1、第十六節(jié) 球菌,生物學形態(tài),知識要點,球菌是一種呈球形或近似球形的細菌，對人類有致病性的球菌主要引起化膿性炎癥，故又稱化膿性球菌。 革蘭陽性球菌有葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌和腸球菌等，革蘭陰性球菌有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和布蘭漢菌等。,葡萄球菌是無芽胞細菌中抵抗力最強的細菌。 淋病奈瑟菌是性傳播疾病最常見的病原菌，形態(tài)與腦膜炎奈瑟菌相似。 腦膜炎奈瑟菌營養(yǎng)要求高。 0ptochin敏感試驗、膽汁溶茵試驗與菊糖發(fā)酵試驗可用于甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌的鑒別。,學習目標,掌握病原性球菌的生物學性狀及鑒定 熟悉病原性球菌的致病性及臨床意義。,第一節(jié) 葡萄球菌屬,葡萄球菌屬細菌因堆積成葡萄串狀而得名，

2、為最常見的化膿性球菌，廣泛分布于自然界、人和動物的體表及與外界相通的腔道中，多數(shù)為腐生或寄生菌。少數(shù)人可攜帶致病性葡萄球菌，醫(yī)務人員的帶菌率可高達70，而且多為耐藥性菌株，是醫(yī)院感染的重要傳染源?？梢鹌つw、黏膜及多種組織器官的化膿性炎癥。,(一)生物學性狀,1形態(tài)與染色葡萄球菌呈球形或略呈橢圓形，直徑0.51.5微米，無鞭毛、無芽胞，呈單個、成雙或葡萄串狀的革蘭陽性球菌。衰老、死亡和被吞噬后常呈陰性。 2培養(yǎng)特性與生化反應葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上易生長，需氧或兼性厭氧。在液體培養(yǎng)基中均勻混濁生長，最適pH為7.4。多數(shù)菌株耐鹽性強，接種至瓊脂平板過夜培養(yǎng)后可形成直徑2mm左右，呈

3、金黃色、白色、檸檬色等不透明、凸起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊的菌落。金黃色葡萄球菌在血平板上的菌落周圍有明顯的透明溶血環(huán)。葡萄球菌的生化活性強，能分解多種糖類、蛋白質(zhì)和氨基酸，角蟲酶陽性。,生物學特性,SPA,capsule,teichoic acid,peptidoglycan,莢膜多糖： 有利于細菌粘附,多糖抗原： 存在于細胞壁的磷壁酸 有群特異性。,3抗原構造與分類 (1)抗原構造： 葡萄球菌經(jīng)水解后，用沉淀法分析可得到2種抗原 1）蛋白質(zhì)抗原：主要為葡萄球菌A蛋白(SPA)，存在于細胞壁表面，90以上的金黃色葡萄球菌有此抗原，但含量有差異，是具有種、屬特異性的完全抗原。,2)多糖類抗原

4、：為半抗原，存在于細胞壁上，是金黃色葡萄球菌的一種重要抗原，具有型特異性。,SPA的作用有抗吞噬作用：SPA與吞噬細胞爭奪抗體的Fc段，從而降低抗體的調(diào)理作用。細菌檢測：SPA與IgGl、IgG2和IgG4的Fc段結合后IgG的Fab段仍能與相應抗原發(fā)生特異性結合，從而建立了協(xié)同凝集試驗 ，該試驗已廣泛用于多種細菌抗原的檢測。促分裂：SPA對T、B細胞是良好的絲裂原。,根據(jù)伯杰系統(tǒng)細菌學手冊第9版，葡萄球菌屬分為32個種及亞種。傳統(tǒng)的分型方法有根據(jù)產(chǎn)生的色素不同將葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌3種；按凝固酶產(chǎn)生與否分為凝固酶陰性與凝固酶陽性的葡萄球菌兩大類。按噬菌體分型

5、法將葡萄球菌分為5群26型。其他還有分子生物學方法，如質(zhì)粒圖譜分析和染色體DNA的脈沖電泳分型法等。,(2)分類,4抵抗力,葡萄球菌抵抗力強，為無芽胞菌中抵抗力最強的一種。在干燥膿汁中能生存數(shù)月，濕熱80，3060min才被殺死。在50gL苯酚、0.1氯化汞中1015min死亡。但對甲紫敏感，1:100000200000稀釋的甲紫溶液即可抑制其生長，故常用24的甲紫治療皮膚黏膜的感染。葡萄球菌對青霉素、磺胺、金霉素、紅霉素和慶大霉素較敏感，但近年來耐藥菌株逐年增多，對青霉素耐藥菌株達90以上。,(二)致病性,1致病物質(zhì) (1)凝固酶：金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生游離凝固酶(freecoagulase)

6、和結合凝固酶(boundcoagulase)兩種，前者分泌至菌體外，被血漿中的協(xié)同因子(cofactor)激活為凝血酶，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，導致血漿凝固。后者結合于菌體表面不釋放，能與纖維蛋白原結合，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白而引起細菌凝固，故又稱凝聚因子。金黃色葡萄球菌凝固酶均為陽性，凝固酶試驗是鑒定金黃色葡萄球菌的重要標志。,(2)葡萄球菌溶素：致病性葡萄球菌能產(chǎn)生多種葡萄球菌溶素(staphylolysin)。葡萄球菌溶素是損傷細胞膜的毒素，按其抗原性不同分為a、G、7、艿4種，對人致病的主要是a溶素。,(3)殺白細胞素：殺白細胞素是一種可溶性物質(zhì)，能破壞中性粒細胞和巨噬細胞，具有抵

7、抗宿主細胞的吞噬、增強侵襲力的作用。,(4)腸毒素：3050金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生腸毒素(enterotoxin)，已知有A、B、Cl、C2、C3、D、E、G和H等9個血清型，均能引起食物中毒。腸毒素的化學本質(zhì)為蛋白質(zhì)，10030min不被破壞。食物被產(chǎn)毒株葡萄球菌污染，在合適溫度下，經(jīng)810h，即可產(chǎn)生大量的腸毒素。食用含有腸毒素的食物，可發(fā)生急性胃腸炎，稱為食物中毒，其發(fā)病率占食物中毒的首位。,(5)剝脫毒素：剝脫毒素(exfoliatin)又稱表皮溶解毒素，主要由噬菌體群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生。可引起燙傷樣皮膚綜合征(剝脫性皮炎)，多見于新生兒及免疫功能低下者。,(6)毒性休克綜合征毒素一1：

8、毒性休克綜合征毒素一1由噬菌體工群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生，可引起機體發(fā)熱、多個器官系統(tǒng)的功能紊亂或毒性休克綜合征。,2所致疾病,(1)侵襲性疾?。褐饕鹁植炕蛉砘撔匝装Y。 皮膚及軟組織感染：如毛囊炎、癤、癰等，其特點是病灶局限，且與周圍組織界限清楚，膿汁黃而黏稠。 全身性感染：如敗血癥、膿毒血癥等。 內(nèi)臟器官感染：如支氣管炎、肺炎、膿胸、中耳炎、心包炎等。,(2)毒素性疾?。河山瘘S色葡萄球菌產(chǎn)生的外毒素引起。有食物中毒、假膜性腸炎、燙傷樣皮膚綜合征和毒性休克綜合征等。人對金黃色葡萄球菌有一定天然免疫力。當機體皮膚黏膜損傷或機體抵抗力下降時才易引起感染。病后能獲得一定免疫力，但作用不強、且不持

9、久，可再次感染。,金黃色葡萄球菌燙傷樣皮膚綜合征,(三)微生物學檢驗,1標本采集 根據(jù)葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集膿汁、滲出液、血液、尿液、糞便、痰液以及腦脊液等。,2檢驗方法,(3)鑒定,1)血漿凝固酶試驗 2)甘露醇發(fā)酵試驗 3)耐熱核酸酶試驗 4)腸毒素測定 5)SPA的檢測,第二節(jié) 鏈球菌屬,鏈球菌屬鏈球菌屬細菌種類繁多，廣泛分布于自然界、人及動物腸道和健康人鼻咽部，大多數(shù)不致病，是化膿性球菌中的常見細菌，為鏈狀或個別種成雙排列的革蘭陽性球菌。 鏈球菌引起人類的疾病主要有各種化膿性炎癥、猩紅熱、新生兒敗血癥、細菌性心內(nèi)膜炎、風濕熱以及腎小球腎炎等超敏反應性疾病。,第二節(jié) 鏈球菌屬

10、,一、鏈球菌 生物學性狀 1、形態(tài)與染色 球形，鏈狀排列，革蘭染色陽性(G+),第二節(jié) 鏈球菌屬,2.培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求高：血平板或含血清培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)為沉淀生長 血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同菌株溶血不一 。,第二節(jié) 鏈球菌屬,3、生化反應 觸酶陰性 分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 不分解菊糖，不被膽汁溶解 （鑒別甲型溶血性鏈球菌與肺炎鏈球菌）,第二節(jié) 鏈球菌屬,4、抗原構造 (1)蛋白質(zhì)抗原：或稱表面抗原。具型特異性，有M、T、R、S4種，位于C抗原外層。 (2)多糖抗原：或稱C抗原。為群特異性抗原，位于細胞壁。 (3)核蛋白抗原：或稱P抗原。無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉

11、。,第二節(jié) 鏈球菌屬,5、分類鏈球菌的分類 (1) 按產(chǎn)生溶血與否及溶血現(xiàn)象分類 甲型溶血性鏈球菌 乙型溶血性鏈球菌 丙型鏈球菌 (2)根據(jù)抗原結構分類 按鏈球菌細胞壁中多糖抗原不同，可分為A、B、C、D等20個群。,第二節(jié) 鏈球菌屬,(二)致病性 1致病物質(zhì) A群鏈球菌有較強的侵襲力，可產(chǎn)生多種外毒素和胞外酶。 (1)鏈球菌溶血素(streptolysin)：有溶解紅細胞、破壞白細胞和血小板的作用。分 “O” 和 “S” 兩種。對紅細胞、白細胞、心肌有毒性。臨床抗“O” 試驗檢測的是“O” 溶血素抗體。 (2)致熱外毒素(pyrogenicexotoxin)：又稱紅疹毒素或猩紅熱毒素，是人類

12、猩紅熱的主要毒性物質(zhì)。 (3)M蛋白：具有抗吞噬作用。,第二節(jié) 鏈球菌屬,2所致疾病 (1)化膿性感染：如丹毒、癰、膿皰瘡、 淋巴管炎、腦膜炎及產(chǎn)褥熱等。 (2)中毒性疾?。河芍聼嵬舛舅匾鸬男杉t熱。 (3)超敏反應性疾?。褐饕酗L濕熱和急性腎小球腎炎。,第二節(jié) 鏈球菌屬,(三)微生物學檢驗 檢驗方法 桿菌肽(bacitracin)敏感試驗 Optochin試驗 膽鹽溶菌試驗 血清學分類鑒定 抗鏈“O”試驗,第二節(jié) 鏈球菌屬,二、肺炎鏈球菌肺炎 (一)生物學性狀 1形態(tài)與染色 雙球菌，革蘭染色陽性 矛頭狀：平面相對 ，尖面相背 有厚莢膜 無芽胞 無鞭毛,第二節(jié) 鏈球菌屬,熒光染色,掃描電鏡,第

13、二節(jié) 鏈球菌屬,2培養(yǎng)特性 營養(yǎng)要求高，在含有葡萄糖、血清或腹水的培養(yǎng)基中才能生長。兼性厭氧。 液體培養(yǎng)初期渾濁生長，后因自溶酶變澄清,第二節(jié) 鏈球菌屬,3、生化反應 分解葡萄糖，乳糖，菊糖 膽汁溶菌：加入膽汁或10%去氧膽酸鈉，37， 5 10min，激活本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象,第二節(jié) 鏈球菌屬,4、抗原結構與分型 (1)莢膜多糖抗原：亦稱型特異性抗原，存在于肺炎鏈球菌的莢膜中，能溶于水 (2)菌體種特異性抗原：亦稱菌體多糖抗原，存在于肺炎鏈球菌細胞壁，為各型菌株所共有。 (3)M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類似，但抗原性不同。 5、抵抗力 肺炎鏈球菌抵抗力不強，加熱56、10

14、min死亡,第二節(jié) 鏈球菌屬,(二)致病性 1致病物質(zhì) 肺炎鏈球菌的致病力主要依靠其莢膜的抗吞噬作用。 蛋白黏附素、脂磷壁酸及肺炎鏈球菌溶素,第二節(jié) 鏈球菌屬,2所致疾病 大葉性肺炎:肺炎球菌主要引起人類大葉性肺炎 還可引起慢性支氣管炎，化膿性胸膜炎、鼻竇炎，中耳炎及化膿性腦膜炎等,第二節(jié) 鏈球菌屬,(三)微生物學檢驗,直接涂片鏡檢：,分離培養(yǎng)：,與甲鏈鑒別,菊糖分解試驗 膽汁溶菌試驗 Optochin敏感試驗 動物試驗,G+有莢膜的雙球菌,第三節(jié) 腸球菌屬,是人類腸道中的正常菌群，常見于腹部和盆腔感染所分離出的混合菌叢中，在分類上屬于鏈球菌科。 在引起醫(yī)院感染的革蘭陽性球菌中，腸球菌僅次于葡

15、萄球菌屬。,(一)生物學性狀 1形態(tài)與染色 腸球菌為革蘭陽性球菌，直徑0.62.0微米，呈單個、成雙或短鏈狀排列。瓊脂平板上生長的細菌呈球桿狀，液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞，無莢膜，個別腸球菌有稀疏鞭毛。,2培養(yǎng)特性與生化反應 腸球菌為需氧及兼性厭氧菌對營養(yǎng)要求較高 在含有血清的培養(yǎng)基上生長較好。接種血平板37過夜，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直徑為0.51.0mm的圓形菌落 腸球菌能分解多種糖類產(chǎn)酸。觸酶陰性，多數(shù)具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解毗略烷酮-萘基酰胺(PYR)。,3分類 腸球菌在Lancefield血清學分類上屬于D群目前將腸球菌屬分為18種細菌 4抵抗力 腸球菌抵

16、抗力較弱，但對大多數(shù)常用的抗菌藥物呈天然耐藥，第三代頭孢菌素類對其無效,(二)致病性 最常見于尿路感染。 腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于有嚴重基礎疾患的老年人、長期住院接受抗生素治療的免疫功能低下患者。,(三)微生物學檢驗 1標本采集 根據(jù)病種不同，可采集尿液、血液及膿性分泌物等。 2檢驗方法腸球菌檢驗程序 ( 1)直接鏡檢：可見單個、成雙或短鏈狀排列的卵圓形革蘭陽性球菌。 (2)分離培養(yǎng)：可用血平板或用選擇性培養(yǎng)基，如疊氮鈉膽汁七葉苷瓊脂進行分離培養(yǎng)。 (3)鑒定方法1)PYR試驗：是一種快速篩選鑒定試驗。,腸球菌瓊脂(膽鹽-七葉苷-疊氮,第四節(jié) 奈瑟茵屬和布蘭漢菌屬奈瑟菌屬(Neisseria

17、),是一群革蘭陰性雙球菌。 共同特點:是菌體成雙排列，如咖啡豆狀，無鞭毛，無芽胞，有菌毛。需氧，氧化酶和觸 酶陽性。 奈瑟菌屬包括腦膜炎奈瑟菌(N.rneningitidis)、淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae)、干燥奈瑟菌(N.sicca)、淺黃奈瑟菌(N.sud.f1ava)、金黃奈瑟菌(N.flavescens)、黏膜奈瑟菌(N.mocosa)等。人類是奈瑟菌屬細菌的自然宿主，對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。除淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜外，其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜,(一)腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌,腦膜炎奈瑟菌腦膜炎奈瑟菌俗稱腦菌(meningococcus)，是流行性腦脊

18、髓膜炎(簡稱流腦)的病原菌。 (一)生物學性狀 1形態(tài)與染色 腦膜炎球菌呈腎形或豆形，是成雙排列、坦面相對的革蘭陰性球菌，直徑0.60.8微米。人工培養(yǎng)后可成卵圓形或球形，排列不規(guī)則，單個、成雙或四個相聯(lián)等。在患者腦脊液中位于中性粒細胞內(nèi)。新分離株多有莢膜和菌毛。,2培養(yǎng)特性與生化反應 腦膜炎球菌專性需氧，初次分離時需510CO。環(huán)境才能生長。營養(yǎng)要求高，需在含有血液、血清等培養(yǎng)基中才能生長。常用培養(yǎng)基為巧克力(色)瓊脂平板、血平板和卵黃雙抗平板。最適生長溫度37，最適pH7.47.6。在巧克力平板上的菌落為圓形、扁平、光滑、半透明、邊緣整齊；在血平板上除具備上述特征外，不溶血；在卵黃雙抗培養(yǎng)

19、基上菌落較大且光滑、濕潤、扁平、邊緣整齊等。腦膜炎奈瑟菌能分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。不能分解蛋白質(zhì)，不液化凝固血清或明膠，氧化酶試驗陽性。,3抗原構造與分型 腦膜炎奈瑟菌主要抗原有莢膜多糖群特異性抗原、外膜蛋白型特異性抗原、脂多糖抗原和核蛋白抗原四種。根據(jù)莢膜多糖抗原的不同，可將腦膜炎奈瑟菌分為A、B、C、D、x、Y、Z、29E、W135、H、I、K和I，等13個血清群。其中H、I、K血清群是由我國學者發(fā)現(xiàn)的。我國流行的菌株以A群為主。,4抵抗力 腦膜炎奈瑟菌對外界環(huán)境和理化因素抵抗力弱，對干燥、熱均很敏感，在生理鹽水中僅能存活數(shù)小時，加熱60、5min即死亡。對寒冷極敏感，特別是新分離

20、的菌株，故采集標本和轉(zhuǎn)運均應注意保溫，用于接種的培養(yǎng)基亦需預溫。腦膜炎奈瑟菌對磺胺類、青霉素、鏈霉素均敏感。,(二)致病性,1致病物質(zhì)腦膜炎奈瑟菌的主要致病物質(zhì)是莢膜、菌毛和內(nèi)毒素。 菌毛：粘附于黏膜上皮細胞，利于定植； 莢膜：有抵抗吞噬的作用； 內(nèi)毒素：可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙，嚴重者可致 內(nèi)毒素休克、血栓、DIC等。,2所致疾病 腦膜炎奈瑟菌主要引起流腦，該菌主要寄居于人類鼻咽部，人群攜帶率為510，流行期間可高達2090。感染者以5歲以下兒童為主，6個月至2歲的嬰兒發(fā)病率最高。 傳染源： 病人和帶菌者，人是唯一易感宿主 傳染途徑： 呼吸道傳播，飛沫或接觸 普通型 三種臨床類型 暴發(fā)型 慢性

21、敗血癥型,1.標本,3.分離培養(yǎng)與鑒定,腦脊液、血液、出血點滲出液、鼻咽拭子 保暖、保濕、立即送檢，培養(yǎng)基預溫。,2.直接涂片鏡檢,中性粒細胞內(nèi)、外有革蘭陰性雙球菌 可作出初步診斷。,巧克力(色)培養(yǎng)基 直接凝集試驗 通過氧化酶試驗、觸酶試驗及 糖類發(fā)酵等生化反應作出鑒定。,4.快速診斷,對流免疫電泳 SPA協(xié)同凝集試驗,（三） 微生物學檢查,(一)生物學性狀,1形態(tài)與染色淋病奈瑟菌形態(tài)與腦膜炎奈瑟菌相似，直徑0.60.8肚m。常成雙排列，兩菌接觸面平坦，呈腎形或咖啡豆的革蘭陰性球菌。膿液標本中，大多數(shù)淋病奈瑟菌常位于中性粒細胞內(nèi)，但慢性淋病患者多分布于細胞外(彩圖169)。淋病奈瑟菌無芽胞，

22、無鞭毛，從患者體內(nèi)新分離株有莢膜和菌毛。,淋病奈瑟菌俗稱淋球菌(gonococcus)，是人類淋病的病原菌。,二 淋病奈瑟菌,2培養(yǎng)特性與生化反應淋病奈瑟菌對營養(yǎng)的要求比腦膜炎奈瑟菌更高，只能在巧克力平板和專用選擇培養(yǎng)基中生長，初次分離須供給5COz。最適溫度為3537，最適pH7.5。經(jīng)2448h培養(yǎng)后，形成圓形、凸起、灰白色、直徑0.51.0mm的光滑型菌落。根據(jù)菌落大小和色澤等分為T1T55種類型，新分離菌株屬T1、T2型，菌落小，有菌毛。人工傳代培養(yǎng)后，菌落可增大，或成扁平菌落，即T3、T4和T5型。菌落具有自溶性，不易保存。淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、蔗糖和麥芽糖

23、。氧化酶和觸酶試驗陽性。不產(chǎn)生靛基質(zhì)或硫化氫，硝酸鹽還原陰性。,3抗原構造與分型 淋病奈瑟菌的抗原至少有3類 菌毛蛋白抗原。 脂多糖抗原。 外膜蛋白抗原。 根據(jù)外膜蛋白抗原的不同，將淋病奈瑟菌分成A、B、C、D、E、F、G、H、N、R、S、T、U、V、W和X等16個血清型，在流行病學調(diào)查上有重要意義。4抵抗力淋病奈瑟菌對外界環(huán)境抵抗力低。不耐干燥、寒冷和熱。干燥環(huán)境僅存活12h，濕熱55、5min死亡，室溫下能活12d。在患者分泌物污染的衣褲、被褥、毛巾及廁所坐墊上，能存活1824h。對各種消毒劑極敏感。,(二)致病性,菌毛：粘附作用；抵抗吞噬。 外膜蛋白：有助于粘附。 IgA蛋白酶：能破壞黏

24、膜表面sIgA。 內(nèi)毒素：損害人體黏膜的重要因素。,1. 致病物質(zhì),淋病： 人類是淋病奈瑟菌的唯一宿主， 屬性傳播疾病(exually transmitted disease，STD) 主要通過性接觸引起泌尿道和生殖系統(tǒng)炎癥,淋病新生兒淋菌性結膜炎/新生兒膿漏眼： 新生兒由產(chǎn)道感染有淋病性陰道炎或子宮頸炎的孕婦， 胎兒經(jīng)產(chǎn)道娩出時可被感染。,(三)微生物學檢驗,1.標本,3.分離培養(yǎng)與鑒定,泌尿生殖道膿性分泌物，用無菌棉拭沾取， 子宮頸口表面分泌物， 標本采集后應注意保暖保濕，立即送檢接種,2.直接涂片鏡檢,中性粒細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)G雙球菌有價值,巧克力(色)培養(yǎng)基，5%10%CO2,4.快速診斷,SPA協(xié)同凝集實驗 ELISA檢查標本中細菌 核酸雜交及PCR檢測淋病奈瑟菌質(zhì)粒DNA等,三、卡他布蘭漢菌,卡他布蘭漢