1、細(xì)胞工程 ( cell engineering ),實驗四 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和計數(shù),知識目標(biāo),1.熟悉培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)分類的特點。 2.掌握培養(yǎng)過程中細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)變化 的規(guī)律以及細(xì)胞計數(shù)的方法。,實驗四 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和計數(shù),1.將培養(yǎng)細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出； 2.在倒置相差顯微鏡10的物鏡下，再調(diào)節(jié)物鏡使觀察的細(xì)胞形態(tài)清楚，對細(xì)胞的透明度、細(xì)胞的輪廓進(jìn)行觀察； 3.將倒置相差顯微鏡轉(zhuǎn)換至40物鏡，對細(xì)胞結(jié)構(gòu)、內(nèi)容物等作進(jìn)一步的觀察 4.記錄上述觀察結(jié)果。,（一）細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及生長狀況的觀察,（二）細(xì)胞的計數(shù),原理： 細(xì)胞計數(shù)法是細(xì)胞生物學(xué)實驗的一項基本技術(shù)，是了解培養(yǎng)細(xì)胞生長狀態(tài)以及測定培養(yǎng)

2、基、血清、藥物等物質(zhì)生物學(xué)作用的重要手段。 細(xì)胞計數(shù)主要利用血球計數(shù)板來完成。血球計數(shù)板每一大方格長為1mm，寬為1mm，高為0.1mm，體積為0.1mm3，可容納的溶液是0.1l，那么每ml溶液中所含細(xì)胞數(shù)即是視野中每一大方格中數(shù)出的細(xì)胞數(shù)的 10 000倍 。,步驟： 1.準(zhǔn)備計數(shù)板：用酒精清潔計數(shù)板和蓋 玻片，然后用吸水紙輕輕擦干； 2.制備細(xì)胞懸液：用胰蛋白酶消化單層 培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，制成 單個細(xì)胞懸液。,（二）細(xì)胞的計數(shù),3.加樣：將蓋玻片蓋在計數(shù)板兩槽中間。用尖嘴吸管輕輕吹打細(xì)胞懸液，吸取少量細(xì)胞懸液，在計數(shù)板上蓋玻片一側(cè)邊沿加細(xì)胞懸液，加樣量不要溢出蓋玻片，也不要過少或帶氣泡。否則要將計數(shù)板和蓋玻片擦干凈重新加樣；,4.計數(shù)：在顯微鏡下，用 10物鏡觀察 計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，細(xì)胞壓 中線時，只計左側(cè)和上方者，不計右側(cè) 和下方者。 細(xì)胞數(shù)毫升原液= （4大格細(xì)胞數(shù)之和4）104稀釋倍數(shù),【作業(yè)與思考題】 1.分別將傳代培養(yǎng)的細(xì)胞，用10及 40的物鏡對細(xì)胞的透明度、輪廓及 內(nèi)容物等進(jìn)行觀察并記錄。 2.對培養(yǎng)的細(xì)胞用計數(shù)板計數(shù)， 問：應(yīng)用公式計算細(xì)胞原液的細(xì)胞數(shù)。若每瓶傳代細(xì)胞數(shù)量為1105 ，應(yīng)該怎樣稀釋，按1：（？）傳代？,細(xì)胞原