1、,尿液微量蛋白檢測和臨床意義,蔡曉平,艾 迪 康 醫(yī) 學 檢 驗 中 心,“五項”還是“六項”,過敏原,4,項目清楚：,“定性”還是“定量”,最好能寫出單個項目名稱！,HPV檢測 ： HPV6-11、HPV16-18需要取2管分泌物標本,C肽/胰島素釋放試驗 ： 需要抽5管血,5,標本少送：,主要內(nèi)容,尿微量白蛋白,尿IgG,尿2微球蛋白,尿轉(zhuǎn)鐵蛋白,尿1微球蛋白,尿視黃醇結合蛋白,分子量：69000 分子直徑：3.6nm PI:4.9 腎小球濾過膜：不濾過 腎小管重吸收：少量,一、尿微量白蛋白,理化性質(zhì)：,分子量：77000 分子直徑：3.8nm PI:5.2 腎小球濾過膜：不濾過 腎小管重

2、吸收：少量,二、尿轉(zhuǎn)鐵蛋白,理化性質(zhì)：,分子量：150000 分子直徑：10-50nm PI:5.8-7.2 腎小球濾過膜：不濾過 腎小管重吸收：少量,三、尿免疫球蛋白IgG,理化性質(zhì)：,分子量：11800 分子直徑：3.4-3.8nm PI:4.9 腎小球濾過膜：自由濾過 腎小管重吸收：幾乎全部,四、尿2微球蛋白,理化性質(zhì)：,分子量：26000-33000 分子直徑：3.6nm PI:3.6-4.4 腎小球濾過膜：自由濾過 腎小管重吸收：99.9,五、尿1微球蛋白,理化性質(zhì)：,分子量：21000 分子直徑：3.8nm PI:4.4-4.8 腎小球濾過膜：自由濾過 腎小管重吸收：95-99,六

3、、尿視黃醇結合蛋白,理化性質(zhì)：,尿微量蛋白的檢測方法,傳統(tǒng)測定微量蛋白的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其檢測精度較差,操作繁雜。免疫散射比濁法操作簡便,測量精度較高,結果更準確,但是必須使用特定蛋白分析儀,儀器和試劑昂貴，給使用帶來一定的影響，而透射比濁法則可用于各種自動化分析儀，具有速度快、省試劑、適于批量檢測的優(yōu)點為臨床上高血壓和糖尿病腎損害的早期診斷提供了一個更為快速、簡便的方法。,免疫透射比濁法,原理： 利用抗原（白蛋白）和特異性抗體（羊抗人白蛋白抗血清）相結合，形成不溶性免疫復合物，使反應液產(chǎn)生混濁，其濁度高低即透光度減少、吸光度增加反映血清樣本中

4、白蛋白的濃度，可由校準品所作的濃度吸光度相應曲線算出。,免疫透射比濁法,影響免疫比濁測定的主要因素 抗原、抗體比例與濁度關系：抗原過量，出現(xiàn)“帶現(xiàn)象”，IC分子小，且可發(fā)生再解離，濁度下降，光散射減少?？贵w過量，IC形成隨抗原量增加到抗原抗體最適比例時達高峰。抗體須過量但又必須適量，抗體濃度是測定關鍵。,免疫透射比濁法,影響免疫比濁測定的主要因素 抗體質(zhì)量：特異性、效價、親和力、R型抗體 高親和性抗體的抗原結合點與抗原表位的空間構型上非常適合，兩者結合牢固，不容易解離。反之，低親和性抗體與抗原形成的復合物較易解離。,免疫透射比濁法,影響免疫比濁測定的主要因素 R型抗體以家兔免疫血清為代表，具有

5、較寬的抗原抗體合適比例范圍，只在抗原過量時，才易出現(xiàn)溶性免疫復合物，大多數(shù)動物的免疫血均屬此型。 H型抗體以馬免疫血清為代表，其抗原與抗體的合適比例范圍較窄，抗原或抗體過量，均可形成可溶性免疫復合物。人和許多大動物的抗血清皆屬H。,免疫透射比濁法,影響免疫比濁測定的主要因素 反應溶液：pH6.58.5，適當濃度電解質(zhì)（中和抗原抗體復合物表面電荷，促進凝聚）、離子強度（大，IC形成快）；一般常用磷酸鹽緩沖液。,免疫透射比濁法,影響免疫比濁測定的主要因素 增濁劑：非離子型親水劑如聚乙二醇（PEG）、吐溫-20等，以PEG6000最好，濃度一般為3%4%。濃度過高可致非特異沉淀。,免疫透射比濁法,免

6、疫比濁法測定的注意事項： 1.標本 3.定標 2.試劑 4.線性,免疫透射比濁法,尿微量白蛋白檢測方法,檢測方法：,原理： 利用抗原（白蛋白）和特異性抗體（羊抗人白蛋白抗血清）相結合，形成不溶性免疫復合物，使反應液產(chǎn)生混濁，其濁度高低即透光度減少、吸光度增加反映血清樣本中白蛋白的濃度，可由校準品所作的劑量相應曲線算出。,微量蛋白檢測臨床意義,正常腎小球基底膜具有34nm的微孔,并帶有一層負電荷,即具有孔徑屏障和電荷屏障,使血漿中帶負電荷的中等分子及大分子蛋白質(zhì)不易通過。在正常情況下,腎小球濾液中的小分子蛋白質(zhì)95%99%可通過腎小管重吸收,因而尿液中蛋白質(zhì)含量很少。正常生理情況下,尿中這些蛋白

7、質(zhì)含量僅為微克或毫微克水平,在各種致病因子作用下,腎小球濾過膜和腎小管發(fā)生結構和功能損傷,使尿液中蛋白質(zhì)過高,超過了腎小管的重吸收功能而出現(xiàn)蛋白尿。,（1）標本由臨床運送至實驗室要盡可能 快，必須分離出血清（漿）后運送； （2）標本運送要注意防止標本外溢、蒸發(fā)和污染（標本管要蓋蓋子）； （3）足量。,四、標本保存與運送：,每一個標本都是唯一的，不可替代的！ 每一個標本都是危險的，具有潛在傳染性！,腎 小 球 濾 過 膜 示 意 圖,微量白蛋白檢測臨床意義,微量清蛋白尿?qū)υ缙谀I損害診斷具有重要意義。實踐證明,單一指標有其局限性。因為早期腎損害不僅是腎小球損害,有的可以是腎小管功能的受損,也可以是

8、兩者同時受損。 正常尿中蛋白質(zhì)以白蛋白為主，而分子量低于50 000的蛋白質(zhì)大部分被腎小管重吸收，而尿中含量極微。健康人尿中mAlb95%可信限95%可信限，即為早期腎小球損傷。這類患者處于疾病早期，及時檢出進行治療，可阻斷病情向不可逆蛋白階段發(fā)展，對提高病人今后的生存質(zhì)量和減輕社會醫(yī)療經(jīng)濟負擔具有重大意義。,微量白蛋白檢測臨床意義,進十年來，mAlb檢測方法經(jīng)過放射免疫法，酶免疫法和免疫濁度法3個階段，已逐漸成熟起來。目前，免疫濁度測定技術已得到推廣。速率散射濁度法靈敏度，準確度，精密度均較好，但需用高質(zhì)量的特種蛋白分析儀。而透射比濁法則可用于各種自動化分析儀，具有速度快、省試劑、適于批量檢

9、測的優(yōu)點。,轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義,轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白一樣均屬小分子帶負電荷蛋白。前者分子量為77000，直徑為3.8nm，后者為66000，分子直徑為3.6nm。雖然轉(zhuǎn)鐵蛋白分子量略大于白蛋白，但所帶的負電荷明顯小于白蛋白。由于漏出腎小球基底膜的蛋白質(zhì)除了要受基底膜網(wǎng)孔大小屏障的影響外，還要受到電荷屏障的影響。腎小球基底膜上存在大量帶負電荷的蛋白，如硫酸肝素糖蛋白、唾液酸等，可阻止帶負電荷的循環(huán)蛋白從腎小球中濾過。糖尿病腎病早期、腎小球基底膜電荷屏障功能減退早于裂孔大小屏障，故帶負電荷少的TF比白蛋白更容易被腎小球濾過。因此對糖尿病早期腎病的預測，尿TF比微量白蛋白更敏感。在高血壓腎病時，尿TF

10、也可顯著增高。,轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義,TRF為中分子蛋白，常作為尿蛋白選擇性指數(shù)的計算指標。在急性腎小球腎炎、慢性腎小球腎炎、慢性腎功能不全等疾病中尿TF均可升高。 血清轉(zhuǎn)鐵蛋白的臨床意義： 血清TRF濃度受鐵離子供應的調(diào)節(jié)，與血漿中鐵離子濃度呈負相關。測定血清中TRF含量可用于貧血的診斷、療效觀察、肝病預后判斷。TRF也是一種負時相反應蛋白。 增高：常見于缺鐵性貧血、妊娠未期、口服避孕藥及使用雌激素等。 減少：常見于嚴重肝病、營養(yǎng)不良、急慢性炎癥、惡性腫瘤、結締組織病、腎病綜合癥、慢性腎功能衰竭、嚴重燒傷、胃腸道疾病及再生障礙性貧血等。,轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測臨床意義,腦脊液TRF的臨床意義： 增高可

11、見于吉蘭-巴雷綜合癥、結核性腦膜炎、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、腦出血及慢性缺鐵性貧血。 減少：可見于急慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、腦膜白血病及腦腫瘤等。,尿免疫球蛋白G檢測臨床意義,免疫球蛋白是指具有抗體活性或化學結構上與抗體相似的球蛋白。根據(jù)其重鏈定區(qū)的分子結構與抗原特異性不同,可分為五類,即IgG、IgA、IgM、IgE、IgD。人血清中以IgG含量最多,占血清中Ig7580%。主要由脾臟和淋巴結中漿細胞合成,半衰期約23天。它較其他Ig更易透過毛細血管壁,彌散到組織間隙中。人體任何組織中都有IgG分布。IgG的分子量為1517萬而正常腎小球濾過膜只允許分子量4萬的蛋白通過。故血清中IgG不能通過腎小球濾過

12、,尿液含量甚微。,尿免疫球蛋白G檢測臨床意義,實驗證明,分子量40萬的蛋白,可通過毛細血管內(nèi)皮孔,但被基膜阻攔。分子量16萬,可通過內(nèi)皮孔和基膜,但被足細胞裂孔膜阻攔。分子量4萬,能通過三層濾過膜而進入腎小球囊。故分子量1517萬IgG,能反映腎小球濾過膜基膜受損情況。有人檢測尿IgG以表示尿蛋白的選擇程度,以反映腎小球濾過膜的“漏洞”,若尿中IgG含量增高,尿蛋白選擇性差,腎小球濾過膜損害嚴重,預后差。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,正常人血清內(nèi)2-M濃度相當恒定，0.82.0mg/L(平均為1.8mg/L)，臨界范圍是2.02.4mg/L，2.5mg/L以上為異常。 2-M容易通過腎小球濾膜，

13、但幾乎全部由近曲小管以胞飲形式攝取，在局部被代謝降解為氨基酸。正常人每天從腎小球濾過的2-M約為340mg，但尿中每天最大排泄量只有370ug，僅占濾過總量的0.1%。尿中正常健康人2-M濃度為0.030.37mg/L(或0.30mg/L或0.20mg/gCr)。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,尿液中的2-M不很穩(wěn)定，酸性尿，尤其是pH5.2以下時極易分解。測定尿液2-M的標本，取得后及時測定或調(diào)節(jié)pH6.57.0，放冰箱保存。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,2-M測定的臨床意義： 1.評價腎小球疾?。?對腎小球濾過功能，其敏感度顯著高于目前常規(guī)應用的血肌酐測定，部分患者的腎小球功能雖已受損，當血肌酐

14、還不能反映異常時，血2-M已顯示腎功能的異常。因此，對血肌酐測定處于盲區(qū)而腎小球濾過功能已受損害的患者，測定其尿中2-M有利于早期發(fā)現(xiàn)腎小球濾過功能異常。 對IgA腎病，尤其是腎小球硬化者，即使腎功能正常，2-M也增高，可能由于該類疾病的患者體內(nèi)免疫反應較強，淋巴細胞被激活，從T和B淋巴細胞中釋放的2-M增加之故。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,2.評價腎小管疾?。?可早期識別氨基甙類抗生素或鎘等在金屬的腎中毒。藥物主要集中在近端小管，當局部濃度高出血清50倍時，往往在血肌酐升高前46天，尿中2-M即可增加兩倍以上。對于重金屬中毒腎損害的流行病調(diào)查，尿2-M可作為篩選試驗。 2-M水平為小管間質(zhì)性

15、疾病的靈敏指標，如Bartter綜合癥、萬可尼綜合癥、Willson病，以及原發(fā)性間質(zhì)性腎炎等，尿中2-M均升高。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,3.鑒別上尿路與下尿路感染：上尿路感染時累及腎小管，而下尿路感染則無腎小管損傷。因此，測定尿中2-M可確定感染部位。動態(tài)觀察有助于療效觀察及早期發(fā)現(xiàn)復發(fā)者。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,4.監(jiān)測腎移植后排異反應：腎移植剛完成時，血清2-M有時比肌酐下降得更早。因為腎移植后存活的腎小管細胞分解了從原尿或腎小管周圍毛細血管重吸收的2-M。發(fā)生排斥反應時，由于腎功能下降，加上排斥引起的炎癥刺激宿主的淋巴細胞而使2-M合成增加、血清2-M升高，往往比血肌酐升高要早

16、幾天。因此，血、尿2-M的變化對早期識別排斥反應提供了一項的價值的輔助診斷指標。無排斥或偶有輕度排斥反應的腎移植病人尿2-M不高，有排反應者，在排斥期前17天就可以見到尿2-M明顯升高。在沒有腎功衰竭時，尿2-M增高一般表示移植后免疫損傷引起的腎小管功能障礙。由于免疫抑制劑可影響2-M的合成，在采用此類制劑控制急性排斥時，對2-M變化的意義就難以評價了。,尿2微球蛋白檢測臨床意義,5.某些惡性疾病和免疫性疾病，2-M合成加快，導致血2-M升高，但尿液2-M并不隨之升高。如多發(fā)性骨髓瘤、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、何杰金氏病、干燥綜合癥、淋巴瘤、白血病、愛滋病、肝炎等，在無腎功能損害的情況下

17、，血2-M也升高。判斷這些疾病患者2-M增高的意義時，必須除去腎外因素。 血2-M水平升高，由于GFR降低者，主要見于腎功能衰竭。長期血液透析病人，血清2-M濃度明顯升高，其水平與血液透析的療程長短呈正相關。長期血液透析，可出現(xiàn)淀粉樣變，其原纖維(Fibrils)的主要構成部分為2-M，腹膜透析不出現(xiàn) 上述現(xiàn)象。,尿1微球蛋白檢測臨床意義,尿1-微量蛋白1-MG是一種小分子蛋白, 分子量約為26000-33000u的糖蛋白，由肝臟產(chǎn)生。存在于血中的游離型1-MG可經(jīng)腎小球濾過膜自由濾過并極大部分被腎近曲小管重吸收而分解。正常情況下,尿1-MG排泄甚微,當腎近曲小管受損時,排泄率明顯增加,因而尿

18、1-MG是反映腎近曲小管受損的敏感指標，由于尿中微球蛋白不受PH值影響，一般認為血清或尿液標本在pH48之間，4保存一周，1-微球蛋白仍可保持穩(wěn)定。因此在腎臟疾病診斷中具有重要的臨床應用價值。,尿1微球蛋白檢測臨床意義,臨床意義： 1. 腎功能損傷的早期診斷：1-MG作為低分子量蛋白質(zhì)，在腎小管性蛋白尿，腎小球性蛋白尿和混合性蛋白尿患者排泄量均明顯增加。故在腎小球腎炎、腎功能不全、高血壓、糖尿病和抗生素及其它藥物引起的腎臟損害中，尿中-MG均可增加。,尿1微球蛋白檢測臨床意義,2. 鑒別診斷上泌尿道與下泌尿道感染、腎性與腎后性血尿和蛋白尿：在上泌尿道感染。腎性血尿和蛋白尿時尿中1-MG明顯增多

19、。反之下泌尿道感染及腎后性血尿和蛋白尿時尿中1-MG無明顯增多。,尿1微球蛋白檢測臨床意義,3. 尿1-微球蛋白升高： 腎小球、腎小管發(fā)生病變時，尿1-微球蛋白水平升高，與判斷腎功能的另外二項指標2-微球蛋白(2-M)和肌酐(Cr)呈密切相關。肌酐廓清率(Ccr)在100ml/分以下時，1-微球蛋白升高，Ccr為80ml/分以下時，2-M開始升高?？梢?-微球蛋白比2-M敏感，而且患惡性腫瘤時不升高，因此，與2-M相比，1-微球蛋白在早期和鑒別診斷腎功能方面更具有臨床價值 。,尿視黃醇結合蛋白檢測臨床意義,視黃醇結合蛋白(retinol-bindingprotein,R為血中維生素A的特異轉(zhuǎn)運

20、蛋白。1968年Kanai等首次分離發(fā)現(xiàn)了RBP,1971年Peterson和Berggard從尿中將其分離。RBP為低分子量蛋白,能自由濾過腎小球,近端腎小管幾乎完全重吸收,其在血尿中變化與腎臟疾病密切相關。,尿視黃醇結合蛋白檢測臨床意義,。,RBP的理化特性和生理功能，RBP為一種單一肽鏈蛋白質(zhì),含有184個氨基酸殘基和3個二硫鍵,有一個結合一分子全反式視黃醇的結合點。RBP分子量為21000,沉降系數(shù)2.132.30,等電點為pH4.44.8,半衰期約為312小時,合成率為每天公斤體重5mg。RBP在肝臟合成,受到全反式視黃醇刺激后分泌出來，釋放入血后與視黃醇(retinol,ROH)、甲狀腺素運載蛋白(transthretin,TTR)以1:1:1