1、氫譜屏蔽效應(yīng)：氫核周?chē)粩噙\(yùn)動(dòng)的電子影響，在外場(chǎng)的作用下，運(yùn)動(dòng)著的電子產(chǎn)生相對(duì)于外磁場(chǎng)方向的感應(yīng)磁場(chǎng)，起到屏蔽作用，使氫核實(shí)際受到的外磁場(chǎng)作用減小?；瘜W(xué)鍵的磁各向異性：如果由電子組成的化學(xué)鍵在空間形成小的磁場(chǎng)，與化學(xué)鍵不對(duì)稱(chēng)，則產(chǎn)生了磁各向異性，與外場(chǎng)相反，消弱了外場(chǎng)，屏蔽作用“+”,化學(xué)位移變小。與外場(chǎng)相同，去屏蔽作用。去偶法：用第一個(gè)振蕩器掃描Ha時(shí)，用第二個(gè)振蕩器掃描Hb使他發(fā)生共振，hb在兩種自旋之間迅速變化，Hb對(duì)Ha的兩種影響被抵消掉，這樣Ha就等于沒(méi)有受到影響，這就是去偶。核的NOE效應(yīng)：當(dāng)兩個(gè)人（組）不同類(lèi)型的質(zhì)子位于相近的空間距離時(shí)，照射其中的一個(gè)會(huì)使另一個(gè)質(zhì)子的信號(hào)增強(qiáng)。碳

2、譜碳譜的特點(diǎn)：耦合常數(shù)大：1H-1H耦合常數(shù)0-20Hz.碳原子常與氫原子連接，它們可以互相耦合，這種13C-1H 一鍵耦合常數(shù)的數(shù)值很大，一般在 125-250 Hz。因?yàn)?3C 天然豐度很低，這種耦合并不影響1H 譜，但在碳譜中是主要的。弛豫時(shí)間長(zhǎng)：13C 的弛豫時(shí)間比1H 慢得多，有的化合物中的一些碳原子的弛豫時(shí)間長(zhǎng)達(dá)幾分鐘，這使得測(cè)定 T1、T2等比較方便。另外，不同種類(lèi)的碳原子弛豫時(shí)間也相差較大，這樣，可以通過(guò)測(cè)定弛豫時(shí)間來(lái)得到更多的結(jié)構(gòu)信息。共振方法多：13C NMR 除質(zhì)子噪聲去耦譜外，還有多種其它的共振方法，可獲得不同的信息。如偏共振去耦譜，可獲得13C-1H 耦合信息；門(mén)控去

3、耦譜，可獲得定量信息等。因此，碳譜比氫譜的信息更豐富，解析結(jié)論更清楚?？臻g效應(yīng)：13C化學(xué)位移還易受分子內(nèi)幾何因素的影響。相隔幾個(gè)鍵的碳由于空間上的接近可能產(chǎn)生強(qiáng)烈的相互影響。通常的解釋是空間上接近的碳上 H 之間的斥力作用使相連碳上的電子密度有所增加，從而增大屏蔽效應(yīng)，化學(xué)位移則移向高場(chǎng)。羰基碳200 酯基碳170苯環(huán)連氧碳155苯環(huán)碳110-140縮酮（醛）105連氧碳60-80甲氧基55甲基碳10-20 OCH3：一般位于55-60 CH2OH:一般位于62左右 CHOH:一般位于60-80 C-OH:一般大于80 炔烴：C=65-90烯烴: C=100-150質(zhì)子寬帶去偶：C原子與直接

4、相連的H或鄰近C原子上的H 都有偶合-譜線復(fù)雜。采用雙照射：去偶射頻H2覆蓋所有類(lèi)型質(zhì)子共振頻率-去除所有質(zhì)子的偶合-每個(gè)C原子呈線狀單峰。質(zhì)子偏共振去偶： 將去偶射頻（H2）調(diào)在稍偏離1H核共振吸收位置 n x 102-103Hz處，可去除不直接相連的H核的偶合避免譜線交叉重疊,保留( 但減弱）直接相連的1H核的偶合-可區(qū)分1o、2o 、3o 、4o C原子-用于識(shí)別各類(lèi)C原子信號(hào)。選擇去偶：選擇去偶射頻（H2）只覆蓋一類(lèi)質(zhì)子的共振頻率，使與之相連的C原子消除偶合裂分-識(shí)別出與該類(lèi)質(zhì)子相連的C原子的信號(hào)。DEPT：無(wú)畸變極化轉(zhuǎn)移增強(qiáng)技術(shù)：采用脈沖序列，將高靈敏度的1H的信號(hào)強(qiáng)度轉(zhuǎn)移 到13C

5、核上并測(cè)定其 13C-NMR譜，改變照射1H的第三脈沖寬度q ，使作45（+）90（+xx） 135（+-+）變化。（CH-CH3）二維譜：1H-1H COSY譜：應(yīng)用1H-1H COSY譜解析化合物的結(jié)構(gòu)就是基于分子中相互偶合的氫之間在譜中會(huì)出現(xiàn)相關(guān)峰，出現(xiàn)相關(guān)峰的質(zhì)子之間可以是間隔3個(gè)鍵的鄰偶，也可以是間隔4個(gè)鍵以上的遠(yuǎn)程偶合，特別是偶合常數(shù)較小的遠(yuǎn)程偶合，在一維氫譜中有時(shí)很難觀察到，因而成為1H-1H COSY譜的一個(gè)優(yōu)勢(shì)。HMQC譜和HSQC譜：在二維圖譜的一側(cè)設(shè)定為1H的化學(xué)位移，而另一側(cè)設(shè)定為13C的化學(xué)位移，則所得二維譜稱(chēng)作13C-1H相關(guān)譜，由于對(duì)偶合常數(shù)范圍做了設(shè)定，圖譜上表

6、現(xiàn)出來(lái)的只是1JCH范圍內(nèi)的偶合關(guān)系。常規(guī)的13C-1H直接相關(guān)譜樣品的用量較大，測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)。HMQC技術(shù)很好地克服了上述缺點(diǎn)，HMQC是通過(guò)多量子相干間接檢測(cè)低磁旋比核13C的新技術(shù)。HMQC 的F1維（C）分辨率差是其較大的缺點(diǎn)。此外，在HMQC譜的F1方向還會(huì)顯示1H，1H之間的偶合裂分，它進(jìn)一步降低F1維的分辨率，也使靈敏度下降。由于這個(gè)原因，近年來(lái)，HSQC常用來(lái)代替HMQC，它不會(huì)顯示F1方向1H，1H之間的偶合裂分。HMQC和HSQC，尤其是HSQC由于測(cè)試要求的樣品量相應(yīng)減少，特別適用于中藥和天然藥物有效成分的結(jié)構(gòu)測(cè)定，是目前國(guó)內(nèi)外獲得碳?xì)渲苯舆B接信息最主要的手段。HMBC譜

7、：碳?xì)溥h(yuǎn)程相關(guān)譜，HMBC為1H檢測(cè)的異核多鍵相關(guān)譜，是通過(guò)多量子相干間接檢測(cè)低磁旋比核13C的新技術(shù)。 其目的是突出表現(xiàn)相隔2個(gè)鍵（2JCH）和相隔3個(gè)鍵（3JCH）的碳?xì)渲g的偶合。 但由于技術(shù)上的原因，尚不能完全去掉直接相連的碳?xì)渲g的偶合（1JCH）解析圖譜時(shí)要注意區(qū)別。 HMBC譜特別方便地應(yīng)用于結(jié)構(gòu)中存在較多角甲基的三萜和甾體等類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)研究和確定苷分子中糖和糖以及糖和苷元之間的連接位置。2D-INADEQUATE技術(shù)是利用雙量子躍遷現(xiàn)象，直接測(cè)定自然豐度條件下13C-13C偶合的方法。該技術(shù)具有兩種不同的脈沖序列： 一種脈沖序列得到的圖譜中相互偶合的兩個(gè)碳 原子作為一對(duì)雙峰排

8、列在同一水平上。 另一種脈沖序列得到的圖譜，與前面介紹的 同核相關(guān)譜中的相關(guān)峰一樣，相互偶合的兩個(gè) 碳原子各自作為一對(duì)雙峰出現(xiàn)在對(duì)角線兩側(cè)對(duì) 稱(chēng)的位置上。優(yōu)點(diǎn)：對(duì)某些結(jié)構(gòu)復(fù)雜而用普通光譜方法和化學(xué)手段難以確定結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，在無(wú)法制成單晶，因而不能應(yīng)用X射線單晶衍射技術(shù)確定結(jié)構(gòu)時(shí)，采用2D-INADEQUATE技術(shù)?？傻玫綕M意的結(jié)果。缺點(diǎn)：靈敏度很低，故測(cè)定時(shí)需要大量，樣品（幾十甚至幾百毫克），測(cè)定時(shí)間太長(zhǎng)（兩天以上），為了消除鄰位沒(méi)有13C存在的孤立的13C強(qiáng)信號(hào)需將脈沖序列做復(fù)雜的位相旋轉(zhuǎn)等。NOESY譜：是為了在二維譜上觀察NOE效應(yīng)而開(kāi)發(fā)出來(lái)的一種同核相關(guān)的二維新技術(shù)。在NOESY譜

9、上，分子中所有在空間上相互靠近的質(zhì)子間的NOE效應(yīng)同時(shí)作為相關(guān)峰出現(xiàn)在圖譜上，借此我們可以觀察到整個(gè)分子中質(zhì)子間在立體空間中的相互關(guān)系，推定分子的結(jié)構(gòu)，特別是分子的立體結(jié)構(gòu)。在HOHAHA譜中，每一個(gè)自旋系統(tǒng)的質(zhì)子間都會(huì)出現(xiàn)一組相關(guān)峰，這種技術(shù)對(duì)分子中含有多個(gè)質(zhì)子自旋系統(tǒng)的化合物，如中藥有效成分中常見(jiàn)的皂苷、環(huán)肽等類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)研究，具有非常重要的作用。所謂同一個(gè)質(zhì)子自旋系統(tǒng)，是指不被季碳或雜原子分隔開(kāi)來(lái)的結(jié)構(gòu)片斷。TOCSY譜所說(shuō)明的問(wèn)題和圖譜的解析方法與HOHAHA譜基本一致。質(zhì)譜電子轟擊質(zhì)譜(EI-MS)：樣品氣化后，氣態(tài)分子受一定能量的電子沖擊，使分子電離和裂解而產(chǎn)生各種陽(yáng)離子。優(yōu)點(diǎn)：

10、易于實(shí)現(xiàn)電離，重現(xiàn)性好，提供碎片信息多是最為常見(jiàn)的離子源。缺點(diǎn)：當(dāng)樣品相對(duì)分子質(zhì)量較大難以氣化或?qū)岱€(wěn)定性差時(shí)，常常得不到分子離子峰，因而不能測(cè)定這些樣品的相對(duì)分子質(zhì)量?；瘜W(xué)電離質(zhì)譜(CI-MS)：通過(guò)引入大量的試劑氣體產(chǎn)生的反應(yīng)離子與樣品分子之間的離子-分子反應(yīng)，使樣品分子實(shí)現(xiàn)電離。因此，樣品的離子是由分子離子反應(yīng)產(chǎn)生的，這樣產(chǎn)生的離子能量較小，故碎片較少。優(yōu)點(diǎn)：即使是不穩(wěn)定的化合物，也能得到較強(qiáng)的準(zhǔn)分子離子峰，即M1峰，從而有利于確定其分子量。缺點(diǎn)：碎片離子峰較少，可提供的有關(guān)結(jié)構(gòu)方面信息少。場(chǎng)致電離質(zhì)譜（FI)：兩極之間加幾千伏甚至上萬(wàn)伏穩(wěn)定直流電壓，在陽(yáng)極尖端附近產(chǎn)生E=107v/cm

11、2的強(qiáng)電場(chǎng)，可把陽(yáng)極尖端不到1mm中的原子或者分子中的電子拉出來(lái)，形成正離子。優(yōu)點(diǎn)：形成的離子束分散不大，所形成的離子主要是分子離子，因此較EI圖簡(jiǎn)單，分子離子峰較強(qiáng)，碎片峰較弱。特別適合于混合物的定性，定量分析。缺點(diǎn)：碎片峰少，可提供結(jié)構(gòu)信息少。場(chǎng)解吸質(zhì)譜（FD-MS）：將樣品吸附在作為離子發(fā)射體的金屬絲上送入離子源，只要在細(xì)絲上通以微弱電流，提供樣品從發(fā)射體上解吸的能量，解吸出來(lái)的樣品即擴(kuò)散到高場(chǎng)強(qiáng)的場(chǎng)發(fā)射區(qū)域進(jìn)行離子化。 FD-MS特別適用于難氣化和熱穩(wěn)定性差的固體樣品分析，如有機(jī)酸、甾體類(lèi)、糖苷類(lèi)、生物堿、氨基酸、肽和核苷酸等。特點(diǎn):碎片離子峰相對(duì)減少。用于極性物質(zhì)的測(cè)定，可得到明顯的

12、分子離子峰或M+1+峰，但碎片離子峰較少，對(duì)提供結(jié)構(gòu)信息受到一些局限。為提高靈敏度可加入微量帶陽(yáng)離子K+、Na+ 等堿金屬化合物于樣品中，可產(chǎn)生明顯的準(zhǔn)分子離子峰、M+Na+、M+K+和碎片離子峰。缺點(diǎn):測(cè)定技術(shù)難度較大，重現(xiàn)性不太理想?？煸愚Z擊質(zhì)譜(FAB-MS)：從離子槍射出的一次離子ArA+,經(jīng)加速后在碰撞室與ArB碰撞，并交換電荷，產(chǎn)生高速中性粒子ArA。該高速中性粒子進(jìn)一步撞擊試樣即可使之電離，得到分子離子及其進(jìn)一步裂解的碎片。碎片類(lèi)型與FD-MS基本相同。由于配備了陰離子捕獲器，還可給出相應(yīng)的陰離子質(zhì)譜，與陽(yáng)離子質(zhì)譜互相補(bǔ)充，大大增加了信息來(lái)源及可信程度。FAB-MS在結(jié)構(gòu)研究中

13、應(yīng)用比較普遍，適用范圍較廣，幾乎各類(lèi)天然成分都能利用它來(lái)測(cè)得分子量和獲得主要碎片離子的信息。同F(xiàn)DMS一樣，F(xiàn)AB-MS由于在電離過(guò)程中并末受到加熱，常用于難氣化、熱不穩(wěn)定、高極性化合物。特別是對(duì)于糖苷類(lèi)化合物的研究，除得到分子離子峰外，還可得到糖甚至苷元的結(jié)構(gòu)碎片峰，從而彌補(bǔ)了FD-MS。電噴霧電離質(zhì)譜 (ESI-MS)：樣品溶液從具有霧化器套管的毛細(xì)管流出時(shí)在電場(chǎng)作用下形成高度荷電的霧狀小液滴，在向質(zhì)量分析器移動(dòng)的過(guò)程中，液滴因溶劑的揮發(fā)逐漸縮小，其表面上的電荷密度不斷增大。當(dāng)電荷之間的排斥力足以克服表面張力時(shí)（瑞利極限），液滴發(fā)生裂分，經(jīng)過(guò)這樣反復(fù)的溶劑揮發(fā)一液滴裂分過(guò)程，最后產(chǎn)生單個(gè)多

14、電荷離子。ESI-MS應(yīng)用范圍較廣，既可分析大分子也可分析小分子。對(duì)于分子量在1000以下的小分子，會(huì)產(chǎn)生M + H+或MH離子，選擇相應(yīng)的正離子或負(fù)離子形式進(jìn)行檢測(cè)，就可得到化合物的分子量。而分子量高達(dá)20，000左右的大分子會(huì)生成一系列多電荷離子，通過(guò)數(shù)據(jù)處理也能得到樣品的分子量。電噴霧電離是很軟的電離方法，它通常很少或沒(méi)有碎片離子峰，常與色譜技術(shù)聯(lián)用。激光解吸離子源（LD）：激光解吸質(zhì)譜是分析非揮發(fā)性化合物的最常用方法之一，激光可看作是光子槍?zhuān)霉庾愚Z擊樣品產(chǎn)生樣品離子，用激光轟擊樣品常得到樣品分子與Na+,K+的加成離子，碎片離子的產(chǎn)生與激光的功率及樣品性質(zhì)有關(guān)。分子離子：有機(jī)化合物的分子受到外來(lái)電子撞擊后，絕大多數(shù)是失去一個(gè)電子，分子中帶有一個(gè)正電荷，這種帶正電荷的粒子就叫做分子離子。質(zhì)譜新技術(shù)二次離子質(zhì)譜：是通過(guò)帶能量的初次離子沖擊樣品表面而濺射出二次離子，經(jīng)過(guò)檢測(cè)器的分析而獲得結(jié)構(gòu)信息質(zhì)譜質(zhì)譜技