1、實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌分離培養(yǎng)及移植,劉書超 預(yù)防獸醫(yī)教研室,細(xì)菌的分離純化技術(shù),分離純化：,使微生物共生群體分離開，得到純培養(yǎng)物的過程稱微生物的純分離技術(shù)。得到的純培養(yǎng)物稱純種。 純種：指一種或一株微生物培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞只來源同一個(gè)細(xì)胞的后代。,分離純化技術(shù)是細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)中最基本的技術(shù)之一,臨床送檢樣品或混雜的樣品 分離受雜菌污染的菌種 細(xì)菌純培養(yǎng)物,試驗(yàn)內(nèi)容：,1.需氧菌的分離移植和增菌 平板劃線分離 營養(yǎng)（普通）斜面接種 營養(yǎng)（普通）肉湯增菌 2. 厭氧菌的分離培養(yǎng)方法（本次試驗(yàn)不做） 生物學(xué)方法、化學(xué)方法、物理學(xué)方法,實(shí)驗(yàn)要求：,掌握： 掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法 掌握無菌操作程序 掌握細(xì)

2、菌在培養(yǎng)基上生長特點(diǎn) 認(rèn)識(shí)： 認(rèn)識(shí)菌落形態(tài),無菌操作工具,接種工具,分離純化法：（細(xì)菌分離純化）,1、平板劃線法 2、稀釋涂布平板法 3、稀釋混合（傾注）平板法 4、顯微操作器單細(xì)胞挑取法 5、棋盤格劃線法,1.平板劃線：,將蘸有混合細(xì)菌的接種環(huán)在平板表面多方向連續(xù)劃線，使混雜的微生物細(xì)胞在平板表面分散，濃度變稀，經(jīng)培養(yǎng)得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而成的菌落，從而達(dá)到純化。,1.平板劃線：,平板劃線的原則和目的：,圖1 平板畫線法 A、B、C分別為1、2、3次畫線,A,B,C,注意手勢(shì)1.培養(yǎng)皿與酒 精燈的距離2.左手打開培 養(yǎng)皿的動(dòng)作3.右手握接種 棒的姿勢(shì)4.右手劃線的 運(yùn)作姿勢(shì),分區(qū)劃線：多用于糞

3、便等含菌量較多的標(biāo)本。每劃一個(gè)區(qū)域，將接種環(huán)燒灼一次，待冷卻后再劃下一個(gè)區(qū)域。每一區(qū)域的劃線應(yīng)接觸上一區(qū)域接種線的23次，使菌量逐漸減少，以形成單個(gè)菌落。,連續(xù)劃線（曲線劃線）：分離含菌量較少的培養(yǎng)物,右手持接種環(huán)， 通過火焰滅菌， 冷卻后，挑取標(biāo)本或培養(yǎng)物少許,1.平板劃線：,1,4,3,2,細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長情況：,單個(gè)菌落（S型）,菌苔,菌落（R型）,2020/8/27,17,可編輯,細(xì)菌的培養(yǎng)特征： 不同種類的細(xì)菌在固體、半固體和液體培養(yǎng)基中可表現(xiàn)出各自特有的培養(yǎng)特征。可以作為細(xì)菌鑒別的特征之一。,細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中生長表現(xiàn)： 1、大小 （ mm表示。1mm以內(nèi)露滴狀；1-2mm

4、小菌落。 2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上稱大菌落或巨大菌落） 2、形狀 （圓形、不規(guī)則形） 3、邊緣 （整齊、鋸齒狀） 4、表面性狀（光滑、粗糙） 5、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6、顏色及透明度（黃色、灰白、光澤、透明） 7、硬度（干燥、濕潤、粘液） 8、溶血（在血培養(yǎng)基上的表現(xiàn)）,2. 斜面移植法：培養(yǎng)，保存菌種及其它。,手執(zhí)塑料桿處,手執(zhí)試管底露出斜面,試管口離火焰1cm,小指夾棉塞,培養(yǎng)后生長的斜面菌種,液體培養(yǎng)基接種法： 用于增菌及純培養(yǎng)細(xì)菌的生長特點(diǎn)觀察，如表面生長，沉淀生長，均勻混濁生長等。,細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中生長的三種不同現(xiàn)象混濁：細(xì)菌均勻彌漫擴(kuò)散，出現(xiàn)不同程度混濁。沉淀：細(xì)菌由下沉。肉眼可見沉淀物（顆粒絮狀）菌膜：需氧菌易在液面生長，形成可見的菌膜，菌環(huán)。,操作順序：接種環(huán)滅菌 勾取細(xì)菌 取棉塞 接種 塞棉塞 接種環(huán)滅菌 標(biāo)記 培養(yǎng)。,思考題：,1、劃線分離時(shí)為什么每次都要講接種環(huán)上多余的菌體燒掉？劃線時(shí)為何不能重疊？ 2、在恒溫箱培養(yǎng)微生物時(shí)為何培養(yǎng)皿均需倒置？ 3、如何進(jìn)行菌落形狀的檢查？檢查時(shí)應(yīng)注意觀察菌落的哪些性狀？ 4、分離培養(yǎng)的目的是什么？