1、血凝與血凝抑制試驗(yàn),2016.05.01,1.了解做試驗(yàn)的目的； 2.試驗(yàn)器材與試劑； 3.血凝試驗(yàn)的原理； 4.血凝抑制試驗(yàn)原理； 5.血凝試驗(yàn)的操作方法；（紅細(xì)胞的配制） 6.血凝抑制的操作方法；（四單位的配制） 7.掌握試驗(yàn)的結(jié)果的判定。,血凝試驗(yàn)與血凝抑制實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?用已知抗原來檢測被檢血清中有無相應(yīng)的特異性抗體和滴定該特異性抗體的水平。,實(shí)驗(yàn)器材：,微量移液器,普通離心機(jī),微量振蕩器,禽用采血器,96孔v型血凝反應(yīng)板,試驗(yàn)主要試劑：,新城疫標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽性血清、陰性血清與待檢血清 1%雞紅細(xì)胞懸液 四單位抗原 生理鹽水 抗凝劑,血凝試驗(yàn)原理：,二、血凝試驗(yàn)（HA)實(shí)驗(yàn)原理 一些病毒表面

2、有血凝素，能使雞、鵝或人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，叫做血凝試驗(yàn)。,+,四、血凝試驗(yàn)操作步驟,(1)先做標(biāo)記；(2)按表中順序加樣。,倒加,血凝試驗(yàn)操作步驟：,1%紅細(xì)胞的配制：,1.為避免有些雞只的紅細(xì)胞有自凝現(xiàn)象，因此配制1%紅細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)最好選擇采取3只SPF雞或未進(jìn)行過任何免疫過的成年公雞血液。（抗凝劑與血液比例為1:4） 2.采血完畢后將血加入至10ml離心管中，加3-4倍體積生理鹽水以20003000r/min，510min離心3-5次。 3.棄去上液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下緩慢顛倒（切忌用力過大使紅細(xì)胞破裂），使其充分混勻，再離心棄去上清液，反復(fù)幾次直至

3、上清液清亮透明為止。,4.吸取壓積紅細(xì)胞泥與生理鹽水以1:99進(jìn)行配制1%雞紅細(xì)胞懸液。 5.在加紅細(xì)胞過程中還須不斷輕搖以確保紅細(xì)胞均勻，使其每孔加入相同數(shù)量的紅細(xì)胞。 6.制備好的紅細(xì)胞液如果放置后上清液變紅，說明有溶血，不可再使用。,(血凝抑制試驗(yàn)（HI)原理 病毒的懸液中加入特異性抗體，紅細(xì)胞的凝集現(xiàn) 象被抑制，稱為紅細(xì)胞的血凝抑制。,？,+,血凝抑制試驗(yàn)操作步驟：,五、血凝抑制試驗(yàn)操作步驟,4單位抗原的制備： 根據(jù)血凝試驗(yàn)測定的標(biāo)準(zhǔn)抗原的血凝效價(jià)，判定4個(gè)血凝單位的稀釋倍數(shù)。 方法舉例為：如病毒HA效價(jià)為8log2，其4個(gè)血凝單位為6log2，則病毒稀釋64倍即可。 根據(jù)樣品數(shù)確定所需抗原量做稀釋。,血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果判定：,以完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最大稀釋度為該血清的HI滴度（注：看結(jié)果時(shí)96孔板傾斜45度）。 注意：確定度數(shù)的孔要