1、1,第六章 實(shí)驗(yàn)方法的選擇與 檢測(cè)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)驗(yàn)證,2,教學(xué)目的和要求：,1、掌握實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí)；實(shí)驗(yàn)方法選擇的目的、原則；檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)的內(nèi)容；方法評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)尤其是回收實(shí)驗(yàn)和干擾實(shí)驗(yàn)的原理和操作。,2、熟悉實(shí)驗(yàn)方法選擇的步驟；試劑盒的使用。,3、了解試劑盒的類(lèi)型和選購(gòu),3,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)方法的選擇,選擇準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)方法,為臨床提供準(zhǔn)確可靠的信息,臨床生化檢驗(yàn)分析,保證,4,一、實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí),分級(jí)依據(jù)：國(guó)際臨床化學(xué)協(xié)會(huì)（IFCC） 根據(jù)分析方法的準(zhǔn)確性與精密度的不同。,常規(guī)方法 參考方法 決定性方法,分為三級(jí)：,5,（一）常規(guī)方法（routine method ）,定義： 應(yīng)具有足夠的精密度、

2、準(zhǔn)確度和特異度，有適當(dāng)?shù)姆治龇秶?，?jīng)濟(jì)實(shí)用， 其性能指標(biāo)符合臨床或其它目的的需要。,主要方法： 溴甲酚綠法、雙縮脲法、J-G法等。,應(yīng)用： 臨床常規(guī)檢驗(yàn)使用，常規(guī)方法在作出評(píng)定以后，經(jīng)有關(guān)學(xué)術(shù)組織認(rèn)可，可以作為推薦方法（recommended method ） 。,偏差已知方法,偏離未知方法,6,（二）參考方法reference method,定義： 是指準(zhǔn)確度與精密度已經(jīng)被充分證實(shí)，且經(jīng)公認(rèn)的權(quán)威機(jī)構(gòu)（國(guó)家主管部門(mén)、相關(guān)學(xué)術(shù)團(tuán)體和國(guó)際性組織等）頒布的方法。這類(lèi)方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當(dāng)?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復(fù)測(cè)定中的隨機(jī)誤差可以忽略不計(jì)。,主要方法：,原子

3、吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學(xué)法，離子交換層析法等,7,應(yīng)用： 能在條件優(yōu)越的實(shí)驗(yàn)室作常規(guī)分析，主要用于鑒定常規(guī)方法，評(píng)價(jià)其誤差大小、干擾因素并決定是否可以被接受；用于鑒定二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品和為質(zhì)控血清定值；用于 商品試劑盒的質(zhì)量評(píng)價(jià)。,8,（三）決定性方法definitive method,定義： 是指準(zhǔn)確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過(guò)詳細(xì)的研究，沒(méi)有 發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測(cè)定結(jié) 果與真值最為接近。,主要方法：,重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）,9,應(yīng)用： 由于技術(shù)要求太高，費(fèi)用昂貴，這類(lèi)方法不直接用于鑒定 常規(guī)方法的準(zhǔn)確性，只用于評(píng)價(jià)參考方

4、法與一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品。,儲(chǔ)氫重量分析儀 (北京英格海德分析技術(shù)有限公司),10,11,二、實(shí)驗(yàn)方法選擇的目的,1.結(jié)合自身?xiàng)l件，按照實(shí)驗(yàn)方法原則選擇合適的項(xiàng)目方法 2.臨床應(yīng)用前初步評(píng)估方法分析性能和可能引入的誤差,12,三、實(shí)驗(yàn)方法選擇的原則,1.實(shí)用性：微量快速、費(fèi)用低廉、易于自動(dòng)分析、安全可靠 2.可靠性：較高精密度、準(zhǔn)確度和較大的檢測(cè)能力,13,四、實(shí)驗(yàn)方法選擇的步驟,1.提出要求 2.收集資料 3.選擇候選方法 4.確立質(zhì)量目標(biāo) 5.進(jìn)行初步評(píng)價(jià),14,第二節(jié) 試劑盒的選擇,一、試劑盒的類(lèi)型,臨床生化診斷試劑種類(lèi)繁多，有液體試劑、干粉試劑、干片試劑，一次性試劑包等 液體試劑：臨床應(yīng)用最為廣

5、泛 1.液體單試劑 2.液體雙試劑,二、試劑盒的選購(gòu)（了解，自學(xué)）,三、試劑盒的使用（了解，自學(xué)）,15,第三節(jié) 檢測(cè)系統(tǒng)性能評(píng)價(jià)方法,性能評(píng)價(jià)主要內(nèi)容： 精密度、正確度、線性范圍、檢測(cè)限、抗干擾能力、生物參考區(qū)間等,16,在相同條件下，對(duì)同一樣本連續(xù)進(jìn)行n次重復(fù)測(cè)定結(jié)果的符合程度。 在有限次測(cè)定情況下，一般用 （總體標(biāo)準(zhǔn)差）的估計(jì)值S（樣本標(biāo)準(zhǔn)差） 和變異系數(shù)CV來(lái)表達(dá)這種精密度。,定義：,一、精密度評(píng)價(jià),17,批內(nèi)精密度試驗(yàn)：,指在相同條件下（同樣方法、同一種試劑和標(biāo)準(zhǔn)品、同樣儀器、在同一實(shí)驗(yàn)室由同一人操作，并要保持實(shí)驗(yàn)期間準(zhǔn)確性不變）對(duì)同一標(biāo)本在盡可能短的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行m輪n次重復(fù)測(cè)定結(jié)果之

6、間相互接近 的程度。重復(fù)性（批內(nèi)）精密度（S）,Si2,m,S=,Si,=,(xt-xt)2,n-1,CV=,S,X,100,定義：,重復(fù)性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)精密度常用方法，包括：,(一)基本方法,18,日間精密度試驗(yàn),定義： 將同一樣本分成數(shù)份，隨機(jī)插入常規(guī)患者樣本中，每天測(cè)定一次，最少連續(xù)測(cè)定20天，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)。,19,1.試驗(yàn)條件穩(wěn)定 2.實(shí)驗(yàn)標(biāo)本應(yīng)與真實(shí)標(biāo)本有同樣基質(zhì) 3.檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)處于良好狀態(tài),(二)精密度評(píng)價(jià)注意事項(xiàng)：,(三)性能可接受性判斷：,1.國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 403-2012 2.美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)CLIA88,20,二、正確度評(píng)價(jià),定義: 1. 大批檢測(cè)結(jié)果均值與真值的

7、一致程度 2.指測(cè)定結(jié)果與真值接近的程度，一般用偏差和偏差系數(shù)表示。,表示方法: 偏倚為重復(fù)測(cè)定均值（ X）與真值之差。 偏倚系數(shù)（CB）= 100 。,真值-X,真值,定量的標(biāo)準(zhǔn)品,確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法,或,1.正確度 2.準(zhǔn)確度,21,影響因素： 系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差（了解）,表示已定系統(tǒng)誤差的綜合。,A=+（不確定度）,不確定度（uncertainty）是表達(dá)測(cè)定結(jié)果的一個(gè)組成 部分，它表明被測(cè)標(biāo)本中真值存在的范圍,22,特異度和干擾,即專(zhuān)一性，是指在特定實(shí)驗(yàn)條件下分析試劑只對(duì)待測(cè)物質(zhì)起反應(yīng)，而不與其它結(jié)構(gòu)相似的非被測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。分析方法特異度越高，則測(cè)定結(jié)果越準(zhǔn)確。,特異度（specific

8、ity）,是指標(biāo)本中某些非被測(cè)物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待 測(cè)物測(cè)定值偏高或偏低，這些非被測(cè)物質(zhì)稱(chēng)為干擾物。,干擾（interference）,特異度,干擾,方法的準(zhǔn)確性,側(cè)面指標(biāo),正面指標(biāo),23,（一）重復(fù)性試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,對(duì)同一材料（標(biāo)準(zhǔn)液、質(zhì)控液、標(biāo)本等）分成數(shù)份試驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行多次分 析測(cè)定，并計(jì)算其均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。,檢測(cè)候選方法的隨機(jī)誤差,（1）批內(nèi):標(biāo)準(zhǔn)液 （2）日內(nèi): （3）日間:質(zhì)控液 （4）平行雙份:,試驗(yàn)的形式:,應(yīng)注意的問(wèn)題:,（1）分析標(biāo)本選擇,（2）被測(cè)物濃度,24,(二)回收試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,將被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)液加人病人標(biāo)

9、本中，成為分析標(biāo)本；原病人 標(biāo)本中加人等量的無(wú)被測(cè)物的溶劑作基礎(chǔ)標(biāo)本；然后用候選方 法測(cè)定并得到各自濃度。,檢測(cè)候選方法的比例系統(tǒng)誤差。,回收: 指候選方法準(zhǔn)確測(cè)定加入常規(guī)分析標(biāo)本的純分析 物的能力。,25,回收濃度=分析標(biāo)本測(cè)得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測(cè)得濃度（實(shí)際測(cè)得值）,計(jì)算:,加入濃度=,標(biāo)準(zhǔn)液量,病人樣品量（ml）標(biāo)準(zhǔn)液量（ml）,標(biāo)準(zhǔn)液濃度（理論真實(shí)值）,回收率（%）=,回收濃度,加入濃度,100（理想值為）,26,注意事項(xiàng)： 吸量準(zhǔn)確； 加入標(biāo)準(zhǔn)液后，其實(shí)驗(yàn)樣品的被子測(cè)濃度最好達(dá)到醫(yī)學(xué)決定水平； 總濃度必須在方法分析范圍內(nèi)； 需加入高中低不同濃度回收試驗(yàn)，計(jì)算平均回收率； 加入標(biāo)準(zhǔn)液的

10、體積一般在10%內(nèi)； 重復(fù)2-3次。,27,干擾試驗(yàn),試驗(yàn)的目的:,用來(lái)檢測(cè)候選方法的恒定系統(tǒng)誤差。干擾物濃度不同， 誤差大小也不同,干擾:,指標(biāo)本中某些非被測(cè)物質(zhì)本身不與分析試劑反應(yīng)但以其它形式使待測(cè)物測(cè)定值偏高或偏低。,28,試驗(yàn)的方法:,基本與回收試驗(yàn)一樣，但在病人標(biāo)本中加人的是疑有干擾或非特異性反應(yīng)的物質(zhì)。將可能引起干擾的物質(zhì)配成一定濃度的溶液，加到病人標(biāo)本中成為干擾分析樣本；原病人標(biāo)本加人相同量的無(wú)干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎(chǔ)樣本；然后用候選方法對(duì)此兩種樣本同時(shí)測(cè)定，兩者之差即表示該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾所引起的誤差，即干擾值,干擾值=分析標(biāo)本測(cè)得濃度 - 基礎(chǔ)標(biāo)本測(cè)得濃度,計(jì)算:,29,30

11、,(四)方法對(duì)比試驗(yàn)（熟悉）,試驗(yàn)的目的:,試驗(yàn)的方法:,對(duì)一組病人的標(biāo)本用候選方法和比較方法同時(shí)進(jìn)行分析測(cè)定，觀察二者之間的差異。這是考驗(yàn)候選方法是否可采用的重要措施。,用于檢測(cè)候選方法的系統(tǒng)分析誤差。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析， 可提供系統(tǒng)誤差的性質(zhì)（恒定或和比例誤差）,31,在進(jìn)行臨床化學(xué)常規(guī)方法的評(píng)價(jià)時(shí)，最好選擇參考方法作為比較方法 若采用已知偏差法，則有部分誤差來(lái)自比較方法（與已知偏差 一致的那部分誤差），剩余的則屬于侯選方法。 若采用未知偏差法，分析誤差可能來(lái)源于二者之一或兩者都有，難以分析。,比較方法的選擇：,應(yīng)注意的問(wèn)題:,統(tǒng)計(jì)處理：配對(duì)t檢驗(yàn)、相關(guān)和回歸分析 直線回歸處理： 理想的回

12、歸為：,32,三、可報(bào)告范圍評(píng)價(jià) 定義：觀察一種檢測(cè)方法或一個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)范圍。 檢測(cè)范圍的要求：覆蓋寬，至少應(yīng)該覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平 （一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備： 最理想標(biāo)本：患者的新鮮低值和高值血清標(biāo)本。多用人工方法制備。 1.試驗(yàn)樣本 2.確定濃度范圍 （二）樣本檢測(cè)：隨機(jī)排列，每個(gè)樣本測(cè)3-4次 （三）統(tǒng)計(jì)處理:,33,四、檢出限的驗(yàn)證 檢出限（LoD）檢測(cè)系統(tǒng)可檢測(cè)出分析物的最小值 空白限（LoB）規(guī)定的可能條件下，空白樣品被觀察到的系列檢測(cè)結(jié)果的最大值 驗(yàn)證LoD的程序 1.試驗(yàn)樣品：空白樣品、檢測(cè)限樣品 2.測(cè)定次數(shù)：至少20次 3.檢測(cè)LoB 4.結(jié)果判斷,34,五、生物參考區(qū)間的驗(yàn)證 定

13、義：指某項(xiàng)檢查結(jié)果在正常人群的分布范圍，是解釋檢驗(yàn)結(jié)果、分析檢驗(yàn)信息的基本尺度和依據(jù)。 建立生物參考區(qū)間的方法: （一）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 1. 評(píng)價(jià)對(duì)象的選擇 2.采集標(biāo)本：采集的注意事項(xiàng) （二）樣本測(cè)定 （三）結(jié)果評(píng)價(jià)：95%的可信度,35,醫(yī)學(xué)決定水平,定義： 對(duì)臨床診治疾病具有決定性作用的被分析物質(zhì)的濃度，是臨床上按照不同病情給予不同治療方案而確定的閾值。,作用：,、判斷被檢對(duì)象有病或完全排除被檢對(duì)象有病。 、確定診斷試驗(yàn)在不同病情時(shí)的變化，需要有治療及判斷預(yù)后的界值。,DL3,36,水平：提示需要進(jìn)一步檢查的閾值 水平：提示需要治療措施的界點(diǎn) 水平：提出預(yù)后或要緊急處理的界值,一個(gè)診斷試驗(yàn)一

14、般確定三個(gè)決定水平：,臨床生化檢驗(yàn)指標(biāo)的醫(yī)學(xué)決定水平,37,第四節(jié) 檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證和確認(rèn),一、量值溯源的基本原理,檢測(cè)系統(tǒng) 是指完成一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的測(cè)定所涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、消耗品、操作程序、質(zhì)量控制程序、設(shè)備維護(hù)程序等的組合。,量值溯源 通過(guò)一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測(cè)量結(jié)果或測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國(guó)家測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)或國(guó)際測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來(lái)的特性 ISO 17511;VIM：1993，定義6.10,量值溯源的目的,對(duì)于臨床實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)來(lái)說(shuō)，最基本的要求是要保證試驗(yàn)結(jié)果足夠準(zhǔn)確（正確和精密），以保證臨床的正確診斷并且具有時(shí)間和空間的可比性。,量值溯源的基本原理

15、,利用參考系統(tǒng)（尤其是參考方法和參考物質(zhì)）提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性 參考系統(tǒng)是溯源的基礎(chǔ),參考物的量值溯源等級(jí)圖,不 確 定 度,溯 源,量值溯源的理想情況是可溯源至國(guó)際單位制SI，要溯源至國(guó)際單位，必須有一級(jí)參考測(cè)量程序 目前滿(mǎn)足上述條件的檢驗(yàn)指標(biāo)有25-30種定義明確的小分子化合物（如某些電解質(zhì)，代謝產(chǎn)物和底物類(lèi)、甾體激素、甲狀腺激素）,檢測(cè)不能溯源到SI的情況 有國(guó)際約定參考測(cè)量程序（非一級(jí)參考測(cè)量程序）和一種或多種用此參考測(cè)量程序定值的國(guó)際約定校準(zhǔn)物質(zhì)，如GHb 有一種國(guó)際約定參考測(cè)量程序,無(wú)國(guó)際約定校準(zhǔn)物質(zhì)，如高密度脂蛋白膽固醇 一種或多種國(guó)際約定校準(zhǔn)物質(zhì)及定值方案，無(wú)國(guó)際約定參

16、考測(cè)量程序，如抗體和腫瘤標(biāo)記物等300多種指標(biāo) 既無(wú)參考測(cè)量程序也無(wú)校準(zhǔn)的參考物質(zhì),臨床實(shí)驗(yàn)室的溯源,欲使醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)量結(jié)果具有溯源性，最直接、簡(jiǎn)便的途徑是進(jìn)入“不間斷的溯源鏈”,參考系統(tǒng),包括三個(gè)方面 參考方法 參考物質(zhì) 參考實(shí)驗(yàn)室 其中最主要的是參考物質(zhì)和參考方法，對(duì)于有參考方法的檢驗(yàn)項(xiàng)目，關(guān)鍵又是參考方法,參考方法分類(lèi),參考方法分為 一級(jí)參考方法/決定性方法 二級(jí)參考方法/參考方法 在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域所指的參考方法一般為二級(jí)參考方法。,參考物質(zhì),一級(jí)參考物質(zhì)：高度純化的分析物 二級(jí)參考物質(zhì)：基質(zhì)與實(shí)際樣本相似的參考物質(zhì)，二級(jí)參考物質(zhì)一般由二級(jí)參考方法定值,溯源性有關(guān)文件,ISO17511（

17、2003），體外診斷醫(yī)學(xué)器具生物樣本中量的測(cè)量校準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)控物質(zhì)定值的計(jì)量學(xué)溯源 ISO18153（2003），體外診斷醫(yī)學(xué)器具生物樣本中量的測(cè)量 酶催化濃度校準(zhǔn)物質(zhì)和質(zhì)控物質(zhì)定值的計(jì)量學(xué)溯源 ISO15193 （2002），體外診斷醫(yī)學(xué)器具生物樣本中量的測(cè)量參考測(cè)量程序的表述 ISO15194(2002),體外診斷醫(yī)學(xué)器具生物樣本中量的測(cè)量參考物質(zhì)的描述 ISO15195(2002),體外診斷醫(yī)學(xué)器具生物樣本中量的測(cè)量參考測(cè)量實(shí)驗(yàn)室的要求,溯源性國(guó)際機(jī)構(gòu),檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源性聯(lián)合委員會(huì)（JCTLM） 2002年成立，由國(guó)際計(jì)量委員會(huì)（CIMP）、國(guó)際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（IFCC），國(guó)際實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可合作組織（ILAC）共同成立,JCTLM的兩個(gè)工作小組,涉及參考測(cè)量程序和參考物 涉及參考測(cè)量實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò),50,復(fù)習(xí)題： 一、名詞解釋?zhuān)?1、決定性方法 2、參考方法、3、常規(guī)方法、4、線性范圍 5、檢出限 6、生物參考區(qū)間 填空題：1、實(shí)驗(yàn)方法的分級(jí)分為、。 2、精密度評(píng)價(jià)的指標(biāo)、 3、 系統(tǒng)誤差分為、。 選擇題：關(guān)于隨機(jī)誤差說(shuō)法錯(cuò)誤的是： A、隨機(jī)誤差用重復(fù)性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 B、變異系數(shù)可評(píng)價(jià)隨機(jī)誤差 C、標(biāo)