1、事故閱讀：血液由_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _和_ _ _ _ _ _ _ _組成的血細(xì)胞血細(xì)胞里的蛋白質(zhì)叫。屬于細(xì)胞液，功能是運(yùn)輸O2和CO2。紅細(xì)胞，血漿蛋白，內(nèi)部，血紅蛋白，1，基礎(chǔ)：(1)蛋白質(zhì)分離原理(2)蛋白質(zhì)分離和鑒定方法(1)凝膠色譜法2)傳記解凍方法(3)緩沖液的作用，1，蛋白質(zhì)提取和分離原理的物理和化學(xué)性質(zhì)差異1。分子的形狀，大小2。電荷性質(zhì)和多少3。溶解度4。吸附特性5。根據(jù)對(duì)其他分子親和力分離的蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量，利用網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用分離。1 .概念：(1)凝膠色譜法(分配色譜法)，性質(zhì)：小孔球體本質(zhì)：多糖化合物示例：葡聚糖，瓊脂糖，

2、2，原理：徐璐其他蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)較小，洗脫：從頻譜柱頂部持續(xù)注入緩沖液，促進(jìn)蛋白質(zhì)分子的通量，3，具體過(guò)程，演示凝膠色譜法蛋白質(zhì)分離過(guò)程的動(dòng)畫，1，凝膠色譜法蛋白質(zhì)分離時(shí)分子量大蛋白A長(zhǎng)，速度慢B長(zhǎng)，速度快C長(zhǎng)短，速度慢D長(zhǎng)短，速度快D，2，相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)，外酸調(diào)節(jié)緩沖劑的()可以制造可以使用的緩沖液。12，使用比例，在不同PH范圍內(nèi)，以弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿鹽溶于水。H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4等，3。問(wèn)題：牙齒主題中使用的緩沖區(qū)金額為3360 _ _ _ _ _，其目的是？確保模擬胞內(nèi)PH環(huán)境，血紅蛋白正常結(jié)構(gòu)和功能，觀察(紅色)和科學(xué)研

3、究(活性)，磷酸緩沖液，(3)，傳記電泳-血紅蛋白分離鑒定方法，1。概念：帶電粒子作用過(guò)程。2 .原理：多肽、核酸等許多重要的生物大分子所具有的基團(tuán)，在一定的PH時(shí)攜帶或攜帶牙齒基團(tuán)。在電場(chǎng)的作用下，牙齒帶電分子轉(zhuǎn)移到定向電極。傳記電泳在要分離的樣品中利用各種分子和分子本身的差異使帶電分子不同，從樣品中分離各種分子。電場(chǎng)，移動(dòng)，可分離，正電，負(fù)電，與電荷不同，電荷的差異，大小，形狀，移動(dòng)速度，影響蛋白質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)速度的因素，3，類型3360，瓊脂糖凝膠電泳(大分子)，聚丙烯酰胺凝膠電泳，聚丙烯酰胺凝膠是單體丙烯酰胺及交聯(lián)劑N，N-甲基雙丙烯酰胺(N-甲基雙丙烯)在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合而成的

4、具有交叉三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。N、N-甲基雙丙烯酰胺(交聯(lián)形成)、丙烯酰胺和交聯(lián)劑N、N-甲基雙丙烯酰胺交聯(lián)共聚反應(yīng)，原理：在聚丙烯酰胺凝膠中蛋白質(zhì)的遷移率取決于相同的因素。它擁有的純電荷的數(shù)量和分子的大小，作用機(jī)制：SDS產(chǎn)生蛋白質(zhì)()。用一條肽鏈聚合。SDS可以形成多種蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物，SDS攜帶的負(fù)電荷量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)蛋白質(zhì)分子的原始電荷量。因此，不同蛋白質(zhì)之間的電荷差異被掩蓋，傳記電泳遷移率完全取決于。分子大小，(2)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，完整變性，2，實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)階段，血液成分，1，樣品處理，3，精煉，4，純度檢查，2，粗分離，除雜血漿蛋白，低速短時(shí)間，5倍體積的生理鹽水，

5、3次，上清液不再呈黃色顯示，表明紅細(xì)胞的洗滌干凈，可以保持生理鹽水紅細(xì)胞的滲透壓不破裂。如果紅細(xì)胞提前破裂，則混合血紅蛋白及雜質(zhì)血漿蛋白，以提高分離的難度。(2)血紅蛋白釋放，1，在血紅蛋白釋放過(guò)程中，沖洗的紅細(xì)胞里放了什么物質(zhì)？2、為加快發(fā)布過(guò)程，采取了哪些措施？(使用磁攪拌器充分?jǐn)嚢?，目的分析：蒸餾水的作用是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _充分混合的目的是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

6、，紅細(xì)胞吸收率上升，細(xì)胞膜溶解，紅細(xì)胞破裂加速，分離過(guò)程，紅細(xì)胞混合液，(3)分離血紅蛋白液，(1)層(頂部):甲苯層(無(wú)色透明)，2層(中上方):脂溶性物質(zhì)沉淀層(白色薄層)把透析信封放在溶液里透析。(2)透析的原理是：(3)透析的目的是讓透析、玻璃紙、腸、膀胱膜、磷酸緩沖、透皮袋自由進(jìn)出小分子，把大分子放在口袋里，從樣品中清除分子量小雜質(zhì)。透析過(guò)程動(dòng)畫演示。制作底部插頭：鉆一個(gè)洞，挖一個(gè)凹洞，挖一個(gè)移動(dòng)管頭，蓋上尼龍網(wǎng)，用100頸尼龍紗包起來(lái)，插入玻璃管的一端。塔插頭制作：鉆孔安裝玻璃管。組裝：根據(jù)上述三者的位置將它們組裝成一個(gè)。安裝其他子結(jié)構(gòu)。凝膠頻譜柱的制作，(2)凝膠頻譜柱的填充，凝

7、膠的選擇：A，材料：交叉葡聚糖凝膠(G-75)。b，意思：“G”表示凝膠的交叉程度、膨脹程度和分離范圍。75表示凝膠的得數(shù)值，即每次凝膠膨脹時(shí)吸收7.5克。凝膠的預(yù)處理：計(jì)算了一定量的凝膠浸泡在蒸餾水或洗滌劑液中，充分溶解后配制凝膠懸浮液。凝膠頻譜柱的填充方法：A，固定：將頻譜柱裝置固定在支架上。b，充電：一次慢慢地將凝膠懸浮液倒入彩色頻譜柱，充電時(shí)輕拍彩色頻譜柱，使凝膠均勻填充。注：p70 1，填充凝膠時(shí)盡量緊密，減少凝膠顆粒之間的間距。2.填充凝膠柱的時(shí)候泡沫存在，就會(huì)渡邊杏存在。因?yàn)榕菽瓟_亂了洗滌劑中蛋白質(zhì)的溶出順序，降低了分離效果。，(2)凝膠頻譜柱的填充，洗滌平衡：安裝后連接緩沖液洗

8、滌劑瓶，在50cm的高工作壓力下用300ml的20mmol/L磷酸緩沖液(pH 7.0)充分洗滌平衡12h。把凝膠填滿。注意：1，不要讓液面低于凝膠表面。否則會(huì)混合泡沫，影響分離效果。2、不會(huì)發(fā)生洗脫流，可能發(fā)生凝膠顆粒顯露的現(xiàn)象。(2)凝膠頻譜柱的填充，50厘米高，緩沖液調(diào)節(jié)：打開(kāi)底部出口，將柱內(nèi)的緩沖液慢慢降低到與凝膠面相同的水平，關(guān)閉出口。透析樣品：吸管將1ml樣品放在顏色頻譜柱的頂部，滴樣品時(shí)吸管噴嘴貼在管壁上進(jìn)行移動(dòng)加形，同時(shí)注意不要破壞凝膠面。重新調(diào)整緩沖液：添加樣品后，打開(kāi)底部出口，將樣品滲透到凝膠床內(nèi)，樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉底部出口。將PH=7.0的20MMMOL/L的磷酸

9、緩沖液小心地放在適當(dāng)?shù)母叨惹逑?。連接緩沖液洗滌瓶，打開(kāi)底部出口洗滌。收集：紅色中的蛋白質(zhì)接近頻譜柱底部時(shí)，用試管收集流出液，每5毫升收集試管繼續(xù)收集。(3)添加和洗脫樣品，正確的追加工作為1，不要碰，破壞凝膠面。2、貼紙加樣品。3、讓吸管噴嘴沿管壁移動(dòng)。添加透析樣本，頻譜柱制作成功標(biāo)志：紅色帶均勻移動(dòng)，(4)，純度鑒定：SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，注意事項(xiàng)，1。紅細(xì)胞洗滌：洗滌次數(shù)太少，會(huì)渡邊杏。低速短時(shí)間離心。2.凝膠的預(yù)處理：沸水浴法，還可以去除微生物和氣泡。3。彩視柱的充電：充電盡可能緊密。沒(méi)有氣泡，洗脫液被切斷后渡邊杏。4.顏色頻譜柱成功標(biāo)記：紅色條帶均勻移動(dòng)。處理的血液樣本離心后是否分

10、層，如果分層不明確，則清洗次數(shù)少，可能是血漿蛋白去除失敗的原因。此外，離心速度過(guò)高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞會(huì)一起沉淀，沒(méi)有純紅細(xì)胞，會(huì)影響后續(xù)血紅蛋白提取的純度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析和評(píng)價(jià)，1，你完成血樣處理了嗎？您能說(shuō)明處理后樣品發(fā)生了什么變化嗎？2，你充電的凝膠柱里有氣泡嗎？你的色譜成功填充了嗎？你是怎么判斷的？1，凝膠是半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁邊放置垂直于凝膠柱的熒光燈，以確保凝膠均勻填充。2、添加藍(lán)色葡聚糖2000或紅色葡聚糖等大分子的著色物質(zhì)，觀察帶狀移動(dòng)。如果絲帶均勻、窄、平坦，就表明凝膠頻譜柱性能良好。3.顏色欄上有花紋或起泡沫，輕敲柱子去除泡沫，不能去除的時(shí)候，要重新安裝柱

11、子。如果凝膠頻譜柱填充成功，分離工作也正確，可以清楚地看到血紅蛋白紅色帶均勻、狹窄、平坦、洗滌劑慢慢流出。如果紅色帶扭曲、混亂和擴(kuò)大，則意味著分離效果不好。這與凝膠頻譜柱的填充有關(guān)。3，能觀察蛋白質(zhì)的分離過(guò)程中紅色區(qū)域的運(yùn)動(dòng)嗎？請(qǐng)解釋紅色樂(lè)隊(duì)的動(dòng)作，并相應(yīng)地判斷分離效果好嗎？教育反饋，1凝膠色譜法是根據(jù)()分離蛋白質(zhì)的有效方法。a分子的大小B起到了相對(duì)于分子質(zhì)量的大小C帶電荷的D溶解度2緩沖液的作用。在一定范圍內(nèi)抵抗外界影響()，基本上是不變的。a溫度B pH C滲透壓D氧濃度3傳記靈動(dòng)是指在電場(chǎng)作用下向帶電荷的電極移動(dòng)的傳記粒子。a與B相反，C以D為基準(zhǔn)面對(duì)4。哺乳動(dòng)物和人的成熟紅細(xì)胞中，與

12、氧氣輸送有關(guān)。A血紅蛋白B肌球蛋白C肌動(dòng)蛋白D肌球蛋白，B，B，B，A，5血液在血漿和各種血細(xì)胞中含量最高。a白細(xì)胞B血小板C紅細(xì)胞D淋巴細(xì)胞6為防止血液凝固，應(yīng)事先在采血容器中添加抗凝血?jiǎng)?。A.NaCl B .甲苯c .蒸餾水d .檸檬酸鈉7將攪拌混合液轉(zhuǎn)移到離心管后，可以清楚地看到試管中的溶液分為4層。其中3層是()A無(wú)色透明的甲苯層B脂溶性物質(zhì)的沉淀層C血紅蛋白水溶液D其他雜質(zhì)的深色紅色沉淀物，C，D；(2)在a裝置中，b是血紅蛋白溶液，a是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _；C溶液在乙設(shè)備中的作用是_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

13、_ _ _ _ _ _。(3) a裝置_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 將血紅蛋白分隔到乙設(shè)備時(shí)_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _，運(yùn)輸練習(xí)：提取和分離血紅蛋白的部分實(shí)驗(yàn)裝置，如圖所示，回答以下問(wèn)題：1。a .它是根據(jù)分子量的大小分離蛋白質(zhì)的方法之一。使用的凝膠實(shí)際上是一些小孔球體，牙齒小球體大部分由多糖化合物組成，小球體內(nèi)部有很多貫穿通道。當(dāng)含有各種分子的樣品溶液緩慢流動(dòng)時(shí)，每個(gè)分子在色譜柱內(nèi)進(jìn)行兩種茄子不同的運(yùn)動(dòng)，即垂

14、直向下運(yùn)動(dòng)和不規(guī)則擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。相對(duì)大的分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒，相對(duì)小的分子質(zhì)量的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過(guò)長(zhǎng)度長(zhǎng)，移動(dòng)速度慢。因此，樣本中相對(duì)分子質(zhì)量大的蛋白質(zhì)先流出，相對(duì)分子質(zhì)量中等的分子流出，相對(duì)分子質(zhì)量最小的分子最后流出，這種現(xiàn)象也稱為分子篩現(xiàn)象。1.凝膠色譜法蛋白質(zhì)分離原理是什么？課后練習(xí)，在A :一定范圍內(nèi)對(duì)抗少量江珊、強(qiáng)堿或少量稀釋，對(duì)溶液pH沒(méi)有發(fā)生明顯變化的作用稱為緩沖作用。具有緩沖作用的溶液稱為緩沖溶液。緩沖溶液通常是由一兩個(gè)茄子緩沖劑溶于水而制成的。調(diào)整緩沖劑的比例，可以徐璐制作其他pH范圍的緩沖液。緩沖溶液作用保持反應(yīng)體系的pH值不變。在體內(nèi)執(zhí)行的各種生物化學(xué)過(guò)程都在正確的pH上進(jìn)行，并由氫離子濃度嚴(yán)格控制。為了在實(shí)驗(yàn)室條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的自然環(huán)境，體外生物化學(xué)反應(yīng)過(guò)程與體內(nèi)過(guò)程完全相同的pH .2。什么是緩沖溶液，它的作用是什么？原理：傳記游泳是指在傳記電場(chǎng)的作用下電流的粒子移動(dòng)過(guò)程。許多重要的生物大分子，例如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等，都有一個(gè)在特定pH上帶正電或負(fù)電的可分離基團(tuán)。在電場(chǎng)的作用下，