ICS

G

中華人民共和國中華人民共和國國國家標準家標準

GB29686—2013

食品安全國家標準

豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

DeterminationofAvilamycinresiduesinedibletissuesofswinebyLiquid

Chromatography-tandemMassSpectrometricmethod

（電子版本僅供參考，以標準正式出版物為準）

2013-09-16發(fā)布2014-01-01實施

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部

中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會

發(fā)布

I

目目次次

目次.........................................................................I

前言........................................................................II

豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法.......................１

1范圍........................................................................１

2規(guī)范性引用文件..............................................................１

3原理........................................................................１

4試劑和材料..................................................................１

5儀器和設備..................................................................２

6試料的制備與保存............................................................３

6.1試料的制備.................................................................３

6.2試料的保存.................................................................３

7測定步驟....................................................................３

7.1提取.......................................................................３

7.2凈化.......................................................................３

7.3標準曲線的制備.............................................................４

7.4測定.......................................................................４

7.5空白試驗...................................................................５

8結果計算與表述..............................................................５

9檢測方法靈敏度、準確度、精密度..............................................６

9.1靈敏度.....................................................................６

9.2準確度.....................................................................６

9.3精密度.....................................................................６

附錄A........................................................................７

II

前前言言

本標準的附錄A為資料性附錄。

本標準系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標準。

１

豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量的測定

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1范圍范圍

本標準規(guī)定了豬可食性組織中阿維拉霉素殘留量檢測的制樣和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。

本標準適用于豬的肌肉、脂肪/皮、肝臟和腎臟中阿維拉霉素殘留量的檢測。

2規(guī)范性引用文件規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有

的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方

研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

GB/T1.1-2000標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫規(guī)則

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3原理原理

試料中殘留的阿維拉霉素，用丙酮提取，氫氧化鈉溶液水解，再用乙酸乙酯提取，氧化鋁固

相萃取柱凈化，以二氯甲氧苯酸為內(nèi)標物，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜APCI測定，內(nèi)標法定量。

4試劑和材料試劑和材料

以下所用的試劑，除特別注明外均為分析純試劑，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

4.1阿維拉霉素、阿維拉霉素殘留標示物DIA標準品：含量≥98％。

4.2內(nèi)標物：二氯甲氧苯酸標準品：含量≥98％。

4.3甲醇：色譜純。

4.4正己烷

4.5乙睛：色譜純。

4.6乙酸乙酯

4.7丙酮

4.8甲酸

２

4.9氫氧化鈉

4.10磷酸

4.11中性氧化鋁固相萃取柱：1000mg/6mL，或相當者。

4.121mol/L氫氧化鈉溶液：取氫氧化鈉4g，用水溶解并稀釋至100mL。

4.13洗脫液：取甲酸5mL，用乙腈溶解并稀釋至100mL。

4.141mg/mL阿維拉霉素和阿維拉霉素殘留標示物DIA標準貯備液：精密稱取阿維拉霉素和阿維拉

霉素殘留標示物DIA各10mg，分別于10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為1mg/mL

的阿維拉霉素和阿維拉霉素殘留標示物DIA標準貯備液。2～4℃保存，有效期1個月。

4.1510μg/mL阿維拉霉素和阿維拉霉素殘留標示物DIA標準工作液：精密量取1mg/mL阿維拉霉素

和阿維拉霉素殘留標示物DIA標準貯備液各1.0mL，分別于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻

度，配制成濃度為10μg/mL的阿維拉霉素和阿維拉霉素殘留標示物DIA標準工作液。2-4℃保存，有

效期1個月。

4.161mg/mL內(nèi)標物二氯甲氧苯酸標準貯備液：精密稱取二氯甲氧苯酸10mg，于10mL量瓶中，

用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為1mg/mL的二氯甲氧苯酸標準貯備液。2～4℃保存，有效期

1個月。

4.172μg/mL內(nèi)標物二氯甲氧苯酸標準工作液：精密量取1mg/mL二氯甲氧苯酸標準貯備液200μL，

于100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為2μg/mL的二氯甲氧苯酸標準工作液。

2-4℃保存，有效期1個月。

5儀器和設備儀器和設備

5.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配大氣壓化學電離源（APCI）。

5.2分析天平：感量0.00001g。

5.3天平：感量0.01g。

5.4冷凍高速離心機

5.5振蕩器

5.6旋渦混合器

5.7均質(zhì)機

5.8氮吹儀

5.9旋轉蒸發(fā)儀

３

5.10固相萃取裝置

5.11圓底燒瓶：50mL。

5.12離心管：15mL，50mL。

6試料的制備與保存試料的制備與保存

6.1試料的制備

取新鮮或冷凍空白或供試組織，絞碎，并使均質(zhì)。

——取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。

——取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。

——取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。

6.2試料的保存

-20℃以下保存。

7測定步驟測定步驟

7.1提取

稱取肌肉或脂肪試料（2±0.05）g、肝臟或腎臟試料（1±0.05）g，于15mL離心管中，加丙酮4

mL，渦旋5min，于6000r/min離心10min，取上清液，于50mL圓底燒瓶中。殘渣中加丙酮4mL，

重復提取兩次，合并3次上清液，于60℃旋轉蒸發(fā)至干，用1mol/L氫氧化鈉溶液4mL溶解殘余物，

轉至50mL離心管中，于70℃水浴2h，取出，用85％磷酸調(diào)pH至1.0，加乙酸乙酯4mL，混勻，

于6000r/min離心10min，取上清液于另一離心管中，重復兩次，合并3次上清液，加2μg/mL二氯

甲氧苯酸內(nèi)標0.5mL（空白試料除外），混勻備用。

7.2凈化

氧化鋁萃取柱用乙酸乙酯10mL活化，取備用液過柱，分別用正己烷5mL、乙酸乙酯5mL和甲

醇5mL淋洗，用洗脫液洗脫兩次，每次7mL，收集洗脫液，于50℃旋轉蒸發(fā)至干，用甲醇1.0mL溶

解殘余物，渦旋混勻，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定。

４

7.3標準曲線的制備

精密量取10μg/mL阿維拉霉素殘留標示物DIA標準工作液適量，用甲醇稀釋，配制成濃度為5、

50、100、200、400和800μg/L的系列標準溶液，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。以特征離子質(zhì)量色譜峰

面積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制標準曲線。求回歸方程和相關系數(shù)。

7.4測定

7.4.1液相色譜條件

色譜柱：C18（150mm×4.6mm，粒徑5μm），或相當者；

流動相：甲醇+水（50+50，v/v）；

流速：0.6mL/min

進樣量：10μg/L；

柱溫：40℃；

7.4.2質(zhì)譜條件

離子源：APCI；

掃描方式：負離子掃描；

檢測方式：選擇反應監(jiān)測；

蒸發(fā)溫度：400℃；

離子傳輸管溫度：275℃；

鞘氣壓力：25arb；

輔助氣壓力：5arb；

選擇反應監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù)見表1。

表表1阿維拉霉素選擇反應監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù)阿維拉霉素選擇反應監(jiān)測的優(yōu)化參數(shù)

藥物名稱相對保留時間

min

母離子

質(zhì)量數(shù)

定性離子及碰撞能量

v

定量離子及碰撞能量

v

阿維拉霉素殘

留標示物DIA

7.10249

249>189（23）

249>205（16）

249>205（16）

二氯甲氧苯酸

8.80219

219>159（18）

219>145（15）

219>175（8）

7.4.3測定法

7.4.3.1定性測定

通過試樣色譜圖的保留時間與相應標準品的保留時間、各色譜峰的特征離子與相應濃度標準溶液

５

各色譜峰的特征離子相對照定性。試樣與標準品保留時間的相對偏差不大于5％；試樣特征離子的相

對豐度與濃度相當混合標準溶液的相對豐度一致，相對豐度偏差不超過表2的規(guī)定，則可判斷試

樣中存在相應的被測物。

表表2定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差定性測定時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度50%20%至50%10%至20%≤10%

允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%

將供試試樣和標準溶液的定量離子面積之比作單點校正定量。

7.4.3.2定量測定

取試樣溶液和標準溶液，按外標法，以峰面積定量，標準溶液及試樣溶液中的阿維拉霉素響應值

均應在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。在上述色譜-質(zhì)譜條件下，阿維拉霉素標準溶液和空白添加試樣溶液中

特征離子質(zhì)量色譜圖見附錄A。

7.5空白試驗

除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作。

8結果計算與表述結果計算與表述

試料中阿維拉霉素殘留標示物（DIA）的殘留量（μg/kg）：按下式計算

mAs

VCsA

X

AiCsi

AsiCi

X----供試試料中DIA的殘留量，μg/kg；

CS----標準溶液中DIA的濃度，