1、,實驗過程中應注意的問題,1,試劑保存及使用前準備,試劑盒保存于2-8 使用前應先將檢測試劑盒放置室溫平衡15-30分鐘，保證酶等液體的初始反應溫度及活性劑的溶解。 真空包裝袋漏氣一般不影響試劑盒質(zhì)量，如須拼組板條于板架上，必須保證板條放平，以免影響洗板機的操作。,2,不加抗凝劑的標本處理,標本采集后，應先將標本度放置分鐘 標本應進行離心：采用轉(zhuǎn)速離心1520分鐘 3.取上清液加樣.,3,加抗凝劑的標本處理,標本采集后，應先將標本度或者室溫放置一定時間 標本應進行離心：采用轉(zhuǎn)速離心1015分鐘 3.取上清液加樣.,4,標本處理的意義,標本處理過程嚴謹，可最大限度避免由 于標本因素造成的非特異反

2、應對實驗的 影響，最大限度避免重復實驗,增加不 必要的工作量.,5,試劑,1.觀察外包裝，內(nèi)組份有無漏液。 2.仔細閱讀說明書，嚴格按照試劑說明書進行操作。,6,加 樣,.仔細注意加樣全部過程. 2.加樣后及時放入孵育箱，避免包被板在室溫放置時間過長。 3.標本較多時，請分批操作。,7,溫 育,1.按規(guī)定加蓋封板膜。 2.按說明步驟嚴格控制孵育時間。 3. 嚴格控制溫育儀器（水箱、溫箱、全自動酶免）的溫度，建議在儀器內(nèi)放置測量工具（全自動酶免除外）。,8,洗 板 1,1.要有適當?shù)慕輹r間（3060秒）。 2.洗板機吸液要徹底,殘余量低于5ul。 3.洗板次數(shù)應與說明書要求一致，盡量不要私自

3、增加或減少洗板次數(shù)。,9,洗 板 2,4.洗板后，拍干包被板，應垂直扣在備好的 干凈吸水紙或毛巾上，且每次拍板應換掉 前次拍過的毛巾或吸水紙,避免交叉污染. 5.洗液應調(diào)至適當?shù)淖⒊隽?，每孔應?350ul-450ul之間，但不要溢出孔外。,10,洗 板 3,6.稀釋洗液應用蒸餾水或去離子水，pH 值不宜過酸或過堿，保證配出的洗液 pH值7.40.2，水質(zhì)宜新鮮，長菌或 有沉淀不宜使用，水保存應用非金屬 容器。 7.稀釋好的洗液4度情況下可保存3-5天. 8.由于洗滌液系高濃度磷酸鹽，可能會形成 結(jié)晶，配制洗液時應完全溶解.,11,顯 色 1,1.試劑顯色時先加A液，后加B液，二者不要顛倒.

4、2.前后加入的間隔時間不要超過10分鐘. 3.若把A液和B液先混和，再加樣顯色，需要求二 者等體積混合。 4.底物溶液B應是澄清透亮，如倒出發(fā)現(xiàn)溶液已呈 微蘭色，表明液體已受污染，應廢棄不用。,12,顯 色 2,5. 將加樣槽清洗干凈。 6.A、B液應避免接觸污物 。 7.不同廠家顯色液不得混用。,13,終止和讀數(shù),1加完終止后30分鐘內(nèi)讀取數(shù)據(jù)。 2讀板時板底如果不清潔，就會導致所讀的 數(shù)據(jù)不準確，所以在讀數(shù)前盡量保證酶標 板的底部是清潔的。,14,灰區(qū)的定義 灰區(qū)又稱灰色帶反應。就是把 OD值在Cut off 值正負10%這個范圍內(nèi)的標本稱為灰區(qū)標本。 這個范圍稱為灰區(qū)。,15,灰區(qū)的處理

5、,1.灰區(qū)是客觀存在的，沒有不存在灰區(qū)的試劑。我們只是盡量減少灰區(qū)的出現(xiàn)比例。 2.減少灰區(qū)最有效的方法就是盡量將板洗滌干凈。 3.嚴格控制溫浴時間。,16,問題1：只有單次實驗出現(xiàn)靈敏度偏低或 者偏高。,處理意見：重新實驗，并在實驗中注意試 劑盒的溫度平衡、溫育的時間、 顯色的時間等影響因素的控制 。,17,問題2：質(zhì)控品漏檢,處理意見：檢查質(zhì)控品是否有反復凍融 的情況、質(zhì)控品是否有批內(nèi) 差異、質(zhì)控品是否為4攝氏度 久置。,18,問題：日常使用中出現(xiàn)弱陽性標本漏檢。,處理意見：A標本本身由于各種因素影響而表現(xiàn) 為弱陽性，實際上為陰性標本。 B由于標本自身含量較低，易隨實 驗水平位試劑盒調(diào)整等

6、因素波動， 對這部份標本的處理應格外慎重， 有條件的地區(qū)應進行確證實驗。,19,處理意見：C注意檢查實驗中所用的儀器設(shè)備 是否定期校準。 D注意檢查實驗中所用的板、酶標 試劑的批號是否在有效期之內(nèi).,20,問題：質(zhì)控品靈敏度偏高 。,處理意見：衛(wèi)生部臨檢中心的質(zhì)控品存在 批間批內(nèi)差異。 實驗室相關(guān)條件改變導致質(zhì)控變化。,21,問題：多次實驗靈敏度一直偏低。,處理意見：A保存環(huán)境不規(guī)范。 B孵箱溫度不足。 C溫育時間不足。,22,問題：單次實驗中出現(xiàn)假陽性,處理意見：注意實驗過程中的影響因素，特 別是實驗中的洗板應設(shè)置浸泡 30-60秒時間。,23,問題：臨床實驗中出現(xiàn)假陽性偏高。,處理意見：A注意檢查洗滌液中結(jié)晶部份是否 完全溶解。 B注意檢查實驗中所使用的儀器設(shè) 備是否定期校準 。 C注意檢查實驗中所用的板、酶標 試劑的批號是否相同，不同批號 試劑不得混用。,24,處理意見：D假陽性標本表現(xiàn)在臨界值附近較 多，通常與當時實驗的水平有關(guān)， 注意檢查實驗條件的波動 。 E避免加樣時間過長 。 F由于試