9.2.6硝酸鉛。

A.9.2.7硫代乙酰胺。

A.9.2.8氨試液：400→1000。

A.9.2.9氫氧化鈉溶液：c（NaOH）=1mol/L。

A.9.2.10鹽酸溶液：c（HCl）=2mol/L。

A.9.2.11鹽酸溶液：c（HCl）=7mol/L。

A.9.2.12氨水溶液：c（NH3·H2O）=5mol/L。

A.9.2.13酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。

A.9.2.14乙酸鹽緩沖液（pH3.5）：取25g乙酸銨，加水25mL溶解后，加38mL7mol/L鹽酸溶液，

用2mol/L鹽酸溶液或氨水溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至3.5（pH計(jì)），用水稀釋至100mL，即得。

A.9.2.15硫代乙酰胺試液：取約4g硫代乙酰胺，精確至0.01g，加水使溶解成100mL，置冰箱中

保存。臨用前取5.0mL混合液（由1mol/L15mL氫氧化鈉溶液、5.0mL水及20mL甘油組成），加上

述1.0mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加熱20s，冷卻，立即使用。

A.9.2.16鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取約0.160g硝酸鉛，精確至0.0002g,置于1000mL容量瓶中，加5mL硝酸

與50mL水溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，移取10mL±0.02mL貯備液，置

GB14752—2010

8

于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL相當(dāng)于10μg的Pb）。配置與貯存用的玻

璃儀器均不得含鉛。

A.9.3分析步驟

按《中華人民共和國藥典》2005年版二部附錄VIIIH重金屬檢查法第二