1、奶粉菌落總數(shù)測(cè)定,Contents,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?實(shí)驗(yàn)器材,培養(yǎng)基、試劑和樣品,實(shí)驗(yàn)進(jìn)度表,1,2,3,ThemeGallery is a Design Digital Content & Contents mall developed by Guild Design Inc.,4,5,實(shí)驗(yàn)步驟,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握食品中菌落總數(shù)測(cè)定的基本程序和要點(diǎn)。 學(xué)會(huì)對(duì)不同樣品稀釋度確定的原則。,實(shí)驗(yàn)器材,電子天平（感量0.1g）、量筒500ml、振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱（36 1 ）、 恒溫水浴箱（46 1 ）、無(wú)菌吸管：2支10 mL（具0.1 mL 刻度）、無(wú)菌錐形瓶：容量500 mL、 無(wú)菌培養(yǎng)皿：6只直徑90

2、 mm、pH 計(jì)或pH 比色管或精密pH 試紙、稀釋試管：6支18mm180mm、放大鏡,培養(yǎng)基、試劑和樣品,平板計(jì)數(shù)瓊脂（plate count agar，PCA）培養(yǎng)基 A.1.1 成分 胰蛋白胨 5.0 g 酵母浸膏 2.5 g 葡萄糖 1.0 g 瓊 脂 15.0 g 蒸餾水 1000 mL pH 7.00.2 A.1.2 制法 將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶，121 高壓滅菌15 min,培養(yǎng)基、試劑和樣品,磷酸鹽緩沖液 A.2.1 成分 磷酸二氫鉀（KH2PO4） 34.0 g 蒸餾水 500 mL pH 7.2 A.2.2 制法 貯存液：稱取34.0

3、 g的磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL后貯存于冰箱。 稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 高壓滅菌15 min,培養(yǎng)基、試劑和樣品,無(wú)菌生理鹽水 A.3.1 成分 氯化鈉 8.5 g 蒸餾水 1 000 mL A.3.2 制法 稱取8.5氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 高壓滅菌15 min。,試驗(yàn)進(jìn)度表,實(shí)驗(yàn)步驟,1. 樣品的稀釋 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/

4、min10000 r/min 均質(zhì)1 min2 min，或放入盛有225 mL 稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成1:10 的樣品勻液。 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無(wú)菌錐形瓶（瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。 用1 mL 無(wú)菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL 稀釋液的無(wú)菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。 按上面程序，制備10 倍系列稀釋

5、樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無(wú)菌吸管 或吸頭。 。,實(shí)驗(yàn)步驟,2.平板接種與培養(yǎng) 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進(jìn)行10 倍遞增稀釋時(shí)，吸取1 mL 樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1 mL 空白稀釋液加入兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。(適宜稀釋度為10-2,10-3) 及時(shí)將15 mL20 mL 冷卻至46 的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46 1 恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。 待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36 1 培養(yǎng)48 h2 h。水產(chǎn)品30 1 培養(yǎng)72 h3 h。 如

6、果樣品中可能含有在瓊脂培養(yǎng)基表面彌漫生長(zhǎng)的菌落時(shí)，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養(yǎng)基（約4 mL），凝固后翻轉(zhuǎn)平板，按6.2.1 條件進(jìn)行培養(yǎng)。,實(shí)驗(yàn)步驟,3菌落計(jì)數(shù) 可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。 選取菌落數(shù)在30 CFU300 CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300 CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的

7、平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以2，代表一個(gè)平板菌落數(shù)。 當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí)，則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。,實(shí)驗(yàn)步驟,4.落總數(shù)的計(jì)算方法 若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（mL）樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。 若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按公式（1）計(jì)算： （1） 式中： N樣品中菌落數(shù)； C平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和； n1第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個(gè)數(shù)； n2第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板

8、個(gè)數(shù)； d稀釋因子（第一稀釋度）。,實(shí)驗(yàn)步驟,若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，則以小于1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在30 CFU300 CFU 之間，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 時(shí)，則以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算,實(shí)驗(yàn)步驟,5. 菌落總數(shù)的報(bào)告 菌落數(shù)小于100 CFU 時(shí)，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報(bào)告。 菌落數(shù)大于或等于100 CFU 時(shí)，第3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數(shù)字，后面用0 代替位數(shù)；也可用10 的指