1、顯微鏡物鏡的五個基本參數(shù)一、數(shù)值孔徑(NA) 子午光線能進入或離開纖芯(光學(xué)系統(tǒng)或掛光學(xué)器件)的最大圓錐的半頂角之正弦，乘以圓錐頂所在介質(zhì)的折射率，數(shù)值孔徑是判斷物鏡性能(分辨率、焦深、亮度等)的重要指數(shù)。數(shù)值孔徑又叫鏡口率，簡寫為NA。它是由物體與物鏡間媒質(zhì)的折射率(n)與物鏡孔徑角的一半(2)的正弦值的乘積，其大小由下式?jīng)Q定：NA=nsin/2。數(shù)值孔徑簡寫NA(蔡司顯微鏡的數(shù)值孔徑簡寫CF)，數(shù)值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術(shù)參數(shù)，是判斷兩者(尤其對物鏡而言)性能高低(即消位置色差的能力，蔡司公司的數(shù)值孔代表消位置色差和倍率色差的能力)的重要標(biāo)志。其數(shù)值大小分別標(biāo)在物鏡和聚光鏡的外殼上?？?/p>

2、徑角又稱“鏡口角”，是物鏡光軸上的物體點與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度?？讖浇窃酱?，進入物鏡的光通亮就越大，它與物鏡的有效直徑成正比，與焦點的距離成反比。顯微鏡觀察時，若想增大NA值，孔徑角是無法增大的，唯一的辦法是增大介質(zhì)率n值?；谶@一原理，就產(chǎn)生了水浸系物鏡和油浸物鏡，因介質(zhì)的折射率n值大于1，NA值就能大于1。數(shù)值孔徑最大值為1.4，這個數(shù)值在理論上和技術(shù)上都達到了極限。目前，有用折射率高的溴萘作介質(zhì)，溴萘的折射率為1.66，所以NA 值可大于1.4。與其他參數(shù)的關(guān)系：數(shù)值孔徑是顯微鏡物鏡的重要參數(shù)，決定了物鏡的分辨率。與物鏡的放大倍數(shù)，工作距離，景深有直接關(guān)系。一般來說，它與分辨

3、率成正比，與放大率成正比，焦深與數(shù)值孔徑的平方成反比，NA值增大，視場寬度與工作距離都會相應(yīng)的變小。 容易產(chǎn)生的誤區(qū)：數(shù)值孔徑與分辨率成正比，但這并不是說在選擇物鏡的時候一定要選擇數(shù)值孔徑(NA)最大才是最好，因為物鏡還會有很多其他重要參數(shù)，比如熒光透過率、工作距離等等，最好根據(jù)自己的實驗選擇。二、焦深 焦深也叫景深，其定義是：指使用顯微鏡觀察和拍攝樣品表面時，從對準(zhǔn)焦點的位置開始，改變物鏡與樣品表面的距離時，對焦能夠保持清晰的范圍。肉眼的調(diào)整能力因人而異，所以焦深也會出現(xiàn)因人而異的情況?，F(xiàn)在常用的是與實驗結(jié)果比較一致的Berek 公式。三、齊焦距離 齊焦距離是指，對準(zhǔn)焦點時的物鏡鏡體定位面到物體表面的距離。OLYMPUS UIS2/UIS光學(xué)系統(tǒng)物鏡的齊焦距離為45 mm，ZEISS ICCS光學(xué)體統(tǒng)、LEICA HC光學(xué)系統(tǒng)的齊焦距離也是45mm，NIKON CFI 60 光學(xué)系統(tǒng)的齊焦距離是60mm。齊焦距離示意圖四、工作距離 工作距離也叫物距，即指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離。 鏡檢時，被檢物體應(yīng)處在物鏡的一倍至二倍焦距之間。因此，它與焦距是兩個概念，平時習(xí)慣所說的調(diào)焦，實際上是調(diào)節(jié)工作距離。在物鏡數(shù)值孔徑一定的情況下，工作距離短孔徑角則大。數(shù)值孔徑大的高倍物鏡，其工作距離小。五、分辨率