1、1,天然藥物化學,嘉興醫(yī)學院 陳偉光,第五章黃酮類化合物,2,1、掌握黃酮類化合物結構分類、理化性質、鑒別反應、紫外光譜。2、熟悉黃酮類化合物的提取分離方法的原理和應用；熟悉黃酮類化合物的1H-NMR譜學特征。3、了解黃酮類化合物的生物合成、生物活性、結構鑒定和質譜的特征。,目的要求,3,課前復習,1、苷的含義,2、簡述苷和苷元的溶解度,苷上聯(lián)有糖基，極性較大，易溶于水、 醇， 難溶于有機溶劑 苷元一般親脂性，可溶于氯仿、乙醚、 乙酸乙酯、醇等有機溶劑，難溶于水。 碳苷由于特殊的結構溶解度較小,由糖或糖衍生物的 端基碳原子與非糖 類物質連接而成的 化合物,4,本章內容,第一節(jié) 概述 第二節(jié) 黃

2、酮類化合物的理化性質及顯色反應 第三節(jié) 黃酮類化合物的提取分離 第四節(jié) 黃酮類化合物的檢識與結構鑒定 第五節(jié) 結構研究實例,5,2-苯基色原酮 示： 6C-3C-6C 骨架,第一節(jié) 概述,黃酮的含義黃酮類化合物是泛指兩個苯環(huán)通過三碳鏈相互連接而成的一系列化合物，基本結構：,6,黃酮類化合物概論,黃酮類化合物的研究歷史： 1814年分離出第一個黃酮-白楊素 1950年止,發(fā)現黃酮104種 1962年止,發(fā)現黃酮201種 1974年止,發(fā)現黃酮902種 2003年止，發(fā)現黃酮9000個（包括苷）,7,黃酮類化合物概論,黃酮的分布： 黃酮類化合物廣泛分布于植物界 主要在雙子葉植物 其次在裸子植物 較

3、少在單子葉和低等植物,豆科、蕓香科、 唇形科等,銀杏科 杉科,8,一、黃酮類化合物生物合成的基本途徑,黃酮的基本骨架是由三個丙二酰輔酶A和一個桂皮酰輔酶A生物合成而產生的。 同位素標記實驗證明：A環(huán)來自于三個丙二酰輔酶A，而B環(huán)則來自于桂皮酰輔酶A。,9,黃酮生物合成基本途徑,10,黃酮的基本結構,二、黃酮的結構和分類,1,2,3,4,5,6,7,8,2,3,4,5,6,A,C,B,根據三碳鏈的 氧化程度、是否 成環(huán)、B環(huán)的連接 位置等分為十幾類,11,二、黃酮的結構和分類,一、黃酮、黃酮醇類 二、二氫黃酮、二氫黃酮醇類 三、查耳酮、二氫查耳酮類 四、異黃酮、二氫異黃酮類 五、雙黃酮類 六、花

4、色素類 七、黃烷醇類 八、雙苯吡酮類 九、橙酮類,12,一、黃酮、黃酮醇類,OH,OH,OH,OH,HO,2,3,槲皮素,C3有-OH 為黃酮醇,木犀草素 抗菌作用,13,二、二氫黃酮、黃酮醇類,特點：C 23位 雙鍵氫化。 如C3有-OH 為二氫黃酮醇,補骨脂甲素,14,C2 C3單鍵 為二氫查耳酮,補骨脂乙素,三、查耳酮、二氫查耳酮類,6,1,2,1,特點； C環(huán)開環(huán),6,15,三、查耳酮、二氫查耳酮類,16,苯基在C3位; 如此處無雙鍵 為二氫異黃酮,大豆素,四、異黃酮、二氫異黃酮類,3,17,二氫異黃酮類魚藤酮類,魚鱗酮 農業(yè)殺蟲劑,18,五、雙黃酮類,通過58 位聚合,銀杏素,8,5

5、,19,六、花色素類,O原子以 鹽 形式存在,飛燕草素,C4位無羰基,20,七、黃烷醇類,中間的環(huán)無 羰基、雙鍵 稱黃烷,黃烷-3-醇 示兒茶素,3,21,八、雙苯吡酮,無6C-3C-6C 骨架,22,八、雙苯吡酮示例,C6H11O5,異芒果素,23,九、橙酮類,特點中間 為五元環(huán),黃波斯菊素,24,組成黃酮苷的糖類,1、單糖： D-葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖、 L-鼠李糖、L-阿拉伯糖、 D-葡萄糖醛酸等 2、雙糖和三糖： 蕓香糖、龍膽二糖、龍膽三糖、 槐三糖等,25,糖的連接位置,1、黃酮類單糖鏈苷常連接在 C3、C7、C3、C4位 2、雙糖鏈苷類常連接在 3，7位、3，4或7，4位,2

6、6,A.雙子葉植物 B.菌類植物 C.裸子植物 D.單子葉植物,練習黃酮類化合物主要分布在：,27,練習該化合物屬何類黃酮?,A.黃酮 B.異黃酮 C.查耳酮,28,練習屬哪一類化合物?,A.二氫黃酮醇 B.二氫異黃酮 C.黃烷醇,29,練習屬哪一類化合物?,A.黃酮 B.異黃酮 C.查耳酮,30,練習哪一類化合物？,A.黃酮 B.異黃酮 C.查耳酮,31,三、黃酮類化合物的生物活性,1. 對心血管系統(tǒng)的作用 Vp樣作用：蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高血壓及動脈硬化的輔助治療劑。 擴冠作用：蘆丁、槲皮素、葛根素、人工合成的立可定。 降血脂及膽固醇：木樨草素

7、,32,2. 抗肝臟毒作用 從水飛薊種子中得到的水飛薊素等黃酮類化合物具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種中毒性肝損傷。 （+）-兒茶素(Catergen)也具有抗肝臟毒作用，可治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝損傷。,33,3. 抗炎 蘆丁及其衍生物羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具抗炎作用。 4. 抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黃芩苷、黃芩素等抗菌 槲皮素、桑色素、山柰素等抗病毒。,34,5. 雌性激素樣作用 大豆素(daidzein)染料木素等異黃酮具有雌性激素樣作用，可能是因為它們與己烯雌酚結構類似。,35,6.瀉下作用 如中藥營實中的營實苷A有致瀉作用 7. 解痙作

8、用 異甘草素、大豆素等解除平滑肌痙攣； 大豆苷、葛根黃素等葛根黃酮類可緩解高血壓患者的頭痛等癥狀； 杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山柰酚、芫花素、羥基芫花素等還具有止咳祛痰的作用。,36,8. 清除人體自由基作用 黃酮類化合物多具有酚羥基，易氧化成醌類而提供氫離子，故有顯著的抗氧特點。 另外還有降血脂、血糖，抗動脈粥樣硬化及抗癌、抗突變等作用。,37,第二節(jié)黃酮類化合物的理化性質,一、性狀 結晶：多數為結晶體，少數苷為無定形粉末 旋光性：苷元C2，3位無雙鍵者具旋光性，苷因糖的引入都有旋光性，多為左旋 顏色：與分子中是否存在交叉共軛體系及助色團（-OH、-OCH3）的類型、數目、和位置有關，其中C

9、7，4位影響最大,二氫黃酮、異黃酮 因無完整共軛體 系，呈微黃色,花色素的顏色與PH 有關：PH8.5藍色,38,電子重排形成交叉共軛體系,+,7位、4位引入 助色團，促使電 子移位，色增深,4,7,39,-O,+,C4有含氧基團 可中和正電荷 使體系穩(wěn)定,-,顏色與結構的關系,4,OH,-O,+,-,7,HO,7位有助色 團有利于 分子重排,40,二、溶解性,1、苷元：難溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚 2、苷類：易溶于水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯中，難溶于乙醚、苯、氯仿 3、平面型分子水溶性小，非平面型分子水溶性大 4、花色素以離子形式存在，水溶性大 5、有酚羥基者，可溶于堿性溶液，加

10、酸后又沉淀析出。,41,平面型分子,黃酮醇的結構展示,42,黃酮醇的結構展示示三維立體結構,43,二氫黃酮醇結構展示,非平面分子,44,二氫黃酮醇結構展示示三維立體結構,45,異黃酮結構展示,非平面型分子,46,異黃酮結構展示示三維立體結構,47,異黃酮結構展示示三維立體結構,48,（一）酸性 黃酮母核含酚-OH，與苯環(huán)形成P共軛后，H易解離，具有酸性（二）堿性黃酮-吡喃酮環(huán)上的O原子帶弱堿性，可與強酸生成 鹽,三、酸堿性,49,分子結構與酸性的關系,羰基的吸電 子共軛效應 使對位酚羥基 易解離酸性強,50,O,H,-,分子結構與酸性的關系,7位-OH 電子云中 和正電荷 H易解離,7,51,

11、分子結構與酸性的關系,-O,-,+,4位-OH 電子云中 和正電荷 H易解離,52,分子結構與酸性的關系,O,5位羥基與4位羰基 形成氫鍵,酸性最弱,H,H,53,分子結構與酸性的關系,O,鄰位酚羥基易形成 分子內氫鍵,酸性減弱,H,H,H O,54,酸性小結,酸性強弱順序 7，4 二-OH 7-OH或4 -OH 一般酚-OH 5-OH 3OH 7，4二-OH-溶于NaHCO3 7-OH或4-OH-溶于Na2CO3 一般酚-OH-溶于NaOH,55,（二）黃酮的堿性,56,四、熒光,結構中有C3-OH：熒光顯著呈亮黃綠色；C3-OH被甲基化或成苷，熒光暗淡，常呈棕色 查耳酮和橙酮：深黃色或亮黃

12、色熒光 異黃酮：多顯紫色 花色苷：顯棕或黑色 二氫黃酮（醇）、黃烷醇類：無熒光,57,練習比較黃酮的脂溶性,AB,A,B,AB,58,練習比較黃酮脂溶性,AB,A,B,0-D葡萄糖,AB,59,練習比較黃酮的水溶性,A,B,AB,AB,60,練習比較黃酮的酸性,A,B,AB,AB,61,練習比較黃酮的酸性,A,B,AB,AB,62,練習比較黃酮的酸性,AB,A,B,AB,63,五、顯色反應,（一）酚羥基反應：三氯化鐵 （二）還原反應：鹽酸-鎂粉、四氫硼鈉 （三）金屬鹽類試劑的絡合反應：三氯化鋁、鋯-枸櫞酸、醋酸鎂、醋酸鉛 （四）其它顏色反應：硼酸顯色反應、堿性試劑反應,黃酮（醇）、 二氫黃酮（

13、醇）,二氫黃酮（醇）,C3或C5羥基黃酮 或鄰二酚羥基黃酮,64,1.鹽酸-鎂粉反應,槲皮素 黃色,陽碳離子（紅色）,花色苷元,65,2.四氫硼鈉反應,此 鍵 斷 開,NaBH4,X -,H+,-H2O,顯紅-紫色,二氫黃酮,66,（三）金屬鹽類試劑的絡合反應,1、三氯化鋁反應：C3 、 C5-OH顯鮮黃色 2、鋯-枸櫞酸反應：C3 -OH仍鮮黃色， C5-OH鮮黃色褪去 3、醋酸鎂反應：二氫黃酮天藍色熒光， 其它黃酮顯黃、橙、褐色熒光 4、鉛鹽反應：黃、紅色沉淀 5、氯化鍶反應：綠色棕黑色沉淀,67,鋯-枸櫞酸反應,C3或C5羥基黃酮,ZrOCl2 枸櫞酸,（鋯絡合物鮮黃色）,H2O,Cl,

14、C5羥基絡合不穩(wěn) 定，鮮黃色褪去,68,三氯化鋁反應,ALCl3,（鋁絡合物鮮黃色熒光）,Al,3或5位羥基黃酮,69,氯化鍶反應 在氨性甲醇液中反應,SrCl2鄰二酚OH黃酮 綠色棕色乃至黑色,70,（四）其它顏色反應,1、硼酸顯色反應：C5 -OH黃酮、 C2 -OH查耳酮顯亮黃色 2、堿性試劑反應：黃酮色增深、 二氫黃酮顯橙色或黃色 3、二氫黃酮遇堿液開環(huán)變?yōu)橄鄳牟槎@橙或黃色,= CCC,OH,O,5,4,71,練習檢識下列化合物,A,B,三 氯化鋁,鋯-枸櫞酸,鹽酸-鎂粉,72,練習檢識下列黃化合物,A,B,四氫硼鈉,鹽酸-鎂粉,醋 酸 鉛,73,練習檢識下列化合物,A,B,四氫

15、硼鈉,鹽酸-鎂粉,醋 酸 鉛,74,第三節(jié)黃酮類化合物的提取分離,一、提取方法 （一）溶劑提取法 中藥粗粉 甲醇、乙醇提取 提取液 濃縮 沸水提取：（黃酮苷水溶性大可溶于沸水） 放冷后可析出黃酮苷,75,（二）堿溶酸沉法,黃酮類化合物有酚羥基易溶于堿液 注意：堿的濃度不宜過高-破壞母核 酸化時，酸度不宜過強-生成烊鹽 用石灰乳或石灰水代替其它堿性水溶液，使果膠、粘液質等雜質生成鈣鹽沉淀，利于黃酮的純化。,石灰水提取 H+原料 堿水液 總黃酮 (稀堿) (苷元及苷),76,提取舉例,槐花米中蕓香苷的提取,蕓香苷的結構,77,1.槐花米中蕓香苷的提取,槐花米粗粉,沸硼砂水煮提2次，加石灰乳調pH8

16、， 每次20，趁熱過濾,濾液,HCl調pH56靜置，抽濾,沉淀,濾液,蕓香苷純品,乙醇重結晶,粗蕓香苷,水洗，干燥,藥渣,乙醇,78,（三）炭粉吸附法,主要適于苷類的精制工作。通常，在植物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭，攪拌，靜置，直至定性檢查上清液無黃酮反應時為止。過濾，收集吸苷炭末，依次用沸甲醇、沸水、7% 酚/水、15% 酚/醇溶液進行洗脫，各部分洗脫液進行定性檢查（或用PPC鑒定）。,79,二、黃酮類化合物的分離,（一）柱色譜法 1、硅膠色譜法 2、聚酰胺色譜法 3、葡聚糖凝膠色譜法 （二）pH梯度萃取法,80,1、硅膠色譜法,吸附層析: 分離苷元 洗脫劑： CHCl3 / MeOH

17、； EtOAc/少量MeOH分配層析：分離苷 洗脫劑: CHCl3 / MeOH/ H2O；EtOAc /Me2O/ H2O,81,2、聚酰胺色譜法 原理：氫鍵吸附理論,82,1.聚酰胺分離原理,吸附力的大小由酚羥基的數目和位置來決定: 酚羥基數目，吸附，Rf值 ；反之, 亦然； 酚羥基的酸性，吸附，Rf值 。 2.洗脫溶劑和方法 洗脫劑：水甲醇丙酮NaOH液甲酰胺脲素水溶液 洗脫能力最弱 洗脫能力最強,83,聚酰胺層析洗脫規(guī)律,1、苷元相同：三糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷元 2、母核上酚羥基增多洗脫減慢 3、鄰位酚羥 基間位、對位酚羥基 (分子內氫鍵） 4、分子中芳核、共軛雙鍵多難洗脫 5、不同

18、母核：異黃酮 二氫黃酮 黃酮 黃酮醇 6、分子中芳核、共軛雙鍵多難洗脫。,84,B,D,洗脫順序： B A C D,分析下列化合物在聚酰胺色譜中洗脫順序,85,3、葡聚糖凝膠色譜法,分離黃酮主要用 Sephadex LH-20型。 原理：分離黃酮苷元：利用其吸附作用，凝膠對黃酮類化合物的吸附程度取決于游離酚OH的數目。 分離黃酮苷：分子篩作用為主,86,黃酮類化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo, 黃酮類化合物 取 代 情 況 Ve/Vo 芹菜素 5,7,4 OH 5.3 木犀草素 5,7,3 ,4 四OH 6.3 槲皮素 3, 5,7,3 ,4 五OH 8.3 楊梅素 3

19、, 5,7,3 ,4 ,5 六OH 9.2 山奈酚-3-半乳糖鼠 三糖苷 3.3 李糖-7-鼠李糖苷 槲皮素-3-蕓香糖苷 雙糖苷 4.0 槲皮素-3-鼠李糖苷 單糖苷 4.9 Ve：洗脫體積；Vo：柱子室體積,87,規(guī)律： ,1) 苷元的羥基數越多，Ve/Vo，越難以洗脫。 2) 苷的分子量越大, 其上聯(lián)結糖的數目越多, 則Ve/Vo , 容易洗脫。 3) 苷比苷元先洗脫。 常用的洗脫劑： 堿性水溶液，含鹽水溶液 醇、含水醇 含水Me2CO, MeOH/CHCl3,88,（二）pH梯度萃取法,原理：利用黃酮苷元中酚OH數目及位置不同, 其酸性強弱不同的性質來分離。 酸性：7, 4-OH 7-

20、或4-OH 一般酚OH 3-OH, 5-OH 溶于5%NaHCO3 5%Na2CO3 不同濃度的NaOH 方法：總黃酮溶于Et2O，再用5%NaHCO3, 5%Na2CO3, 0.2%NaOH, 4%NaOH依次萃取，酸化后析出黃酮，達到分離目的。,89,黃酮混合物Et2O溶液,Et2O液,5%NaHCO3萃取,堿液,5%Na2CO3萃取,2%NaOH萃取,堿液,Et2O液,Et2O液,堿液,酸化析晶,酸化析晶,酸化析晶,7, 4二-OH黃酮,7或4-OH黃酮,一般酚-OH黃酮,pH梯度萃取 工藝流程,90,練習分離下列黃酮類化合物,pH梯度萃取,91,練習Sephadex LH-20型分離下

21、列黃酮類化合物時，洗脫順序如何？,A,B,C,洗脫順序ABC,92,思考題設計分離下列黃酮類 化合物工藝,A,B,C,93,第四節(jié)黃酮類化合物的檢識與結構鑒定,一、色譜鑒定 二、結構測定,94,一、色譜鑒定,（一）紙色譜檢識法 常用的展開劑： 正丁醇：醋酸：水（4：1：5上層，BAW） 叔丁醇：醋酸：水（3：1：1，TBA） 醋酸：水（15：85） 氯仿：醋酸：水（13：6：1） 苯酚：水（4：1）,95,層析行為: Rf值: 甙元單糖甙雙糖甙 一般: 甙元在0.70以上,而甙則小于0.7。,BAW n-BuOH: HOAc:H2O=4:1:5 上層 TBA t-BuOH: HOAc:H2O

22、=3:1:1 主要根據分配作用進行分離,紙色譜 展開方式,雙向層析（示圖） 對于苷類: 第一相展開采用醇性展開劑，如:,第二相展開采用水性展開劑如： 26% HOAc水溶液，3% NaCl 水溶液 主要根據吸附作用進行分離 層析行為: 連接糖鏈越長, Rf 越大(0.5); 苷元Rf 較小，有的留在原點。,96,紙層析檢查方法：,觀察熒光,用紫外光燈照射看 到有色斑點，NH3 處理產生明顯的色變。 用2% AlCl3甲醇液噴霧,UV燈下 呈亮黃色熒光斑點。,97,黃酮化合物結構與Rf 值關系,1、在TBA系統(tǒng)中 Rf值：黃酮苷元苷 2、在醋酸：水系統(tǒng)中 Rf值：黃酮苷元平面型分子 分子中羥基數

23、目多Rf值大,98,（二）硅膠薄層色譜,1、硅膠層析 展開劑：甲苯：甲酸甲酯：甲酸 （5：4：1）；苯：甲醇（95：5） 2、聚酰胺層析 展開劑：甲醇：醋酸：水（90：5：5） 乙醇：水（3：2）,99,二、紫外光譜和可見光譜在黃酮類化合物結構測定中的應用,1、先測定樣品在甲醇中的紫外光譜 2、再測定樣品在加入各種診斷試劑后得到的紫外及可見光譜 3、將上述各種光譜進行比較分析，得到化合物結構的重要信息,100,（一）黃酮類化合物在甲醇中的紫外 黃酮類存在以下的交叉共軛體系：,101,幾種不同類型黃酮的UV基本特征,102,UV光譜判斷黃酮類化合物類型,1 .黃酮、黃酮醇類 峰帶I和II強度相似

24、帶I位置不同,nm,I,II,帶I ：黃酮類 304350nm 黃酮醇 （3-OH被取代）328357nm 黃酮醇 （3-OH游離） 352385nm 帶II ： 240285nm,103,2.查耳酮、橙酮類 帶I 強，帶II 次強峰,帶I 帶II 查耳酮 340390nm (有裂分) 220270nm 橙酮 370430nm (34個峰),104,3.異黃酮、二氫黃酮(醇)類 帶I 弱，帶II 強峰,只有A-環(huán)苯甲酰系統(tǒng)，帶II 為主峰 帶II 異黃酮 245270nm 二氫黃酮（醇） 270295nm 帶I 肩峰,II,I,nm,105,黃酮紫外,化合物 羥基位置 帶I A或C環(huán) B環(huán) （

25、nm） 3,5,7-三羥基黃酮 3,5,7 359 3,5,7,4 -四羥基 3,5,7 4 367 3,5,7,3,4-五羥基 3,5,7 3,4 370 3,5,7,3,4,5-六羥基 3,5,7 3,4,5 374,B環(huán)引入羥基對黃酮類化合物紫外光譜的影響,B環(huán)氧取代程度越高帶I越向長波方向移動,106,A環(huán)引入羥基對黃酮類化合物紫外光譜的影響,黃酮紫外,A環(huán)氧取代程度越高帶II越向長波方向移動,化合 物 A環(huán)羥基位置 帶II （nm） 黃酮 - 250 7-羥基黃酮 7 252 5-羥基 5 262 5,7-二羥基 5,7 268 5,6,7-三羥基 5,6,7 274 5,7,8-三

26、羥基 5,7,8 281,107,（二）加入診斷試劑后紫外吸收峰的位移與結構測定,甲醇鈉引起的位移 醋酸鈉引起的位移 醋酸鈉/硼酸引起的位移 三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸引起的位移,108,（1）加甲醇鈉引起的位移,帶I紅移5060nm，強度降低有3-OH無4-OH 帶I紅移4060nm，強度不降有4-OH 無3-OH 320330nm有吸收，有游離的7-OH 3， 4及3， 3， 4-OH 易分解，吸收峰隨時間延長而衰退,NaOMe：堿性強，酚OH易形成鈉鹽。從而增加電子云密度和流動性，使電子躍遷E紅移。,109,蕓香苷的紫外,帶I紅移50nm， 強度不降有4-OH,327nm有吸收， 有游離的

27、7-OH,110,（2）加醋酸鈉引起的位移,帶II 帶I 歸屬 未熔融 紅移520nm 長波一側有 7-OH 明顯肩峰 熔融 紅移4065nm 4-OH 強度下降 吸收圖譜隨時間延長而衰退,NaOAc堿性較弱，只能使黃酮母核上酸性 較強的酚OH解離而使UV譜紅移。,111,（3）加醋酸鈉/硼酸引起的位移,黃酮的鄰二酚羥基在醋酸鈉的堿性下可與硼酸絡合引起相應吸收帶的紅移 帶II紅移510nm 示A環(huán)有鄰二-OH 不包括5，6位 帶I紅移1230nm 示B環(huán)有鄰二-OH,112,（4）加三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸引起的位移,三氯化鋁可與具有3-羥基、4-羰基或5-羥基、4-羰基及鄰二酚羥基結構的化合

28、物螯合，并引起相應的吸收帶紅移,但生成的鋁絡合物相對穩(wěn)定性不同： 3-OH(黃酮醇) 5-OH(黃酮) 5-OH(二氫黃酮) 鄰二酚OH 3-OH(二氫黃酮) 對HCl穩(wěn)定 HCl不穩(wěn)定,可分解 在NaOAc中 不穩(wěn)定,113,AlCl3及AlCl3/HCl圖譜,114,例：根據UV推斷黃酮OH取代位置：某中藥提取一黃酮成分紫外數據如下，推測結構,帶II 帶I MeOH： 253 267 349 +CH3ONa 329sh 401 +NaOAc：未熔融 269 384 +NaOAc/H3BO3： 257 370 +AlCl3： 274 426 +AlCl3/HCl： 275 355 385,1

29、15,示有7-OH,例：根據UV推斷OH取代位置：,帶II 帶I MeOH： 253 267 349 +CH3ONa 329sh 401 +NaOAc：未熔融 269 384 +NaOAc/H3BO3： 257 370 +AlCl3： 274 426 +AlCl3/HCl： 275 355 385,-349=52示4-OH,-253=16示有7-OH,-349=21 示B環(huán)有 -385=41 鄰二-OH,-349=36示有5-OH,C3無-OH,116,三、核磁共振氫譜在黃酮類結構分析中的應用,常用溶劑: CDCl3、DMSO-d6、C5D5N; 當用DMSO-d6 時:5-OH: 12.40

30、; 7-OH: 10.93; 3-OH: 9.70ppm。加入D2O交換后，OH信號消失。 也可將黃酮類化合物作成三甲基硅醚衍生物，溶于CCl4中測定。信號一般發(fā)生 在09 ppm 之間。,117,（一） A環(huán)質子(1) 5, 7-二OH黃酮類化合物：,1)H-6, H-8的出現在5.76.9ppm, d, J=2.5Hz。2)6位H較8位H質子位于較高的磁場。3)當7-OH成苷時，H-6及H-8均向低磁場方向位移0.2ppm。,6.27,6.55ppm,118,H-6 H-8 黃酮(醇)，異黃酮 6.06.2d 6.36.5d同上化合物-7-O-糖苷 6.26.4d 6.56.9d二氫黃酮，

31、二氫黃酮醇 5.755.95d 5.96.1d同上化合物-7-O-糖苷 5.96.1d 6.16.4d,d=doublet 雙峰,5, 7-二OH黃酮類化合物H的 ,119,（2） 7-OH黃酮,1)H-5的位于8.0ppm左右, d, J=9.0Hz; 與H-8偶合較小。 2)H-6處于略低場(6.47.1, dd)， J=9.0Hz, J=2.5Hz。3)H-8處于H-6的略高場(6.37.0, d)， J=2.5Hz。,dd=雙二重峰,受4位羰基的負屏蔽影響,120,7-OH黃酮類化合物中H-5, H-6及H-8的化學位移:化 合 物 H-5 H-6 H-8 黃酮(醇)、異黃酮 7.98

32、.2d 6.77.1dd 6.77.0d 二氫黃酮(醇) 7.77.9d 6.46.5dd 6.36.4d ,121,122,（二） B環(huán)質子: B環(huán)質子的位于6.57.9ppm（1）4 -氧取代黃酮類化合物:,1) 峰形，B環(huán)質子分為H-2,6與H-3,5兩組H，屬于AA BB類型，相互偶合成二重峰。2) H-2,6 7.18.1 d J = 8.5Hz; H-3,5 6.57.1 d J = 8.5Hz。 由于4-O取代的屏蔽效應, H-3,5 較小,123,124,（2） 3,4 -二氧取代黃酮類化合物: 1) H-5 6.77.1 (d, J=8.5Hz); H-2 7.2ppm (d

33、, J=2.5Hz); H-6 7.9ppm (dd, J=2.5及8.5Hz)。 2) H-2 H-6 黃酮醇3 -OCH3, 4 -OH 7.67.8d 7.47.6dd 黃酮3-O苷, 3, 4 -OH 7.27.5d 7.37.7dd 黃酮(3,4-OH及3-OH,4-OCH3) 7.27.3d 7.37.5dd 黃酮醇(3,4-OH及3-OH,4-OMe) 7.57.7d 7.67.9dd,6H 2-H 5-H,125,（3） 3,4,5 -三氧取代黃酮類化合物:當R1=R2=R3=H時，H-2=H-6=6.57.5ppm, s；若不相等，則H-2,H-6將分別作為一個二重峰，J=2

34、.5Hz出現。,s=singlet單峰,126,（三） C環(huán)質子：（1）黃酮類：C3-H 6.3ppm, 尖銳的單峰;,區(qū)別H-3與H-6：1）H-6 與C8 Me遠程偶合信號變寬 2）對5-OH進行選擇性氘代甲基硅烷化。,127,（四） 芳甲基質子： 2.12.5 ppm ( s, 或寬單峰) 5. OCH3質子: 3.54.1ppm, s6. OH質子：7-OH 11ppm(一般為10.9)4-OH 11ppm(一般為10.7)3-OH 10.4(黃酮醇類)5-OH 12.5,128,7. 乙酰氧基上的質子：,根據脂肪族乙酰氧基上的質子數目可以判斷黃酮苷中結合的糖數。根據芳香族乙酰氧基上的

35、質子數目可以判斷黃酮苷元上酚OH的數目，有的還可以判斷酚OH的位置：,129,乙?；恢?,130,例1：從遼西蜂膠中分離到一個黃酮類化合物, 分子式：C17H14O7, 黃色粉末, mp. 210212。 UV(MeOH)nm: 256, 363。1H-NMR: (300MHz, DMSO-d6) ppm：,131,3.84(3H, s) 3.88(3H, s) 6.30(1H, d, J=3.0Hz) 6.46(1H, d, J=3.0Hz) 6.96(1H, d, J=8.5Hz) 7.53(1H, dd, J=2.2Hz, 8.5Hz) 7.68(1H, d, J=2.2Hz) 8.7

36、5(1H, s, D2O交換消失) 9.14(1H, s, D2O交換消失) 12.69(1H, s, D2O交換消失) NOEDS：當照射 3.84信號時，只有 7.68信號增加;當照射 3.88信號時， 6.30, 6.46信號均。,132,133,苷元用EI-MS可得到分子離子峰(強, 往往為基峰)；苷用FD-MS、FAB-MS或將苷作成甲基化或三甲基硅醚化衍生物，再測EI-MS。,四、質譜在黃酮類結構測定中的應用,134,(一)苷元的EI-MS: 兩條基本裂解途徑途徑I：RDA裂解(Retro-Diels-Alders開裂),O,+,135,途徑II：,136,特點： 碎片離子A1+.

37、B1+.B2+. 保留著A、B環(huán)的基本骨架,且A1+.碎片與相應的B1+. 碎片的質荷比之和等于分子離子M+.的質荷比。 兩種裂解途徑相互競爭，相互制約。 還有 M-1+ 及M-28+ 以及由碎片離子A1+生成A1-28+及B2+ 生成B2-28+ 等次要過程。,137,1.黃酮類：裂解特點：多數分子離子峰強，為基峰;M-28+及由途徑-I得到的A1.及B1.峰突出。6,8-位有OCH3時,裂解過程中尚可失去CH3，得到M-15強峰(為基峰)，隨后再失去CO，生成M-43+。,138,139,2、黃酮醇類：特點：多數分子離子峰為基峰；裂解主要按途徑-II進行。得到的B2及 B2-CO+有重要意

38、義；當氧取代超過四個以上時，只能產生微 弱的A1.及B1.;裂解圖式：,140,B環(huán)無取代時：B2離子應當出現在m/z 105； B環(huán)有一個OH取代時:B2離子應當出現在m/z 121; B環(huán)有一個OCH3取代時:B2離子應當出現在m/z 135；,141,3、異黃酮類： 無脫-CO的峰，即無M-28峰。,142,黃酮類化合物的質譜數據（m/z）,黃酮質譜,化合 物 A1+ B1+ 黃酮 120 102 5,7-二羥基 152 102 5,7,4-三羥基 152 118 5,6,7-三羥基 168 102 5,7-二羥基4-甲氧基黃酮 152 132,.,143,1、有一黃色結晶()，鹽酸鎂粉

39、反應顯紅色，Molish反應(+), ZrOCl2反應呈黃色，但加枸櫞酸后黃色褪去。IR vmax（KBr）cm-1：3520，3470，1600，1600，1510，1270，11001000，840 （I）的UV nm如下： MeOH 252 267（sh）346 NaOMe 261 399 AlCl3 272 426 AlCl3/HCl 260 274357385 NaOAc 254 400 NaOAc/H3BO3256378 （I）的1H-NMR（DMSO-d6,TMS） ：7.20（1H，d，J=3Hz）；6.92（1H，dd，J=8Hz,3Hz）；6.70（1H，d，J=8Hz）；6.62（1H，d，J=2Hz）；6.43（1H，d，