1、梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),檢驗(yàn)科 李修敏,梅毒的病原學(xué),蒼白螺旋體：細(xì)長(zhǎng)螺旋形，原核微生物，長(zhǎng)7-14微米，不易著色，普通顯微鏡不易看到，可用暗示野顯微鏡觀測(cè)到。,人體的免疫學(xué)反應(yīng),非特異性抗心脂質(zhì)抗體可用牛心脂質(zhì)檢測(cè)出 抗梅毒螺旋體抗體可用梅毒螺旋體檢出,梅毒的血清學(xué)試驗(yàn),非螺旋體抗原血清試驗(yàn)（抗原：心磷脂 膽固醇 卵磷脂） 臨床意義：初篩 療效評(píng)價(jià) 復(fù)發(fā)及再感染的判斷,螺旋體抗原血清試驗(yàn)（抗原：精選的梅毒螺旋體抗原片段） 臨床意義： 診斷試驗(yàn) 是否感染過(guò)梅毒 無(wú)法評(píng)價(jià)療效,非螺旋體抗原血清試驗(yàn),鏡下判讀結(jié)果 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）Venereal Disease Research Labo

2、ratory 非加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）Unheated Serum Reaging 肉眼判讀結(jié)果 快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)Rapid Plasma Reaging 甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)(TRUST)Toludine Red Unheated Serum Test,試驗(yàn)方法（TRUST),試劑復(fù)溫（23-29） 試劑與血清等量混勻，水平轉(zhuǎn)動(dòng)8分鐘。 結(jié)果判斷：中等或大的紅色凝聚物為陽(yáng)性反應(yīng)；較小的紅色凝聚物為弱陽(yáng)性反應(yīng)；無(wú)凝聚物為陰性反應(yīng)。,存在的問(wèn)題,假陽(yáng)性 1、生物學(xué)假陽(yáng)性：見(jiàn)于瘤型麻風(fēng)、瘧疾、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、雅司病、回歸熱、鉤端螺旋體病、血吸蟲(chóng)病、包蟲(chóng)病、旋毛蟲(chóng)病、支原

3、體肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、結(jié)核病等疾 2、人為因素：試劑與血清反應(yīng)后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，因干燥在紙片上留下假性凝集；沒(méi)有做陰性對(duì)照，肉眼判定錯(cuò)誤；標(biāo)本錯(cuò)誤。 假陰性 反應(yīng)時(shí)間不足、反應(yīng)方式不正確、反應(yīng)溫度不夠、前帶現(xiàn)象。,螺旋體抗原血清試驗(yàn),熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHA) 梅毒螺旋體被動(dòng)微粒凝集試驗(yàn)(TPPA) ELISA法梅毒抗體檢測(cè) 膠體金法梅毒抗體檢測(cè),ELISA法梅毒抗體檢測(cè),全自動(dòng)酶免儀、全自動(dòng)洗板機(jī) 半自動(dòng)酶免儀、半自動(dòng)洗板機(jī) 手工法 操作步驟及原理同其它免疫項(xiàng)目,注意的問(wèn)題,實(shí)驗(yàn)器材的計(jì)量（酶免儀、洗板機(jī)、恒溫箱、冰箱、空調(diào)、生物安

4、全柜、精確移液器、量筒、振蕩器、溫度計(jì)） 環(huán)境溫度：室溫（18-23） 人員培訓(xùn) 樣本的要求 實(shí)驗(yàn)前試劑的復(fù)溫 精確的加樣：移液器的正確使用,續(xù)移液器的使用,吸液的操作 : 1、連接恰當(dāng)?shù)奈欤?、按下控制鈕至第一檔； 3、將移液器吸嘴垂直進(jìn)入液面下 1-6mm （視移液器容量大小而定）； 0.1-10ul 容量的移液器進(jìn)入液面下1-2mm 2-200ul 容量的移液器進(jìn)入液面下 2-3mm 1-5ml 容量的移液器進(jìn)入液面下 3 -6mm 注：為使測(cè)量準(zhǔn)確可將吸嘴預(yù)洗 3 次，即反復(fù)吸排液體 3 次。 4、使控制鈕緩慢滑回原位； -！5、移液器移出液面前略等待 1-3 秒； 1000ul 以

5、下停頓 1 秒 5-10ml 停頓 2-3 秒 . 6、緩慢取出吸嘴，確保吸嘴外壁無(wú)液體。,續(xù)移液器的使用,排液的操作 : 1、將吸嘴以一定角度抵住容量?jī)?nèi)壁； 2、緩慢將控制鈕按至第一檔并等待約 1 3 秒； 3、將控制鈕按至第二檔過(guò)程中，吸嘴將剩余液體排凈； 4、慢放控制鈕； 5、按壓彈射鍵彈射出吸嘴。,續(xù)移液器的使用,養(yǎng)護(hù)： 1、如液體不小心進(jìn)入活塞室應(yīng)及時(shí)清除污染物； 2、移液器使用完畢后，把移液器量程調(diào)至最大值，且將移液器垂直放置在移液器架上； 3、根據(jù)使用頻率所有的移液器應(yīng)定期用肥皂水清洗或用 60 的異丙醇消毒，再用雙 蒸水清洗并晾干； 4、避免放在溫度較高處以防變形致漏液或不準(zhǔn)； 5、發(fā)現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)找專業(yè)人員處理。,注意的問(wèn)題,加樣： 加酶標(biāo)液： 加底物： 加終止液： 震蕩： 蓋膜： 洗板： 洗滌液的要求 握板的要求,注意的問(wèn)題,比色： 孵育時(shí)間： 操作時(shí)差的問(wèn)題： 質(zhì)控問(wèn)題：內(nèi)部質(zhì)控、外部質(zhì)控 影響ELISA測(cè)定結(jié)果的干擾因素 外源性干擾因素：溶血、細(xì)菌污染、標(biāo)本保存不當(dāng)、標(biāo)本凝集不全、添加劑 內(nèi)源性干擾因素：RF、補(bǔ)體、嗜異性抗體等,結(jié)果解釋,圖標(biāo)演示,三種梅毒血清 學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果解釋,先天性梅毒的確證指標(biāo),暗示野查到梅毒螺旋體 患兒RPR滴度持續(xù)上升（出生后6個(gè)月內(nèi)每隔1