1、目的基因的PCR擴增及其擴增產(chǎn)物的鑒定分析、綜合設(shè)置修訂性實驗，該實驗共包括以下6個部分的第一部分，目的基因選擇第二部分，PCR引物設(shè)置修訂第三部分，PCR實驗操作第四部分，PCR產(chǎn)物陽離子電泳鑒定第五部分，PCR產(chǎn)物測序鑒定第六部分，目的基因序列變異分析，第一部分的目的基因這些個3個基因在食道癌及其他多種腫瘤中表達，表明它們在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著重要的生物科學作用。 汕頭大學醫(yī)學院生物化學與分子生物學教室李恩民課題組對這些個三種基因進行了深入的研究，在國外雜志上發(fā)表了SCI收錄研究性論文20佚篇，已形成系列優(yōu)勢。 學生們可以查閱相關(guān)資料，選擇感興趣的基因進行PCR實驗。 ngal (neut

2、rophilgelatinase-associatedlipocalin )是中性粒細胞明膠酶相關(guān)載脂蛋白，是載脂蛋白(lipocalin )家族的一員。 NGAL基因的蛋白產(chǎn)物具有保護調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶9的活性，作為小分子鐵元素配合物結(jié)合蛋白質(zhì)與生物鐵代謝和天然免疫應答等相關(guān)。 另外，NGAL作為早期標志物，也有助于判斷缺血性腎損傷的程度。 NGAL基因、NGAL的mRNA信息在NCBI核酸數(shù)據(jù)庫有從不同實驗室注冊的多個版本，包括完全查詢密碼區(qū)的有BC033089和NM_005564等，查詢密碼長度為597 bp，查詢密碼198個氨基酸， n末端部長為20個氨基酸的信號肽序列(包含該氨基酸的

3、信號肽預測網(wǎng)站3358 www.CBS.dtu.dk/services/signalp /、信號肽(signal peptide):的任何分泌細胞蛋白質(zhì)或胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)等以前體多肽的形式合成， 其n端包括2001年汕頭大學醫(yī)學院生化和分子生物學教室李恩民課題組以永生化食道上皮細胞系SHEE和食道癌細胞系SHEEC作為對照，cDNA微陣列進行篩選，RNA印跡和RT-PCR進行鑒定，cDNA愛沙尼亞克朗測序后與GenBank 結(jié)果表明，NGAL基因在SHEEC中出現(xiàn)顯著差異，其cDNA序列與小鼠24p3、大鼠NRL (neu-related lipocalin )和人中性粒細胞NGAL具有較高的相似

4、性。 這提示NGAL基因可能在永生化食管上皮細胞球惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，可能是新的癌基因或促癌基因。 利用cDNA芯片檢測兩細胞球差異表達基因a .永生化食道上皮細胞系SHEE B .食道癌細胞系SHEEC， 篩選A B C，用逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測出NGAL是兩個細胞球的mRNA水平a .永生化食道上皮細胞系sheecb .食道癌細胞系SHEEC C. 100 bp DNA marker的Fascin蛋白的mRNA全長為2767bp，5末端非翻譯區(qū)111bp鹽化學基，3末端非翻譯區(qū)1174bp 由1482bp的全查詢密碼序列區(qū)和6個PloyA信號肽組成，查詢密碼493個氨基酸，分子量約55kD。

5、 Fascin蛋白位于細胞質(zhì)張力纖維和胞質(zhì)膜褶邊、絲狀偽足、微電腦音箱的核心肌動蛋白束中。 Fascin基因、既往研究表明，F(xiàn)ascin基因在子宮頸癌Hela、胃腫瘤AGS、大腸癌LM1215和SW480、胰腺癌BxPC3和T3H4等多種上皮源性腫瘤細胞系中表達上調(diào)。 提示細胞球絲狀偽足和微棘與細胞球運動、癌細胞轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系，F(xiàn)ascin蛋白可能在細胞球轉(zhuǎn)移、細胞粘接和細胞球間信息交換等過程中發(fā)揮作用。atgacccacgcacgcggtccagccagcctgaggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggggg

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13、dynkvaikvgrylkgdhagvlkasaetvdpaslwey、Fascin基因的查詢密碼區(qū)序列、Fascin基因的蛋白質(zhì)序列， Fascin蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)： Fascin在目前課題組所在食道癌中的具體功能和過度表達反應歷程目前還不清楚，該組由4個三葉草結(jié)構(gòu)組成，含有多個折疊日式榻榻米。 為此，我們建立和合成了以Fascin基因為靶的siRNA，試圖通過RNA干擾作用的方法減少Fascin基因的表達，探討Fascin對腫瘤分化、分裂增殖和浸潤等生物科學行為的影響。 掃描電鏡結(jié)果顯示，在抑制Fascin表達后，EC109細胞球突觸形成明顯減少。 細胞免疫熒光結(jié)果顯示，代表Fascin蛋

14、白的綠色熒光在被干擾作用細胞球(a )中比對照細胞球(b )弱，Ezrin基因、Ezrin是ERM(Ezrin，radixin，moesin )蛋白家族成員之一ERM家族蛋白是正丁酸激酶的接納體，通過Rho-GTP酶催化劑參與細胞信號。 Ezrin含有585個氨基酸，等電點為6.15，理論分子量為69kD。 Ezrin分子具有大量的電荷(38.5%的氨基酸殘化學基帶電荷)，這可能是理論分子量與實際分子量不同的原因(Ezrin的實際分子量為80kD )。Ezrin定位和染色體6q25.2-q26，DNA長度為1761鹽化學基，含有13個外顯子。atgccgaaccaatcatcccagtccac

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