1、食用菌菌種的生產(chǎn),1,食用菌的栽培一般包含幾個(gè)步驟：首先是制作菌種，即通過(guò)孢子或菇體組織分離出菌絲體，并加以擴(kuò)大繁殖形成生產(chǎn)菌種；其次是將制好的菌種接于培養(yǎng)基質(zhì)，生產(chǎn)出食用菌子實(shí)體。,孢子,菇體組織,菌絲體,菌 種,培養(yǎng)基質(zhì),子實(shí)體,萌發(fā),分離,2,一 、菌種的制作,食用菌菌種有特定的制作程序，只有掌握了制種技術(shù)，才能生產(chǎn)出優(yōu)良菌種，使食用菌栽培獲得成功。,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,使用目的的不同,保藏用菌種,實(shí)驗(yàn)用菌種,生產(chǎn)用菌種,3,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,物理性狀,固化菌種,固體菌種,液體菌種,外觀形態(tài),顆粒狀菌種,片狀菌種,磚狀菌種,培養(yǎng)

2、容器,袋裝菌種,瓶裝菌種,4,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,培養(yǎng)基的主料,糞草菌種,谷粒菌種,木塊菌種,木屑菌種,5,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,菌種按生產(chǎn)程序,一級(jí)種 (母種）,二級(jí)種（原種）,三級(jí)種(栽培種）,6,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,一級(jí)種,一級(jí)種又稱母種、試管種。,將經(jīng)孢子分離法或組織分離法得到的純培養(yǎng)物，移接到試管斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)而得到的純種。,采用分離法獲得的母種數(shù)量有限，一般可將菌絲再次轉(zhuǎn)接到新的斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行轉(zhuǎn)管繁殖，能得到更多的母種，稱為再生母種，即可用于生產(chǎn)，也適用于純種的保藏

3、。,一支長(zhǎng)滿菌絲體的試管母種可分移成10多支新試管。試管種若不馬上使用，可置于4的冰箱中保存。,7,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,二級(jí)種,二級(jí)種又稱原種，這是由母種轉(zhuǎn)接到裝有麥粒等固體培養(yǎng)基質(zhì)的專有菌種瓶中經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后形成。原種可采用750mL菌種瓶或500mL罐頭瓶作為培養(yǎng)容器。一般一支母種可擴(kuò)大繁殖6-8瓶原種。,若原種直接用于生產(chǎn)，則成本太高，因此，原種還必須進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖成三級(jí)種，使菌種數(shù)量增多，才能用于栽培。由于原種的培養(yǎng)基質(zhì)接近栽培所用的基質(zhì)，因此原種也可用于小規(guī)模的栽培。,8,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（1）菌種類型,三級(jí)種,三級(jí)種又稱栽

4、培種，它是由二級(jí)種進(jìn)一步擴(kuò)大繁殖而得。,栽培種的培養(yǎng)基質(zhì)與二級(jí)種相似，更接近于栽培基質(zhì)。三級(jí)種數(shù)量多、成本低。,栽培種一般采用固體培養(yǎng)基，用聚乙烯塑料袋或玻璃瓶作培養(yǎng)容器。通 常一瓶原種可繁殖30-50袋栽培種。,9,一 、菌種的制作,1、菌種類型及制種程序,（2）制種程序,菌種生產(chǎn)是指通過(guò)無(wú)菌操作，大量培養(yǎng)繁殖菌種的過(guò)程。,10,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（l）配料設(shè)備,切片機(jī)是將木材切成規(guī)格木片的專用機(jī)械，是食用菌培養(yǎng)基質(zhì)粉碎處理的預(yù)前工序設(shè)備。,切 片 機(jī),11,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（l）配料設(shè)備,粉碎機(jī)是將木片、秸稈等原料粉碎成一定粗細(xì)度碎屑的專用

5、機(jī)械。,粉 碎 機(jī),12,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（l）配料設(shè)備,攪拌機(jī)是將培養(yǎng)料通過(guò)攪拌使其分布充分均勻的專業(yè)機(jī)械。其配套動(dòng)力為3KW，每次拌料量為100KG濕重 。,攪 拌 機(jī),13,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（l）配料設(shè)備,裝袋機(jī)是將攪拌混合均勻后的培養(yǎng)料裝入塑料薄膜筒內(nèi)的機(jī)械。,裝 袋 機(jī),14,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（l）配料設(shè)備,將培養(yǎng)料裝入料瓶的機(jī)械。生產(chǎn)上采用的均勻螺旋擠入式裝瓶機(jī)。,裝 瓶 機(jī),15,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（2）滅菌設(shè)備,高壓滅菌鍋是密閉耐壓的金屬滅菌容器。其工作原理是在驅(qū)盡鍋內(nèi)空氣的前

6、提下，通過(guò)加熱把密閉鍋內(nèi)的水蒸氣壓力升高，從而使蒸汽溫度相應(yīng)提高到100以上。壓力在98KPa時(shí)，蒸汽溫度可達(dá)121 。常見(jiàn)的高壓滅菌鍋有手提式、立式與臥式，也有自制的高壓滅菌鍋。手提式主要用于一級(jí)種制作，立式和臥式主要用于二級(jí)種、三級(jí)種和栽培瓶、袋的制作。,16,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（2）滅菌設(shè)備,手提式高壓滅菌鍋的容積小，適用于試管培養(yǎng)基、三角瓶或平皿、無(wú)菌水、少量菌種瓶及一些器皿的滅菌。,手提式高壓滅菌鍋,17,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（2）滅菌設(shè)備,立式高壓滅菌鍋容量大，可用于菌種瓶、罐頭瓶及塑料袋裝培養(yǎng)基的滅菌。,立式高壓滅菌鍋,18,一 、菌

7、種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（2）滅菌設(shè)備,臥式高壓滅菌鍋容量大、盛物多，滅菌徹底，效果好。,臥式高壓滅菌鍋,19,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（2）滅菌設(shè)備,常壓滅菌灶是在自然壓力下產(chǎn)生100蒸汽進(jìn)行滅菌的爐灶，如土蒸鍋。常壓灶制作簡(jiǎn)單，造價(jià)低，很受菇農(nóng)歡迎。,常壓滅菌灶,20,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（3）接種設(shè)備,無(wú)菌室是食用菌生產(chǎn)中無(wú)菌操作的環(huán)境。無(wú)菌室要求嚴(yán)密、清潔。,無(wú)菌室一般有內(nèi)外兩間，外間較小，作為緩沖間。緩沖間可放置工作服、拖鞋、口罩、消毒用藥品等。無(wú)菌室門應(yīng)采用推拉門，內(nèi)外兩間的門應(yīng)呈對(duì)角線安裝，以提高隔離緩沖效果。必 要時(shí)可安裝一個(gè)雙

8、層小型玻璃推拉窗，以便于內(nèi)外物品傳遞，減少進(jìn)出無(wú)菌室的次數(shù)。,21,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（3）接種設(shè)備,為了在使用之后能排濕、通風(fēng)，應(yīng)在室內(nèi)頂部設(shè)置小型排風(fēng)扇，在室內(nèi)的側(cè)面底部設(shè)置玻 璃纖維過(guò)濾進(jìn)氣口。,無(wú)菌室(包括緩沖間)除照明用光源外，還應(yīng)安裝紫外線殺菌燈，吊裝在接種操作臺(tái)的正上 方。,22,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（3）接種設(shè)備,超凈工作臺(tái)：是一種局部層流(平行或垂直流)裝置，它能在局部造成高潔凈度的工作空間；使小房間內(nèi)的空氣經(jīng)預(yù)過(guò)濾器和高效過(guò)濾器除塵、潔凈后，以垂直或水平層流狀態(tài)通過(guò)操作區(qū)，因此，可使操作區(qū)保持既無(wú)塵又無(wú)菌的環(huán)境。,超凈工作臺(tái),2

9、3,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（3）接種設(shè)備,接種箱：是用木材與玻璃制成密閉箱。有單人式或雙人對(duì)接式。接種箱前后斜面為玻璃窗，便于操作時(shí)觀察，可開(kāi)啟，以便取放物品。玻璃窗下的木板有一對(duì)橢圓形開(kāi)孔，操作孔裝有白布袖套，一端固定在圓孔上，另一端套口用松緊帶箍住操作者的手腕，以防雜菌進(jìn)入。箱內(nèi)可安裝20W日光燈和30W紫外線燈管。,24,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（3）接種設(shè)備,A、接種針,B、接種鉤,C、接種環(huán),D、接種鏟,E、接種鋤,F、接種耙,G、接種刀,H、接種勺,I、接種鑷,25,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（4）培養(yǎng)設(shè)備,在制作一級(jí)種和少量二

10、級(jí)種時(shí)，可采用電熱恒溫箱或隔水式電熱恒溫箱，目的是控制溫度，適溫培養(yǎng),恒 溫 箱,26,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（4）培養(yǎng)設(shè)備,培養(yǎng)室：是專門用于培養(yǎng)菌種的場(chǎng)所。各級(jí)菌種在接種完畢之后，即移人培養(yǎng)室。冬季培養(yǎng)室應(yīng)有專用加溫設(shè)備。無(wú)論采用何種方法加溫，都要注意培養(yǎng)室內(nèi)空氣的相對(duì)濕度，一般維持在6570，否則菌瓶失水過(guò)多。菌種培養(yǎng)架可用木制，也可用鋼材或鋁合金材料制成，寬度11.5m，有4-6層，層間距0.4- 1m. 培養(yǎng)室內(nèi)還需溫、濕度計(jì)，用于培養(yǎng)室溫度、濕度的測(cè)量。,27,一 、菌種的制作,2、菌種生產(chǎn)的主要設(shè)備,（5）菌種保藏設(shè)備,多數(shù)菌種要在低溫、干燥、隔絕空氣等環(huán)境中

11、保藏。常用的主要設(shè)備是電冰箱、干燥器、真空抽氣機(jī)等。高溫型菌類的菌種需繼代保藏，由于要越過(guò)寒冷的冬季，常用電熱恒溫箱 .,電 冰 箱,28,一 、菌種的制作,3、制種用品及材料,(1)藥品,基物藥品,制作母種時(shí)常用的藥品有,瓊脂、葡萄糖、蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、蛋白胨、麥芽汁、酵母膏和維生素B1等。,原種和栽培種常用藥品有,石膏粉、碳酸鈣、過(guò)磷酸鈣、蔗糖、紅糖、尿素、硫酸銨等。,29,一 、菌種的制作,3、制種用品及材料,(1)藥品,消毒及殺菌藥品,5甲醛,5石碳酸,0.l高錳酸鉀,75酒精,25漂白粉,0.1升汞,12煤酚皂溶液(又稱來(lái)蘇爾),0.25新潔而滅,30,一 、菌種的制作,3、

12、制種用品及材料,(2)配料用具,常見(jiàn)的配料用具有,攪拌機(jī),天平,桿秤,水泥地,水桶,鐵鏟、鋁鍋、鐵鍋、搪瓷杯、大燒杯、筐、木箱、塑料箱,臉盆,廢油桶,31,一 、菌種的制作,3、制種用品及材料,(3)分裝及檢測(cè)用具,分裝用具有,鐵架臺(tái),漏斗,試管筐,菌種袋(17cmX 33cm、14cmX 28cm等的聚乙烯或聚丙烯插角、平底袋),試管 (18mmXl80mm、20mmX200mm),量杯 (100、250、500mL),菌種瓶 (750mL、500mL鹽水瓶或罐頭瓶),培養(yǎng)皿 (d9cm),三角瓶250mL,32,一 、菌種的制作,3、制種用品及材料,(3)分裝及檢測(cè)用具,檢測(cè)用具有,生物顯

13、微鏡,溫度計(jì),干濕球溫度計(jì),pH試紙,卡尺,33,一 、菌種的制作,3、制種用品及材料,(4)分離及其用具,常用分離用具,鐘罩,棉花,紗布,記錄本、標(biāo)簽紙、筆,尖頭鑷子,酒精燈,廣口瓶,手術(shù)剪,95酒精,其他用具及材料有：紗布、工作衣、托鞋、口罩、無(wú)菌水、頸圈、繩線、回形針、釘書(shū)機(jī)等。,34,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（1）培養(yǎng)基(料)的配制原則,選擇適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),食用菌所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，碳源、氮源和礦質(zhì)元素等，對(duì)每一種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的種類和數(shù)量要求又有所不同。,從母種，原種到栽培種各個(gè)階段的目的和要求不同，所選用的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分也應(yīng)有不同。,母種的初生菌絲比較嫩弱，分解養(yǎng)分能力差，因

14、此要求營(yíng)養(yǎng)豐富、完全，氮源和維生素的比例要高，需選用容易被菌絲吸收利用的物質(zhì)，如葡萄糖、蔗糖、馬鈴薯、玉米粉、麥芽汁、酵母膏、蛋白胨、無(wú)機(jī)鹽類和生長(zhǎng)素等為原料。,原種、栽培種所需培養(yǎng)基數(shù)量較多，而且菌絲分解物質(zhì)能力強(qiáng)，可利用大量農(nóng)作物秸稈、糞草，鋸木屑、棉籽殼、麩皮和米糠等原料作為培養(yǎng)基。,35,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（1）培養(yǎng)基(料)的配制原則,注意各種營(yíng)養(yǎng)成分的比例,培養(yǎng)基(料)中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的比例是影響菌絲生長(zhǎng)的重要因素。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比例適當(dāng)，菌絲生長(zhǎng)發(fā)育就好，否則就差。,應(yīng)根據(jù)不同培養(yǎng)對(duì)象的需要，配以適當(dāng)比例。菌絲生長(zhǎng)要求培養(yǎng)基(料)有一定的碳氮比，一般碳氮比(C：N)以

15、20:1為好。,如培養(yǎng)基(料)中碳源供應(yīng)不足時(shí)，容易引起菌絲的過(guò)早衰老和自溶，如氮源過(guò)多或過(guò)少時(shí)，會(huì)引起菌絲的過(guò)于旺盛生長(zhǎng)或生長(zhǎng)緩慢，對(duì)菌絲生長(zhǎng)造成不良影響。,36,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（1）培養(yǎng)基(料)的配制原則,調(diào)節(jié)適宜的酸堿度(pH),培養(yǎng)基(料)需要保持菌絲生長(zhǎng)發(fā)育所需要的酸堿度，因此配制培養(yǎng)基(料)時(shí)，要用氫氧化鈉、石灰或過(guò)磷酸鈣等調(diào)節(jié)pH值。,各種食用菌所需要的pH值不同，培養(yǎng)基(料)的酸堿度也應(yīng)不同。,如猴頭菌絲喜歡酸性環(huán)境，需調(diào)節(jié)pH值為45;又如草菇菌絲喜堿性環(huán)境，需將pH值調(diào)為758。,37,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（1）培養(yǎng)基(料)的配

16、制原則,選擇經(jīng)濟(jì)實(shí)用的原料,制做培養(yǎng)基(料)的原料，有些價(jià)格比較貴、成本高，可用一些價(jià)格低廉的代用原料。,可用一些農(nóng)副產(chǎn)品代替化學(xué)藥品，常用的有馬鈴薯、麥芽，玉米面、麥麩等。,在食用菌制種中，原種和栽培種因原料用量較大，選擇合適的代用原料，其經(jīng)濟(jì)意義就更大。,過(guò)去多用麥粒和玉米，現(xiàn)在可用鋸木屑和棉籽殼等來(lái)代替。但是選用代用料時(shí)，必須就地取材，來(lái)源豐富、價(jià)格便宜的原則，而且原料沒(méi)有毒性。,38,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,培養(yǎng)基的類型,營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,物理狀態(tài),表面形式,用途,天然培養(yǎng)基,合成培養(yǎng)基,半合成培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,液體培養(yǎng)基,半固體培養(yǎng)基,斜面培養(yǎng)基,平面培

17、養(yǎng)基,高層培養(yǎng)基,母種培養(yǎng)基,原種培養(yǎng)基,栽培種培養(yǎng)基,39,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,天然培養(yǎng)基,天然的有機(jī)物質(zhì)配制而成。如農(nóng)副產(chǎn)品麥麩，米糠，豆餅及許多農(nóng)作物秸稈等，也有動(dòng)植物浸出液，如牛肉膏、麥芽汁、豆芽汁及馬鈴薯汁等。,培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)方便，但它的化學(xué)成分不能定量，每批成分也不穩(wěn)定，不宜用作精確的實(shí)驗(yàn)。常用的天然培養(yǎng)基有馬鈴薯培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基等。,40,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,合成培養(yǎng)基,用已知成分的化學(xué)藥品配制而成。,培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)：是各種成分簡(jiǎn)單而清楚，容易控制，適于進(jìn)行某些定性

18、、定量測(cè)定。,常用的合成培養(yǎng)基有（高氏一號(hào)培養(yǎng)基）、察氏培養(yǎng)基等 。,41,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,半合成培養(yǎng)基,在天然培養(yǎng)基中適當(dāng)添加一些無(wú)機(jī)鹽類，或者在合成培養(yǎng)基中添加少數(shù)天然有機(jī)物質(zhì)配制而成。,培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)：是營(yíng)養(yǎng)全面豐富、宜于控制。常用的有綜合馬鈴薯培養(yǎng)基等。,42,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,物理狀態(tài),液體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基呈液體狀態(tài)。它含有食用菌菌絲生長(zhǎng)發(fā)育所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。,食用菌孢子或菌絲在這種培養(yǎng)基中能夠更好地接觸和吸收養(yǎng)料，因而菌絲體生長(zhǎng)迅速而粗壯，同時(shí)這種液體菌種便于接種工作的機(jī)械化、自動(dòng)化，有

19、利于提高生產(chǎn)效率。,缺點(diǎn)是要發(fā)酵設(shè)備，成本較高，也較復(fù)雜。液體培養(yǎng)基常用來(lái)觀察菌種的培養(yǎng)特征以及檢查菌種的污染情況。,43,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,物理狀態(tài),固體培養(yǎng)基,在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑即成為固體培養(yǎng)基。常用的凝固劑是瓊脂。,根據(jù)季節(jié)和用途的不同，凝固劑的添加量一般在182之間。固體培養(yǎng)基可制成試管斜面，也可制成平皿平面（平板），試管斜面用來(lái)培養(yǎng)和保存菌種，平皿平面可用來(lái)分離和純化菌種。,除了加凝固劑的固體培養(yǎng)基外，天然的固體基質(zhì)做成的培養(yǎng)基也稱固體培養(yǎng)基。在菌種制作中，用麥粒、玉米粒、木屑、棉籽殼、甘蔗渣等農(nóng)副產(chǎn)品制成的培養(yǎng)基也屬固體培養(yǎng)基。,44

20、,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,物理狀態(tài),半固體培養(yǎng)基,在1000毫升液體培養(yǎng)基中，將加入的瓊脂量減少為810克，即成為半固體培養(yǎng)基。它主要用來(lái)培養(yǎng)一些特殊菌類。,45,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,培養(yǎng)基的表面形狀,斜面培養(yǎng)基,將瓊脂培養(yǎng)基裝入試管滅菌后，乘熱放置成斜面，凝固后即成。它用于菌種擴(kuò)大轉(zhuǎn)管及菌種的保藏。,平面培養(yǎng)基,高層培養(yǎng)基,將瓊脂培養(yǎng)基裝入三角瓶中滅菌后，冷至50左右，乘熱倒入滅菌平皿(或不倒入平皿)凝固后即成。它用于菌種分離和研究菌類的某些特征。,將瓊脂培養(yǎng)基裝入試管內(nèi)滅菌后，不擺成斜面，即成高層培養(yǎng)基。接入高層培

21、養(yǎng)基的菌種，發(fā)育的面積雖然小，但這種培養(yǎng)基厚度大，營(yíng)養(yǎng)豐富，存放時(shí)間長(zhǎng)，也不易干燥開(kāi)裂。常用于保存菌種。,46,一 、菌種的制作,4、菌種培養(yǎng)基的制備,（2）培養(yǎng)基的類型,培養(yǎng)基的用途,母種培養(yǎng)基,也稱一級(jí)培養(yǎng)基。它是分離母種或試管種擴(kuò)大繁殖用的培養(yǎng)基。因母種培養(yǎng)基裝在試管內(nèi)，并擺成斜面，因此也叫斜面培養(yǎng)基。,原種培養(yǎng)基,栽培種培養(yǎng)基,也稱二級(jí)培養(yǎng)基通常裝在罐頭瓶或者750毫升容積的菌種瓶?jī)?nèi)，也可裝在1000毫升容積的白色聚丙烯塑料瓶?jī)?nèi)。,也稱三級(jí)培養(yǎng)基，它是供食用菌栽培用的菌種培養(yǎng)基。通常裝在罐頭瓶或750毫升容積的菌種瓶?jī)?nèi)，也可裝在17X 33厘米或l7X28厘米大小的聚丙烯塑料袋內(nèi)。,4

22、7,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制,種菇或種木的選擇和處理,孢子、組織、種木分離,馬鈴薯、瓊脂、葡萄糖等原料,裝入試管的培養(yǎng)基,排成斜面的培養(yǎng)基,母 種,接種,配制,滅菌,培養(yǎng),48,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(1)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制,母種培養(yǎng)基種類很多，常用的有以下幾種：,馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基) 馬鈴薯(去皮)200克，葡萄糖20克，瓊脂1820克，水1000毫升。,馬鈴薯、蔗糖、瓊脂培養(yǎng)基(PSA培養(yǎng)基) 馬鈴薯(去皮)200克，蔗糖20克，瓊脂1820克，水1000毫升。,蛋白胨、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基 蛋白胨2克

23、，葡萄糖20克，磷酸氫二鉀1克，磷酸二氫鉀05克，維生素B1005毫克，硫酸鎂05克，瓊脂18-20克，水1000毫升。,49,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,工藝流程,計(jì)算 配方各物用量,按比例稱量各物質(zhì),配制,調(diào)pH,分裝試管,塞棉塞,滅菌及擺斜面,無(wú)菌檢查,50,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,工 藝 流 程,51,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,首先要選擇合適的浸煮容器，一般選用鋁鍋、搪瓷缸或玻璃燒杯等，而不能用銅，鐵器皿，以免銅銹或鐵銹混進(jìn)培養(yǎng)基中

24、。,母種培養(yǎng)基的制作，按以下順序操作,計(jì)算 先選好培養(yǎng)基配方，按照培養(yǎng)基需要的數(shù)量計(jì)算各種成分的用量，然后稱量。,52,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,稱量 用架盤(pán)天平稱取培養(yǎng)基各種成分的用量，對(duì)一些不易稱量的成分，需采用特殊方式稱量，如牛肉膏比較粘稠，可先稱好一根玻棒和燒杯，再用玻棒取牛肉膏放在燒杯中一起稱。微量元素與生長(zhǎng)因子等，需要量很少，難以稱準(zhǔn)，可先配成較濃的原液，再?gòu)闹腥〕鲂枰牧俊?配制 為避免發(fā)生沉淀，加入的順序一般是先加緩沖化合物，溶解后加入主要元素，然后是微量元素，再加入維生素等。最好是每種成分溶解后，再加入第二種營(yíng)養(yǎng)成分。若各種

25、成分均不發(fā)生沉淀，也可以一起加入。,53,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,配制,若用馬鈴薯、玉米粉、蘋(píng)果、米粉、木屑等原料時(shí)，應(yīng)先制取這些原料的煮汁，然后再把煮汁與其它成分混合,以馬鈴薯葡糖瓊脂培養(yǎng)基為例，說(shuō)明其配制方法。,把選好的馬鈴薯洗凈，去皮挖去芽眼，切成薄片或1厘米大小的方塊，稱取200克放在容器中，加水1000毫升，加熱煮沸2030分鐘，至軟而不爛的程度，用四層紗布過(guò)濾；取其濾液。,54,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,配制,在濾液中加入瓊脂，小火加熱，用玻璃棒不斷攪拌，以防溢出或焦底，至瓊脂

26、全部溶化，再加入葡萄糖和其它營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)使其溶化，最后加水至1000毫升即成。,調(diào)pH 一般用10鹽酸(HCl)或10氫氧化鈉(NaOH)調(diào)pH，用pH試紙進(jìn)行測(cè)試。調(diào)時(shí)要小心，要幾滴幾滴地加堿或加酸，調(diào)至所需要的pH值。,55,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,分裝 培養(yǎng)基配制好后，趁熱倒入大的玻璃漏斗中，打開(kāi)彈簧夾，按需要分裝于試管或三角瓶?jī)?nèi)。裝入試管的培養(yǎng)基量，以試管總長(zhǎng)的1/41/5為好(裝入的培養(yǎng)基切勿沾附管口壁)。裝入三角瓶培養(yǎng)基量，一般不要超過(guò)瓶容量的13每裝完一支試管或一個(gè)三角瓶隨即關(guān)閉彈簧夾，并把試管放進(jìn)小鐵絲筐內(nèi)。,56,一 、菌種的

27、制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,塞棉塞 培養(yǎng)基分裝到試管或三角瓶后，管口或瓶口要塞上棉塞。棉塞用普通棉花，不要用脫脂棉，因脫脂棉易吸水變潮，導(dǎo)致雜菌生長(zhǎng)。棉塞的作用是過(guò)濾空氣，避免雜菌污染培養(yǎng)基。,棉塞的制作是取適量棉花作成均勻片狀，將一邊向里折疊再將對(duì)面的另一邊向里折疊，然后從一毛邊開(kāi)始將棉花卷緊。使之成為兩邊齊的一柱形，末端的棉絮自然地平貼在棉柱上。棉塞長(zhǎng)度一般為4、5CM左右；最后將棉塞塞入試管內(nèi)，塞入管內(nèi)長(zhǎng)度約為棉塞總長(zhǎng)度的23。,57,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,塞棉塞,棉塞制作過(guò)程,58,一 、菌種

28、的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,塞棉塞,棉塞塞入試管后要緊貼管壁，不留縫隙，大小、松緊均要合適，既便于通氣，又能防止雜菌侵入。檢查松緊的方法是，將棉塞提起，試管跟著被提起而不滑下，表明棉塞不 松，將棉塞拔出，可聽(tīng)到有輕微的聲音但不明顯，這表明棉塞不緊。,59,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,塞棉塞,棉塞塞好后，每71O支包扎成捆，并在試管上部包上一層牛皮紙，用線繩扎緊。包紙的作用是避免滅菌時(shí)冷凝水淋濕棉塞，并能防止接種前培養(yǎng)基水分散失或雜菌污染。,60,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）

29、培養(yǎng)基的配制方法,滅菌及擺斜面 將包扎好的試管豎直放入手提高壓滅菌鍋內(nèi)，105千克厘米2 （0.11MPa），120滅菌30分鐘，冷卻到70左右，從鍋內(nèi)取出，趁熱擺成斜面。一般斜面長(zhǎng)度達(dá)試管長(zhǎng)度的1/2為宜，待冷卻后即成斜面培養(yǎng)基。滅菌的三角瓶中的培養(yǎng)基，倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中(每皿倒入1520毫升)，凝固后即成平板培養(yǎng)基。,61,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(2)母種（一級(jí)種）培養(yǎng)基的配制方法,滅菌后的培養(yǎng)基要進(jìn)行無(wú)菌檢查，取數(shù)支斜面培養(yǎng)基放人25左右的恒溫箱中培養(yǎng)23天，若無(wú)雜菌生長(zhǎng)便可使用。若暫時(shí)用不完，用紙包好放人4冰箱保存。,無(wú)菌檢查,62,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制

30、備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,工藝流程,設(shè)計(jì)培養(yǎng)基質(zhì)配方,按比例稱量各物質(zhì),天然材料如棉籽殼、木屑等主料的預(yù)處理,混合,調(diào)節(jié)含水量,裝瓶裝袋,滅菌,冷卻使用,63,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,常用培養(yǎng)料配方,闊葉樹(shù)木屑78，,木屑麩皮培養(yǎng)料,米糠或麩皮20，,石膏1，,糖1。,64,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,常用培養(yǎng)料配方,棉籽殼68，,棉籽殼木屑培養(yǎng)料,木屑10，,麩皮或米糠20，,碳酸鈣1，5，,石灰0.5。,65,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培

31、養(yǎng)基的配制方法,常用培養(yǎng)料配方,玉米芯90，,玉米培養(yǎng)料,麥麩5，,玉米粉2，,葡萄糖1，,過(guò)磷酸鈣1，,石膏1 。,66,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,原種、栽培種培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題,除針葉樹(shù)松、杉、柏和具芳香、異味和有毒的樟、楠木等樹(shù)種外，一般闊葉樹(shù)的木屑均可利用。木屑需曬干保存。陳木屑比新鮮木屑好。松、杉木屑經(jīng)陳放或加石灰堆制處理后可與雜木屑搭配用，用量占總量的13為宜。麻櫟樹(shù)等鞣酸高的木屑對(duì)香菇生長(zhǎng)有利，但對(duì)其他食用菌菌絲生長(zhǎng)有一定的抑制作用。使用時(shí)應(yīng)加以選擇。,麩皮、米糠要求新鮮，凡久存、變質(zhì)、結(jié)塊的麩糠，不再采用；麩糠的用量一般

32、不低于15，不高于30；天冷可多些，天熱宜少些；平菇、鳳尾菇可少加些，金針菇應(yīng)稍多些。香菇培養(yǎng)基中加米糠更好，而木耳以麩皮為好。,67,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,原種、栽培種培養(yǎng)基配制時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題,碳酸鈣應(yīng)采用輕質(zhì)碳酸鈣，它與石膏可通用，熟石膏與生石膏有效成分相同。,白糖、飴糖、砂糖、甘薯糖等均可用，紅糖更好。糖精不是糖，不可代替。,水應(yīng)清潔無(wú)油污，每天首次使用的自來(lái)水，應(yīng)先排放掉前面含鐵銹高的一段水，而后再用于拌料。,配方中各種成分必須正確稱取，不可隨意增減。,加水拌制，就意味著雜菌開(kāi)始生長(zhǎng)、繁殖。因此，拌 料、分裝至滅菌時(shí)間越短越好，特

33、別是夏季，時(shí)間拖長(zhǎng)，易引起培養(yǎng)基酸敗、變質(zhì)。,68,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,配制方法,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,以棉籽殼、木屑為主的干培養(yǎng)料，應(yīng)將其加水120-130，充分拌和：使其充分吸進(jìn)水，使混合培養(yǎng)料含水量在55-65。其含水量可用手握法簡(jiǎn)單測(cè)定，抓一把培養(yǎng)料在手掌心，用力握捏，手指縫間有水跡滲出，但不成滴。,以小麥、玉米；稻谷為主料的，則應(yīng)先將主料加水浸泡4-6h，然后加熱煮沸1520分鐘，麥粒、玉米不能煮得過(guò)軟，以粒心尚有干白部分為度，然后撈出備用。對(duì)于輔料，則加少量水溶解后，與培養(yǎng)料混合即成。,69,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,裝瓶滅菌,(3

34、)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,為便于觀察和接種，原種容器一般采用透明的專用菌種瓶；瓶口內(nèi)徑為3225MM，瓶徑高度為40MM，容量為750ML。也可采用500ML罐頭瓶；但因其瓶徑大，易造成污染和干燥，且瓶頸過(guò)短，棉塞塞不牢固，易脫落。,70,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,裝瓶滅菌,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,栽培種容器采用瓶子外，也可用聚丙烯塑料袋，其規(guī)格長(zhǎng)15CM、寬28CM、厚度0.06CM，過(guò)薄易破裂，感染雜菌。袋口套上塑料環(huán)，其高為2-3CM，直徑4CM、采用塑料袋制種可節(jié)省掏瓶人工，減少麻煩.,除谷粒(玉米、麥粒等)料直接裝至瓶肩處外，木屑、糞草等料都要松緊

35、適度，過(guò)緊則接種后透氣不良，菌絲生長(zhǎng)緩慢；過(guò)松則菌絲生長(zhǎng)雖快，但稀疏無(wú)力。裝料時(shí)要壓實(shí)，裝料量以袋子的2/3為宜，使上部留有一定空間，有利于菌絲生長(zhǎng)。,71,一 、菌種的制作,5、菌種培養(yǎng)基的制備,裝瓶滅菌,(3)二級(jí)種、三級(jí)種培養(yǎng)基的配制方法,裝好料后，在料面中央從表面用木棒往下打一洞直至瓶(袋)底或接近瓶底。擦拭瓶(袋)，用棉塞塞好，然后用防水紙或牛皮紙將瓶口棉花塞包好，及時(shí)送入高壓鍋，在147KPa壓力下滅菌1.5-2小時(shí)。,72,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(1)消毒與滅菌的概念,物品上存在著的微生物，為培養(yǎng)出食用菌的純菌體，必須對(duì)食用菌栽培的各環(huán)節(jié)進(jìn)行殺菌，這是生產(chǎn)中的一項(xiàng)基本

36、技術(shù)。,消毒具有殺死致病微生物的作用或方法，稱為消毒。就食用菌菌種生產(chǎn)而言，消毒是指用物理或化學(xué)方法殺滅或消除對(duì)食用菌生長(zhǎng)發(fā)育有害的微生物，通常只能消滅物體表面或環(huán)境中的一部分微生物，但不能達(dá)到消滅所有微生物。,滅菌指徹底殺菌，用物理或化學(xué)等方法，殺死物體上的一切微生物，以及它們的芽孢和孢子，使物體成為無(wú)菌狀態(tài)。,防腐 指防止或抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖，是一種抑菌作用，不能殺死微生物群體 。,73,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,干熱滅菌,烘烤滅菌法,焚燒滅菌法,濕熱滅菌,高壓蒸汽滅菌法,常壓蒸汽滅菌法,間歇滅菌法,煮沸消毒法,巴氏消毒法,輻射滅菌,紫外線輻射

37、,電離輻射,74,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,熱力滅菌 是指利用高溫殺死微生物的方法。高溫可引起微生物蛋白質(zhì)和核酸不可逆變性，細(xì)胞原生質(zhì)凝固，酶被破壞，代謝停止，最后引起微生物細(xì)胞死亡，這種滅菌方法簡(jiǎn)便易行、經(jīng)濟(jì)有效，是食用菌生產(chǎn)中最普遍采用的消毒滅菌方法。,75,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,采用灼燒或干熱空氣進(jìn)行的滅菌，稱為干熱滅菌。,焚燒滅菌法,通過(guò)火焰高溫進(jìn)行的滅菌。適用于耐熱的接種工具如接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種匙等，以及試管口、玻璃瓶口的滅菌等，通過(guò)酒精燈幾次火焰灼燒，一切微生物和芽孢可全部殺死。,

38、干熱滅菌,76,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,采用灼燒或干熱空氣進(jìn)行的滅菌，稱為干熱滅菌。,焚燒滅菌法,干熱滅菌,77,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,采用灼燒或干熱空氣進(jìn)行的滅菌，稱為干熱滅菌。,干熱滅菌,烘烤滅菌法,通過(guò)加熱的高溫空氣進(jìn)行滅菌的方法。電熱干燥箱是干熱滅菌的常用儀器，它是通過(guò)電熱絲進(jìn)行加溫，既可滅菌，也可用于器皿的烘干。適用于固體材料的滅菌如培養(yǎng)皿、三角瓶、試管等，通常采用160滅菌2h，待溫度下降到45以下，方可取出滅菌物品，否則玻璃物品會(huì)因溫度驟然下降而破裂。,78,一 、菌種的制作,6、消毒與

39、滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,通過(guò)蒸汽殺死微生物的方法，稱為濕熱滅菌。在同一溫度下，濕熱 滅菌比干熱滅菌效果好，因?yàn)闈駸釡缇拇┩噶Ρ雀蔁釡缇?，殺傷力?qiáng)。蛋白質(zhì)、原生質(zhì)膠體在濕熱條件下容易變性凝固，酶系統(tǒng)容易被破壞，而且蒸汽進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)凝結(jié)成水，放出潛在熱量而提高了環(huán)境溫度，使殺菌力增強(qiáng)。,濕熱滅菌,79,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,利用高溫高壓蒸汽鍋進(jìn)行滅菌的方法?？梢詺⑺酪磺形⑸铮?xì)菌芽孢、真菌休眠體或孢子等耐高溫個(gè)體。,在密閉系統(tǒng)中，蒸汽壓力增高，溫度也增高，從而提高了殺菌效力。它是一種有效的使用普遍

40、的滅菌方法。,一般母種培養(yǎng)基及液體培養(yǎng)基滅菌采用1034kPa的壓力， 溫度121.2，滅菌時(shí)間30分鐘。如原種及栽培種等采用150kpa的壓力，溫度為128，滅菌時(shí)間為1-2小時(shí)。,80,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,81,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,在使用高壓鍋時(shí)，需注意要將鍋內(nèi)的冷空氣全部排盡。如果鍋內(nèi)留有冷空氣，當(dāng)加熱時(shí)，冷空氣變熱很快膨脹，使壓力上升，造成滅菌鍋內(nèi)壓力與溫度不一致，產(chǎn)生假性蒸汽壓，即假上磅現(xiàn)象。鍋內(nèi)實(shí)際溫度低于蒸汽壓對(duì)應(yīng)的相應(yīng)溫度，

41、致使滅菌不徹底而達(dá)不到滅菌目的。,82,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,83,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,84,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,當(dāng)開(kāi)始加熱滅菌時(shí)，先關(guān)閉排氣閥，當(dāng)壓力升到5kPa左右時(shí)，打開(kāi)排氣閥，集中排出空氣，讓壓力降到零，然后關(guān)閉排氣閥進(jìn)行升壓滅菌。,85,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,高壓蒸汽 滅菌法,在高壓滅菌過(guò)程中，其壓

42、力、溫度、時(shí)間對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分有影響，可采用提高溫度、壓力和縮短滅菌時(shí)間的辦法減少對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的破壞。雖然溫度升高了，破壞增加，但受熱時(shí)間縮短，則總的破壞量減少。,86,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,常壓蒸汽 滅菌法,采用自然壓力的蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。有蒸籠滅菌、流通蒸汽滅菌灶等。常見(jiàn)的是用鋼筋水泥砌成大型的流通蒸汽滅菌灶，一般流通蒸汽溫度為1OO，殺菌時(shí)間為6-8H。其滅菌容量大，可充分殺死微生物，有的一次可滅菌幾千瓶菌種。,87,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,常壓蒸汽 滅菌法,滅菌灶結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低

43、廉，可自行建造，使用普遍，但是滅菌時(shí)間長(zhǎng)，儲(chǔ)耗大且常有滅菌不徹底的現(xiàn)象。,88,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,間歇滅 菌法,指間歇一定時(shí)間，連續(xù)消毒幾次而滅菌的方法，適合于不耐高溫的培養(yǎng)基的滅菌，此法是在常壓下加熱到100，保持20-30分鐘，以殺死其中的營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞，然后將培養(yǎng)基在常溫下或保溫箱中(2837)培養(yǎng)，使芽孢發(fā)芽長(zhǎng)成營(yíng)養(yǎng)體，再用同法殺死新長(zhǎng)成的營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞，如此反復(fù)三次，即可殺死培養(yǎng)基中的全部芽孢和營(yíng)養(yǎng)體，達(dá)到滅菌的目的。,89,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,煮沸消 毒法,將物品放入水

44、中煮沸一定時(shí)間進(jìn)行消毒的方法?？蓺⑺牢⑸锏臓I(yíng)養(yǎng)體，但對(duì)細(xì)菌的芽孢、真菌休眠體效果差。若在水中加入25的石炭酸或1的碳酸氫鈉，可提高消毒效果。此法適于制種及栽培過(guò)程中所需的一些物品、器具、器材的消毒。,90,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,熱力滅菌,濕熱滅菌,巴氏消 毒法,將物品在60-70度的溫度下經(jīng)一定時(shí)間消毒，殺死有害微生物的方法。適合于不耐高溫的培養(yǎng)基以及一些食品如牛奶、酒類、飲料的消毒，既可殺死有害微生物，又不破壞營(yíng)養(yǎng)成分。如在蘑菇培養(yǎng)基的發(fā)酵期間，通常采用60-62度的巴氏消毒法，消毒47h，可殺死培養(yǎng)料中的病蟲(chóng)雜菌。,91,一 、菌種的制作,6、消毒與

45、滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,輻射滅菌,利用輻射所產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法，稱為輻射滅菌。它可分為電離輻射和非電離輻射。a射線、射線、r射線、X射線等屬電離輻射；紫外線等為非電離輻射。,92,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,輻射滅菌,紫外線輻射,在200300nm范圍內(nèi)紫外線的殺菌作用最好。紫外線的殺菌作用是因?yàn)樗梢员坏鞍踪|(zhì)(約280nm)和核酸(約260nm)吸收，造成變性失活,引起致死。紫外線的另一殺菌機(jī)制是因輻射空氣產(chǎn)生臭氧，臭氧遇水又化合成雙氧水，這兩種物質(zhì)都能殺菌。,93,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,輻射滅菌,紫外線輻射

46、,無(wú)菌室、接種箱、超凈工作臺(tái)內(nèi)安裝的紫外線燈管，一般照射20-30min，可殺死空氣中的微生物。但紫外線穿透力很弱，一層普通玻璃或水均能濾去大量的紫外線，它也不能穿過(guò)衣物、紙張等大多數(shù)物體。因此，紫外線只適用于空氣和物體表面的消毒。,94,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,輻射滅菌,紫外線輻射,我國(guó)蘑菇生產(chǎn)中使用的覆土，在日光下曝曬，就是利用日光及其中的紫外線進(jìn)行殺菌。但必須注意，經(jīng)紫外線照射致死或損傷的微生物，通過(guò)自然光照又能復(fù)活，稱為光復(fù)活作用。因此，經(jīng)紫外線殺菌后，不要立即開(kāi)啟日光燈。如白天滅菌，無(wú)菌室、接種室需用黑窗簾或黑布套遮光半小時(shí)，以防止光復(fù)活作用，提高

47、滅菌效果。紫外線對(duì)人體有害，特別對(duì)眼睛有損傷，因此，不能在開(kāi)啟的紫外燈下工作 。,95,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,輻射滅菌,將被照射物質(zhì)的原子核周圍的電子擊出，使其變?yōu)殛?yáng)離子，擊出的電子可附著在其它原子上，使其變成陰離子，也可以再?zèng)_擊其它原子，引起繼發(fā)電離。在液體中，射線使水電離成H+和OH一 ，可直接作用于微生物細(xì)胞本身而致死。,電離輻射,96,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,重金屬 鹽類,微生物浸在O1-05硝酸銀、升汞溶液中，幾分鐘就會(huì)死亡。食用菌組織分離及菇木分離菌種時(shí)

48、，常用01升汞溶液進(jìn)行表面消毒。,97,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,氧化劑,常用于消毒的氧化劑有：1高錳酸鉀、1過(guò)氧化氫、02-05過(guò)氧乙酸、051漂白粉等。其殺菌機(jī)制是通過(guò)強(qiáng)烈的氧化作用，破壞微生物的原生質(zhì)或酶蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。,98,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,還原劑,甲醛是常用的殺菌還原劑。市售的福爾馬林含37一40的甲醛溶液。5的甲醛溶液常用于防腐。培養(yǎng)室、無(wú)菌室消毒常以lOmLm3福爾馬林原液加5g高錳酸鉀氧化熏蒸。

49、甲醛能與微生物細(xì)胞蛋白質(zhì)的氨基結(jié)合，引起蛋白質(zhì)變性，使原生質(zhì)失去正?；顒?dòng)能力。,99,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,還原劑,噴霧消毒時(shí)甲醛溶液體積分?jǐn)?shù)為5。甲醛還有防腐作用，以1：9稀釋液可浸制食用菌標(biāo)本。但甲醛有毒，對(duì)人的眼睛、呼吸道、皮膚等有強(qiáng)烈刺激，應(yīng)注意防護(hù)。,100,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,表面活 性劑,表面活性劑主要破壞菌體細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，造成胞內(nèi)物質(zhì)泄漏；蛋白變性，菌體死亡。025肥皂溶液是一種陰離子表面活性劑，它對(duì)鏈球菌作用比01升汞或07來(lái)蘇爾還要強(qiáng)。常用的025新潔爾滅液用于皮膚消毒，它是人工合成的季胺鹽陽(yáng)離子表面活性劑。,101,一 、菌種的制作,6、消毒與滅菌,(2)常用消毒和滅菌方法,藥劑消毒,利用化學(xué)藥劑進(jìn)行殺菌或抑菌的方法稱為藥劑消毒,酚 類,常用的苯酚又稱石炭酸，其05