1、“畜牧微生物學(xué)” 實(shí)驗(yàn) 2009-2010-1 華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,大實(shí)習(xí) 鮮乳的微生物學(xué)檢驗(yàn)（1周）,一目的 1. 對(duì)微生物學(xué)基本操作技能進(jìn)行綜合性操作訓(xùn)練。 2了解實(shí)驗(yàn)方案的設(shè)計(jì)思路。 3掌握鮮乳中含菌量的計(jì)數(shù)方法。 4學(xué)習(xí)鮮乳的大腸菌群最近似數(shù)的測(cè)定方法。 二內(nèi)容 1鮮乳中含菌數(shù)的檢驗(yàn) 2大腸菌群最近似數(shù)（MPN）的測(cè)定,（一）原理,一個(gè)活菌可長(zhǎng)成一個(gè)菌落，計(jì)算菌落數(shù)。,一. 鮮乳中含菌數(shù)的檢驗(yàn),（二）方法,稀釋傾注平板計(jì)數(shù)法,total bacteria amount,Plate counts and serial dilutions :,* Pour plate m

2、ethod,* Spread plate method,（三）步驟 樣品稀釋 傾注平板 培養(yǎng) 計(jì)數(shù),稀釋傾注平板計(jì)數(shù)法示意圖,注：因?yàn)槭菣z測(cè)1ml水樣中的細(xì)菌總數(shù)，故不論哪個(gè)稀釋度，取到平皿中的樣量是1ml。,（四）稀釋傾注平板計(jì)數(shù)法的結(jié)果記錄及報(bào)告,二. 大腸菌群最近似數(shù)（MPN）的測(cè)定,什么叫大腸菌群？ 大腸菌群并非細(xì)菌學(xué)分類命名，而是衛(wèi)生細(xì)菌領(lǐng)域的用語(yǔ)，它不代表某一個(gè)或某一屬細(xì)菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌。 其定義為：需氧及兼性厭氧、在37能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。一般認(rèn)為該菌群細(xì)菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。,（一

3、）原理,大腸菌群數(shù) 100 g 100ml水中所含大腸桿菌群的最近似數(shù)（most probable number MPN）,（二）方法 乳糖膽鹽發(fā)酵法 蛋白胨20g豬膽鹽(或牛、羊膽鹽)5g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸餾水1000mLpH7.4,（三）步驟 初發(fā)酵試驗(yàn) 分離培養(yǎng) 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn),（四）大腸菌群MPN測(cè)定結(jié)果記錄及報(bào)告,大腸菌群MPN測(cè)定結(jié)果記錄表,第一天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 材料及用具的準(zhǔn)備,實(shí)驗(yàn)分組安排,實(shí)習(xí)報(bào)告一： 根據(jù)實(shí)習(xí)內(nèi)容寫出實(shí)驗(yàn)方案（第二天實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前提交）。,第二天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1鮮乳中含菌數(shù)的檢驗(yàn)：樣品稀釋傾注平板培養(yǎng) 2MPN的測(cè)定：鮮乳接種乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng),第三天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 鮮乳中含菌數(shù)的檢驗(yàn)：菌落計(jì)數(shù)、記錄數(shù)據(jù)、得出結(jié)果。 MPN的測(cè)定： （1）觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的發(fā)酵情況并記錄產(chǎn)氣結(jié)果。 （2）分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種到麥康凱瓊脂平板上。,第四天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： MPN的測(cè)定： 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)：挑取每個(gè)平板上的紅色菌落12個(gè)進(jìn)行G染色鏡檢并記錄染色鏡檢結(jié)果，同時(shí)將同一菌落接種微量乳糖發(fā)酵管。,第五天實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1MPN的測(cè)定： 觀察微量乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣情況，記錄結(jié)果，得出最后結(jié)果。 2總結(jié)：回顧整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，設(shè)計(jì)準(zhǔn)備實(shí)施得出結(jié)果清理 3清洗實(shí)驗(yàn)用具。 4. 完成實(shí)習(xí)報(bào)告。,實(shí)習(xí)