1、,趙旺勝 江蘇省人民醫(yī)院 2010.7.8,自身免疫性疾病 及自身抗體檢測的應用,臨床上有些疾病可明確診斷（如肺炎、肝炎、結核病、艾滋病、高血壓），還有許多疾病難以診斷或治療效果差，常常讓臨床醫(yī)生感到棘手和困惑，這就是自身免疫性疾病。,自身免疫性疾病,自身免疫耐受（autoimmune-tolerance）: 正常情況 下，機體免疫系統(tǒng)能識別“自我”，對自身組織 成分不發(fā)生免疫應答反應。 自身免疫(autoimmunity): 指機體免疫系統(tǒng)針對自身成分發(fā)生免疫應答反應，出現自身抗體或致敏淋巴細胞的現象。 自身抗體(autoantibody): 針對自身組織器官、細胞及細胞內成分的抗體。,一、

2、自身免疫性疾病分類,按器官特異性分類,系統(tǒng)性自身免疫病 ( systemic autoimmune disease ) 指侵犯多種組織器官或系統(tǒng)的一組疾病，可以檢出對 多種器官或組織成分的自身抗體或致敏T淋巴細胞。 難以治愈 器官特異性自身免疫病 ( organ-specific autoimmune disease) 指病變局限于某一特定器官或組織，可以檢出對該組織 器官成分特異的自身抗體或致敏T淋巴細胞。 療效較好,胡某：女，27歲，2001年5月18日，新婚兩周，突發(fā)燒390C,乏力，口腔潰瘍，雷諾現象，情緒反復無常，WBC3.2109 /L,兩個月未能明確診斷，后查抗核抗體（ANA）陽

3、性，抗Sm陽性，定為SLE，至今未生育，也不能工作。,病例1,病例2,張某：男，42歲，私企老總，2009年2月感覺下蹲、上樓困難，手無力，低燒。單項CK 2999U/L,先懷疑心肌問題，一個月后查抗Jo-1 抗體陽性，肌活檢示肌纖維變性，診斷：早期多發(fā)性肌炎，后碾轉北京、上海、廣州半年治療，未有好轉。,黃某：女，39歲，16歲起經常腹瀉，膿血便，人消瘦，多次大便細菌培養(yǎng)，均無致病菌生長，用抗生素治療，癥狀緩解，停藥就發(fā)，數年不能診斷。后經結腸鏡確認，及查pANCA陽性，為潰瘍性結腸炎。至今未治愈。,病例3,楊某：女，32歲，安徽全椒人,偶感食欲不振，乏力,當地醫(yī)院以胃病治療數月不佳,后出現黃

4、疸,ALT108U/L,考慮肝炎進行降酶治療,也不見好轉,2009年10月轉我院,查ALT140U/L, TBIL43umol/L,肝脾腫大,肝炎標志物均陰性,又查ANA、SMA和pANCA陽性。診斷為1型自身免疫性肝炎（1型AIH）。,病例4,1、病因不明，常呈自發(fā)性。 2、女性居多， 3、遺傳傾向。 4、血清中存在多種自身抗體或自身反應性 致敏淋巴細胞。,二 、自身免疫性疾病的共同特征,5、重疊現象。即一個病人可同時患一種以上 自身免疫病。 6、病程較長，多遷延為慢性。 7、病損局部可發(fā)現淋巴細胞、漿細胞、中性 粒細胞等細胞浸潤。 8、免疫抑制劑治療有一定療效。,二 、自身免疫性疾病的共同

5、特征,三、自身免疫性疾病的發(fā)病機制,1、遺傳因素 2、環(huán)境因素 雌激素、感染、藥物 3、組織損傷 抗體（ II型和III型超敏反應）和致敏淋巴細胞 4、自身抗原,遺傳因素,自身免疫性疾病常有家族遺傳傾向。 大多數HLA系統(tǒng)與自身免疫性疾病的相關性 表現在HLA-B 或 HLA-DR抗原上。 DR3：重癥肌無力、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰島素依賴性糖尿病 DR4：類風濕性關節(jié)炎、尋常性天庖瘡 DR5：橋本氏甲狀腺炎 B27 ：強直性脊柱炎,1、 隱蔽抗原的釋放 2、抗原引發(fā)的交叉反應,自身抗原,自身抗原,1、 隱蔽抗原的釋放 隱蔽抗原是指體內某些組織成分（精子、眼內容物、腦等），一旦手術、外傷、感染等原

6、因破壞隔絕屏障，免疫系統(tǒng)將其誤識為“異物”，引發(fā)自身免疫應答，導致自身免疫病的發(fā)生。,2、共同抗原引發(fā)的交叉反應 某些細菌、病毒與正常人體組織細胞上有相類似的抗原決定簇。如大腸桿菌O:14與人腸粘膜有嗜異性抗原。 針對這些細菌、病毒抗原決定簇產生的自身抗體和致敏淋巴細胞可與自身組織細胞發(fā)生交叉反應，引起自身免疫性疾病。,自身抗原,1948年 Haragraves 等發(fā)現 LE 細胞現象 1957年 Holborow 等應用 IIF 檢測 ANA 1961年 Beck 等發(fā)現 ANA不同熒光染色模型 60-70年代 IIF、ID、CIE應用于新的自身抗體 1979年 Towbin 等用免疫印跡技

7、術檢測自身抗體 80年代 IB、RIP 用蛋白多肽水平認識自身抗原 1987年 DNA基因重組技術應用于自身抗體研究 近十年 應用分子生物學技術,四、自身抗體研究發(fā)展簡史,間接免疫熒光法（IIF） 酶聯免疫吸附實驗（ELISA） 免疫印跡法（Western-blot） 酶免疫斑點法,五、目前檢測自身抗體常用的方法,六、常見自身免疫性疾病的標志抗體,1、自身免疫性疾病的重要標志 2、高滴度存在于自身免疫性疾病患者 3、與疾病的活動性相關 4、參與免疫病理性損傷,七、自身抗體的特性,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE） SLE中國患病率；70/10萬人， 男女之比

8、1 ： 5-10 累及多器官、多系統(tǒng)的小血管及結締組織疾病。 臨床表現：發(fā)熱、皮疹、關節(jié)痛、腎損害、心血管 病變、漿膜炎、貧血、精神癥狀等。 治療:糖皮質激素、免疫抑制劑,1、抗核抗體（ANA） 2、抗ds-DNA抗體 3、抗ENA抗體 4、抗核小體（ AnuA） 5、抗C1q抗體,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,抗核抗體 一組將自身真核細胞（如HEp-2細胞、肝細胞） 各種細胞核成分作為靶抗原總稱。 95% SLE患者ANA陽性且效價高 1:100以上即有診斷價值 ANA陰性對排除SLE陰性預測值較高,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,抗核抗體 有五

9、種熒光圖形 1、均質型-抗DNA抗體（SLE) 2、核膜型-抗組蛋白抗體（ SLE) 3、顆粒型- 抗非組蛋白抗體 4、核仁型-抗核仁抗體(PSS) 5、著絲點型（PSS),均質型,抗dsDNA 抗體 抗組蛋白抗體 (histone) 抗 ssDNA 抗體 抗核小體抗體 (nucleosome),抗dsDNA抗體是SLE患者的特征性標志抗體。 特異性可達95%100 % 敏感性僅為30%50% 其抗體滴度與疾病的活動程度有相性， 抗dsDNA抗體陰性不能排除SLE診斷。,抗雙鏈DNA抗體,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,抗核小體抗體(AnuA) 當SLE患者的吞噬細胞對凋亡細胞的清除能力受

10、損或降低，導致核小體在患者體內大量存積，激活B細胞產生抗核小體抗體（ AnuA具有同抗ds-DNA抗體相同的診斷特異性 系統(tǒng)性硬化病SSc有20%50%低濃度陽性率， 其他自身免疫性疾病中該抗體均為陰性。 AnuA的表達與SLE病情活動分數相關。,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,抗ENA抗體譜: 可提取核抗原抗體的總稱。 臨床常用抗ENA抗體譜： 抗Sm 抗U1-RNP 抗SSA 抗SSB 抗Jo-1 抗Scl-70 抗rib-P蛋白,系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE的自身抗體檢測,抗可提取性核抗原（ENA）抗體, 抗 Sm 抗體： SLE20%40%，標記性抗體 抗 nRNP 抗體： MCTD95%

11、100%高滴度，標記性抗體 抗 SSA 抗體： PSS 60%75%，其它CTD 抗 SSB 抗體： PSS 10%40%，其它CTD 抗 Scl-70 抗體： SSc 25%75%, 標記性抗體 抗 Jo-1 抗體： PM/DM 25%，標記性抗體 抗 rRNP 抗體： SLE10%30%，標記性抗體,SLE患者中的C1q及抗C1q,患者抗C1q水平與C1q水平呈負相關，隨著病情加重，C1q水平下降，抗C1q水平上升 抗C1q與SLE患者疾病嚴重程度相關 抗C1q在SLE繼發(fā)的低補體血癥患者陽性率極高,95%99% 可排除 SLE （） SLE 治療緩解 病情特重（大量 IC 沉積消耗抗體）

12、 （）低滴度 常見于RA 等其它自身免疫性疾病 高滴度可作為診斷 SLE 的依據 ENA抗體譜檢測 （）不能排除 抗dsDNA、Sm、rib抗體 （）可幫助診斷,ANA初篩 （分型、滴度）,SLE檢測方法的選擇及結果的確認,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,2、類風濕性關節(jié)炎（RA） RA中國發(fā)病率0.33%,歐美0.5-1% RA有一定的遺傳因素 以手腳小關節(jié)向心性對稱發(fā)病， 老年病人可能存在遠端大關節(jié)受累， 病程長者?？沙霈F關節(jié)畸形。 產生多種抗變性IgG的自身抗體，即類風濕因子。 治療：一線藥物；非甾體抗炎，二線藥物；甲氨迪呤、硫唑嘌呤、環(huán)孢素A，不能和糖皮質激素合用,類風濕關節(jié)

13、炎的自身抗體檢測,1、類風濕因子（RF） 2、抗角蛋白抗體（AKA） 3、抗核周因子（APF） 4、抗Sa抗體 5、抗環(huán)狀瓜氨酸多肽抗體（CCP） 6、6-GPT 7、 突變型瓜氨酸化波形蛋白（MCV）,AKA 主要見于RA， 陽性率36%59%， 特異性95%99%， 可先于臨床表現出現； 高滴度可預示較嚴重的RA類型。,抗角蛋白抗體（AKA）,是 RA 特異性自身抗體。 敏感性65%85% 特異性94%98% 高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關節(jié)侵蝕的 危險因子之一，定量檢測有助于判斷預后。,抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）,抗MCV抗體在RA診斷中的應用,波形蛋白是存在于體內的一種天然蛋白，

14、具有40多個可瓜氨酸化位點，抗原決定簇比CCP充分，病變過程中，凋亡巨噬細胞內波形蛋白被瓜氨酸化，形成MCV，并促使抗MCV的形成。 抗MCV對RA，特別是早期RA具有很好的特異性和敏感性；抗MCV可與其他RA自身抗體聯合檢測，以獲取最佳診斷效果。,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,3、干燥綜合征（SS） SS中國的患病率為0.3%,女；男=9:1 SS發(fā)病高峰；20-30歲，50歲絕經后 分泌腺體功能異常導致皮膚和黏膜的干燥， 淚腺與唾液腺最常被侵犯，出現眼干與口干。 女性病人出現陰道黏膜干燥萎縮，有瘙癢感。 治療：人工淚液、硼酸軟膏,干燥綜合征的自身抗體檢測,1、抗核抗體（ANA）

15、，均質型低效價或斑點型 2、類風濕因子（RF） 3、抗SSA和抗SSB 4、抗-包襯蛋白抗體,抗-包襯蛋白抗體與干燥綜合癥,在干燥綜合癥（SS）患者體內，-包襯蛋白參與外周T細胞的活化 抗-包襯蛋白抗體的出現早于SS-A或SS-B 抗-包襯蛋白抗體是干燥綜合癥診斷的特異性標記物，尤其是在發(fā)病早期,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,4、多發(fā)性肌炎（PM）和皮肌炎（DM） 以肌肉損害為主要表現，同時伴有皮膚損害。 治療：首選糖皮質激素，推薦FK506、雷泊霉素 抗體檢測：抗 Jo-1 抗體、抗i-2抗體,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,5、硬皮?。⊿cl） 典型表現為皮膚變緊、變

16、硬。有雷諾現象。 侵犯少量皮膚時為局限性硬皮病。 侵犯全身皮膚時為進行性系統(tǒng)性硬化癥（PSS）。 治療：皮質激素、青霉胺、氮芥、硫唑嘌呤、各種拮抗劑 抗體檢查：ANA、抗Scl-70抗體、抗著絲點抗體,6、系統(tǒng)性血管炎,累及中血管的有結節(jié)性動脈炎、川崎病 累及小血管的有肉牙腫 治療：糖皮質激素、環(huán)磷酰胺 抗體檢測： 抗蛋白酶3（RP3） 抗髓過氧化物酶（MPO） 殺菌/通透性增高蛋白（BPI） 抗中性粒細胞胞漿抗體 （ ANCA） cANCA pANCA,八、由 型超敏反應引起的 自身免疫性疾病,熒光染色型,靶抗原,胞漿型 (cANCA),蛋白酶3（PR3） 陽性：韋格納肉牙腫,核周型 (pA

17、NCA),髓過氧化物酶（MPO 陽性：原發(fā)性血管炎,非典型型 (aANCA),兼有兩種特性,ANCA熒光染色型與靶抗原,胞漿型抗中性粒細胞胞漿抗體 (cANCA),主要見于Wegeners 肉芽腫及微小多動脈炎,與自身免疫密切相關的特殊類型的肝病， 其診斷和治療完全不同于一般慢性病毒性肝炎。 治療：糖皮質激素、或聯合硫唑嘌呤、潑尼松 自身免疫性肝炎 (AIH) 原發(fā)性膽汁性肝硬化 (PBC) 原發(fā)性硬化性膽管炎 (PSC) 重疊綜合征,7.自身免疫性肝病,檢測抗體： 抗核抗體（ANA） 抗平滑肌抗體（SMA） 抗線粒體抗體（AMA） 抗肝腎微粒體抗體（LKM1） 抗可溶性肝抗原抗體（SLA）

18、抗中性粒細胞漿抗體（pANCA） 抗肝特異性胞漿抗體（LC1）,自身免疫性肝病的自身抗體檢測,疾病類型 相關自身抗體 自身免疫性肝炎（ AIH ） 型AIH ANA/SMA 型AIH LKM-1 LC-1 型AIH SLA 原發(fā)性膽汁性肝硬化（ PBC） AMA ( M2/M4/M8/M9 ) anti-gp210， sp100 ACA 原發(fā)性硬化性膽管炎（PSC） pANCA,自身免疫性肝病及其自身抗體譜,抗甲狀腺球蛋白抗體 ( TG Ab ) 抗甲狀腺過氧化物酶抗體 （ TPO Ab ） 抗促甲狀腺素受體抗體 （TSH-R Ab）,8.橋本甲狀腺炎的自身抗體檢測,重癥肌無力（MG）自身抗體譜： 抗骨胳肌抗體（ASA）、抗乙酰膽堿受體(AchR)