1、明膠藥用空心膠囊中鉻檢測方法指導原則的解讀,孫會敏 中國食品藥品檢定研究院 2012.4.30 北京,目 錄,一、背景資料,4月15日，央視每周質量報告欄目披露了國內部分醫(yī)藥生產企業(yè)使用皮革明膠制膠囊，空心膠囊鉻超標，在社會上反響巨大。工業(yè)明膠違法用于生產藥用明膠內幕：,一、背景資料,一、背景資料,一、背景資料,4月15日晚國家藥監(jiān)局發(fā)出緊急通知，要求對媒體報道的13個鉻超標產品暫停銷售和使用。待監(jiān)督檢查和產品檢驗結果明確后，合格產品繼續(xù)銷售，不合格產品依法處理。對違反規(guī)定生產銷售使用藥用空心膠囊的企業(yè)，將依法嚴肅查處。 4月16日中檢院組織召開關于對部分膠囊劑產品開展監(jiān)督抽驗的緊急會議，成立

2、了以李云龍為組長的應急工作領導小組，成立了應急檢驗技術專家組，安排部署應急檢驗的具體事宜。,一、背景資料,發(fā)布明膠藥用空心膠囊鉻檢測 方法指導原則的通知 各省、自治區(qū)、直轄市(食品)藥品檢驗所（院）： 根據國家食品藥品監(jiān)督管理局的要求，為指導明膠藥用空心膠囊中鉻檢測，保證檢驗質量，我院依據中國藥典2010年版（二部）的標準，結合前期工作經驗，組織制定了明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導原則（見附件），供各單位檢測時參考。 附件：明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導原則 ( 二一二年四月二十一日,一、背景資料,一、背景資料,明膠空心膠囊（Vacant Capsules） 系由膠囊用明膠加輔料制成的空心硬膠

3、囊。由帽、體兩節(jié)膠囊殼組成，可容納各種藥粉、液體、半固體和藥片?？裳陲椝幬锏漠愇?，易于吞服，具良好的崩解能力，較長的保質期等優(yōu)點。 規(guī)格尺寸：從大到小依次為000#、 00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8種型號。,明膠藥用空心膠囊的成分,主要原材料：由明膠、甘油、水以及其它的藥用材料(TiO2)組成。明膠約占所有原輔料的90%以上）。 明膠是從動物（牛、馬、豬、魚、驢）的皮、骨、腱、鱗等含膠原蛋白的組織，經過酸、堿或酶水解處理以后降解生成的非均勻多肽混合物，由多種氨基酸所組成。 明膠成分：8590%蛋白質，0.3%0.2%礦物質，9%12%水分。 外觀近于無色或者呈淡黃色， 為透明、

4、無特殊臭味的固體， 分子量為1.75-45萬。,明膠的分類和行業(yè)標準,根據用途分為三類：藥用明膠，食用明膠和工業(yè)明膠(照相明膠)。 有關標準 膠囊用明膠： 中國藥典2010年版（二部）（Cr:2.0mg/kg） Gelatin ： EP7.0/BP2010 （Cr:10ppm） USP34（Cr:沒有規(guī)定） JP16（Cr:沒有規(guī)定） 藥用明膠： QB 2354-2005 （Cr:2.0mg/kg）(QB:輕工行業(yè)標準) 食品添加劑 明膠： GB 6783-94 （A級：1.0mg/kg，B級：2.0mg/kg） 食用明膠： QB /T 4087-2010 （Cr:2.0mg/kg） 工業(yè)明膠

5、： QB/T 1995-2005 （Cr:沒有規(guī)定。用途：1，火柴的起火劑；2，粘合劑；3，電解工業(yè)；4，紡織工業(yè)；5，感光耐蝕膜；）,二、檢測方法,中國藥典2010年版（二部）明膠空心膠囊項下鉻檢查項（P1204） 取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內，加硝酸510ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內，進行消解。消解完全后，取消解內罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干，用2%硝酸轉移至50ml量瓶中，并用2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液；另取鉻單元素標準溶液，用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0g的鉻標準貯備液，臨用時，分別精密量

6、取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻080ng的對照品溶液。 取供試品溶液與對照溶液，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（附錄IV D第一法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。含鉻不得過百萬分之二（2mg/kg）。,二、檢測方法試驗設備,儀器 原子吸收分光光度計（含石墨爐原子化裝置） 電子天平 微波消解儀 電熱板或其他趕酸設備，如：恒溫消解儀、趕酸器等。 試劑 硝酸（優(yōu)級純,國藥集團） 鉻單元素標準溶液（1000g/ml，國家標準物質）,二、檢測方法試驗步驟,檢驗樣品： 膠囊劑（由明膠空心膠囊殼裝載的膠囊） 檢驗項目： 明膠空心膠囊中的鉻 檢驗所需檢品量的參考

7、值：,二、檢測方法試驗步驟,空心膠囊殼的制備： 參考附錄I E 膠囊劑裝量差異項（附錄8） 具體制備方法：傾出膠囊劑的內容物，膠囊殼用棉棒或小刷試凈（不得損壞囊殼），放置，待用。 膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻的測定方法： 鉻標準貯備液的制備：取鉻單元素標準溶液（1000g/ml），用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0g的鉻標準貯備液(不得超過一個月)。 標準溶液的制備：分別精密量取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻080ng的對照品溶液。臨用時現配。,二、檢測方法試驗步驟,膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻測定方法(過夜) ： 供試品溶液的制備：精密稱取本品0.5g(膠囊整體稱重，如1

8、號膠囊約7個，精密稱定)，置聚四氟乙烯消解罐內，加硝酸510ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內蓋，旋緊外套，置適宜的微波爐內消解。消解完全后，取消解內罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干(12mL)，用2%硝酸轉移至50ml量瓶中，并加2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液，作為空白校正。 測定法：取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（中國藥典2010年版（二部）附錄IV D第一法，標準曲線法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。,二、檢測方法試驗步驟,膠囊劑中明膠空心膠囊殼中鉻新測定方法(不過夜)： 取樣品0.5g，置聚四氟乙

9、烯消解罐中，加硝酸5ml，10030分鐘使溶解，補加硝酸2ml，加水1mL，待冷卻至室溫，加0.5ml氫氟酸，進行第一次微波消解（參考程序為10min升溫至120，保持5min，10min升溫至140，保持15min）。冷卻放氣（無需完全打開消解罐蓋，只需扭松即可）。隨后進行第二次消解（參考程序為10min升溫至150，保持5min，10min升溫至185，保持15min）。冷卻后，加熱趕酸至12ml， 2%硝酸溶液至50ml，作為供試品溶液。同法制備試劑空白溶液；另取鉻單元標準溶液，用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0ug的鉻標準儲備液，臨用時，分別精密量取鉻標準貯備液適量，用2%硝酸溶液稀

10、釋制成每1ml含鉻080ng的對照品溶液。 測定法：取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（中國藥典2010年版（二部）附錄IV D第一法，標準曲線法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。,三、方法學驗證,線性： 制備含鉻的對照品溶液至少5份，濃度依次遞增，最高濃度吸收值應在0.8以下，保證具有較好的線性范圍，相關系數（r）0.99。檢測波長： 357.9nm。 準確性： 應進行整個實驗過程的（包括前處理）方法學回收率驗證，暫定回收率應為80%-120%的范圍內。每波次測定需進行隨行回收試驗，每10個樣品加一個質控樣品。,2ppm,LOQ:0.5ppm,

11、三、方法學驗證,重復性 取限度濃度的標準品溶液重復測定5次，吸收度（測定值）的變化范圍（RSD）不得過5%。 定量限（LOQ） 本方法定量限應不低于0.5mg/kg。,四、注意事項,消解： 樣品前處理是試驗中的關鍵步驟，既要保證消解完全，又要保證消解過程樣品中的鉻不損失，因此試驗中建議加入10ml硝酸（優(yōu)級純），并需要浸泡過夜后一步消解/或不過夜二步消解。參考消解程序為：5min由室溫升至120，維持3min；6min由120升至150，維持2min；6min由150升至180，維持20min。 為避免玻璃容器的干擾，試驗中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材質）定容。,四、注意事項,不同原子吸收儀試驗

12、參數可能不同，可根據原子吸收儀說明書中推薦程序設定測定參數（國產參考石墨爐升溫程序如下：5s升溫至100，保持10s；5s升溫至500，保持10s；0s升溫至2100，保持3s；0s升溫至2200，保持2s） 含鈦白粉的膠囊殼（不透明膠囊）建議在微波消解時，樣品中除加硝酸外可另加0.5ml氫氟酸，其他同供試品溶液制備，注意空白校正和方法學驗證。,四、注意事項,實驗用水：應采用純化水，儲藏水的容器宜用聚乙烯塑料材料制成，不宜選用玻璃容器長期儲存。 試劑應采用優(yōu)級純及以上級別試劑。 試驗中所用容器及器皿均需在每次使用前用鹽酸溶液（濃鹽酸：水/1:1）浸泡1h，再用硝酸溶液（濃硝酸：水/1:1）浸泡

13、1h，再用純化水沖洗干凈后使用。微波消解容器應采用儀器清洗程序清洗，不得采用鉻酸清洗液洗滌容器。,四、注意事項,可供選擇的鉻元素標準溶液（1000g/mL）由國家有色金屬及電子材料分析測試中心提供（電話傳真；也可以由中國計量科學研究院提供（電話4703)。鉻對照貯備溶液應密封，冷暗處保存。 結果判斷：標準規(guī)定不得過百萬分之二(2mg/kg)。由于是微量測定，測定結果的偏差會較大，一般兩份樣品的相對偏差10%，取平均值即可（低濃度尤其明顯）。,四、注意事項,樣品檢測應嚴格遵守中國藥典2010年版（二部）“明膠空心

14、膠囊”鉻項下方法試驗，如因試驗需要改變樣品前處理方法及檢測波長，應按照實驗室有關質量管理程序(偏離)進行。 若試劑空白溶液測定值過高（宜不超過標準曲線最低濃度點吸光度值的50%），應換用空白干擾小的溶液重新試驗。,四、注意事項,注意試驗所需的所有儀器均應在計量檢定合格效期內。 若供試品溶液濃度過高，可稀釋到標準曲線范圍內進行測定。,聯系方式,對本指導原則如有不清楚的地方，請聯系 中檢院包材所： 孫會敏（電話13910586702） 趙霞（電話15901363556） 楊銳（電話15010941516） 中檢院中藥所 金紅宇（電話13611388528） 中檢院化藥所麻醉藥品室 陳華（電話13520311576）,聯系方式,中檢院器械所 馮曉明（電話13366772637） 王?。娫挘?1