1、藥劑制劑處方的體內(nèi)評(píng)價(jià)研究,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 藥物代謝與藥代動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,2011. 04. 15 上海,一. 制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展 二. 藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià) 三. 先進(jìn)、配套、規(guī)范的體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù)是制劑 處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段 四. 藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問題 五. 研究室基本情況介紹,一 制劑評(píng)價(jià)應(yīng)適應(yīng)新釋藥系統(tǒng)的發(fā)展,1. 新制劑和創(chuàng)新藥物研究同等重要,新化學(xué)實(shí)體藥物（NCE） 成本高 周期長(zhǎng) 難度大,新釋藥系統(tǒng)（DDS） 投入少 見效快 投入產(chǎn)出比高,切合發(fā)展中國(guó)家國(guó)情，尤其適合我國(guó)國(guó)情； 國(guó)外（著名制藥企業(yè)）愈加重視DDS研發(fā)； 技術(shù)含量高的藥物制劑產(chǎn)品也可

2、以象創(chuàng)新化合物一樣，成為 “重磅炸彈”； 有的藥物多年后新型制劑的“二次”開發(fā)上市，所產(chǎn)生的社會(huì)和 經(jīng)濟(jì)效益不亞于首次普通制劑。,藥物：化學(xué)合成藥品、生物技術(shù)藥品、中藥和天然產(chǎn)物 用藥：口服（po）、靜注（iv）、 藥劑：只有通過藥物制劑處方的設(shè)計(jì)評(píng)篩和制備， 才能成為直接用于人體的藥品； 才能成為直接投放市場(chǎng)的商品。,2. 藥劑研究的使命、責(zé)任，主要?jiǎng)恿徒?jīng)濟(jì)源泉,藥物制劑可改善藥物的理化性質(zhì)，提高穩(wěn)定性，改善藥 物溶解度； 改善藥物的體內(nèi)行為，增加藥物吸收，優(yōu)化藥物 的體內(nèi) 分布特征，延長(zhǎng)體內(nèi)作用時(shí)間； 提高藥物治療效果，降低藥物毒副作用； 改善人體用藥的順應(yīng)性。,3. 達(dá)到實(shí)現(xiàn)安全、有效

3、、穩(wěn)定、可控和用藥方便,“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)“十一五”計(jì)劃課題申報(bào)指南 依據(jù)國(guó)家中長(zhǎng)期科學(xué)和技術(shù)發(fā)展規(guī)劃綱要（20062020年）的部 署，國(guó)務(wù)院決定組織實(shí)施“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)（以下簡(jiǎn)稱專 項(xiàng)）。,4. 臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)技術(shù)平臺(tái) 建設(shè)目標(biāo)（略） 建設(shè)內(nèi)容： 天然產(chǎn)物活性成分及中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究； 天然藥物多成分藥代動(dòng)力學(xué)行為與血清藥理學(xué)、血清化學(xué)及多成分相 互作用的整合評(píng)價(jià)研究； 藥物代謝動(dòng)力學(xué)與代謝組學(xué)整合研究； 細(xì)胞分子水平的體外藥代動(dòng)力學(xué)高通量篩選與評(píng)價(jià)技術(shù)研究； 代謝產(chǎn)物的快速鑒定、活性預(yù)測(cè)及活性代謝物的藥代動(dòng)力學(xué)研究； 藥物代謝相互作用的整體和離體研究，臨床

4、藥物相互作用預(yù)測(cè)； 生物技術(shù)藥物及基因治療藥物的藥代動(dòng)力學(xué)研究； 難溶（不溶）藥物和新型藥物釋放系統(tǒng)的體內(nèi)外代謝動(dòng)力學(xué)研究； 藥代動(dòng)力學(xué)理論模型等方面的研究。,4. 藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià),5. 新型給藥系統(tǒng)（Drug Delivery System, DDS）：,靶向給藥 透皮給藥 粘膜給藥 口服緩控釋 速釋給藥 載體給藥 生物技術(shù)給藥,二 藥物制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià),1. 藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)與制劑體內(nèi)評(píng)價(jià),化學(xué)藥物制劑研究基本技術(shù)指導(dǎo)原則中： 原料藥與制劑； 藥代動(dòng)力學(xué)與制劑,原料藥生物學(xué)性質(zhì)對(duì)制劑研究有重要指導(dǎo)作用： 原料藥生物學(xué)性質(zhì)包括對(duì)生物膜的通透性，在生理環(huán)境下的穩(wěn)定性，原料藥的吸收、分布、代

5、謝、消除等藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，藥物的毒副作用及治療窗等。 對(duì)于口服吸收較差的藥物，通過選擇適當(dāng)?shù)闹苿┘夹g(shù)和處方，可能改善藥物的吸收。 如藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果提示藥物口服吸收極差，可考慮選擇注射劑等劑型。 緩釋、控釋制劑對(duì)藥物的半衰期、治療指數(shù)、吸收部位等均有一定要 求，研發(fā)中需要特別注意。,生物利用度（Bioavailability; BA）： 指藥物活性成分從制劑釋放吸收進(jìn)入全身循環(huán)的程度和速度； 是反映藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)的程度和速度的指標(biāo)。 絕對(duì)生物利用度： 以靜脈制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)的相對(duì)量。 相對(duì)生物利用度： 以其他非靜脈途徑給藥的制劑為參比獲得的藥物活性成分吸收進(jìn)

6、入體循環(huán)的相對(duì)量。,生物利用度可用下式表示： Fabs % =（ D（非靜脈）/ D（iv）100% =（KeVd AUC（非靜脈）/ KeVd AUC（iv）100% =（AUC（非靜脈）/ AUC（iv）100% 同樣： Frel % =（AUC（非靜脈）/ AUC（非靜脈）100%,認(rèn)為靜脈給藥的吸收率為100%； 生物利用度是同一藥物或不同劑型中相同主藥的比較； 對(duì)同一受試個(gè)體來說，可認(rèn)為消除速率常數(shù)（Ke）和分布容積（Vd） 不變，所以生物利用度實(shí)驗(yàn)最好采用大動(dòng)物，在同一受試個(gè)體進(jìn)行交 叉比較實(shí)驗(yàn)。,2. 藥物制劑生物利用度評(píng)估：,由血漿濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)來評(píng)定生物利用度通常涉及三個(gè)主要

7、的參數(shù)，即：Cmax Tmax AUC,Cmax: 血藥達(dá)峰時(shí)的濃度 （血藥濃度峰值） Tmax: 血藥濃度達(dá)峰時(shí)間 AUC: 藥-時(shí)曲線下面積,由藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)指導(dǎo)設(shè)計(jì)預(yù)期臨床目的的藥物制劑 某些藥物的Tmax是關(guān)鍵參數(shù)； 某些藥物的持續(xù)時(shí)間是關(guān)鍵參數(shù)；,生物等效性（Bioequivalence； BE）： 生物利用度 生物等效性 BA 和BE 兩者均是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)。,Cmax：,Tmax：,AUC：,原創(chuàng)藥（Innovator Product）： 是指已經(jīng)過全面的藥學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究以及臨床研究數(shù)據(jù)證實(shí)其安全有效性并首次被批準(zhǔn)上市的藥品。 藥學(xué)等效性(Pharmaceutic

8、al equivalence)： 如果兩制劑含等量的相同活性成分，具有相同的劑型，符合同樣的或可比較的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，就可以認(rèn)為它們是藥學(xué)等效的。 藥學(xué)等效不一定意味著生物等效： 因?yàn)檩o料的不同或生產(chǎn)工藝差異等，可能會(huì)導(dǎo)致藥物溶出或吸收行為的改變。,治療等效性(Therapeutic equivalence)： 若兩制劑含有相同活性成分，并且臨床上顯示具有相同的安全性和有效性，可以認(rèn)為兩制劑具有治療等效性。 若兩制劑中所用輔料本身并不會(huì)導(dǎo)致有效性和安全性問題，生物等效性研究是證實(shí)兩制劑治療等效性最合適的辦法。 若藥物吸收速度與臨床療效無關(guān),吸收程度相同但吸收速度不同的藥物也可能達(dá)到治療等效。而含有相

9、同的活性成分只是活性成分化學(xué)形式不同（如同一藥物的鹽、酯等）或劑型不同（如片劑和膠囊劑）的藥物制劑也可能治療等效。,藥代動(dòng)力學(xué)研究方法： 即采用通過測(cè)量不同時(shí)間點(diǎn)的生物樣本（如全血、血漿、血清或尿液）中藥物濃度，獲得藥物濃度-時(shí)間曲線（C-T）來反映藥物從制劑中釋放吸收到體循環(huán)中的動(dòng)態(tài)過程。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如曲線下面積（AUC）、達(dá)峰濃度（Cmax）、達(dá)峰時(shí)間（Tmax）等。,3. 藥物制劑BA研究方法：,藥效動(dòng)力學(xué)研究方法： 在無可行的藥代動(dòng)力學(xué)研究方法建立生物等效性研究時(shí)（如無靈敏的血藥濃度檢測(cè)方法、濃度和效應(yīng)之間不存在線性相關(guān)），可以考慮用明確的

10、可分級(jí)定量的藥效學(xué)指標(biāo)通過效應(yīng)-時(shí)間曲線（Effect-Time curve）與參比制劑比較來確定生物等效性。,以藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為終點(diǎn)指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。一個(gè)完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、統(tǒng)計(jì)分析、結(jié)果評(píng)價(jià)等方面的內(nèi)容。,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作,自身交叉對(duì)照：,清洗期（Wash-out Period）：,受試動(dòng)物選擇：,例數(shù)：,分組：,動(dòng)物福利：,參比制劑( Reference Product , R )： 受試制劑 ( Test Product，T )： 參比制劑和受試制劑含量差別不能超過5%；參比和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號(hào)、規(guī)格、保存條件、有效

11、期。,給藥劑量：,生物樣品取樣：,藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)計(jì)算：,研究過程標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化：,靶向給藥系統(tǒng)： 靶組織分布：活性成分,透皮給藥系統(tǒng)： 藥物透過皮膚吸收進(jìn)入血液循環(huán)從而治療疾病的新型給藥系統(tǒng)，其特點(diǎn)是可以避免口服給藥可能發(fā)生的肝臟首過效應(yīng)及胃腸滅活效應(yīng)，克服藥物口服生物利用度不高的問題，可以維持恒定的血藥濃度或藥理效應(yīng)、延長(zhǎng)作用時(shí)間、減少毒副作用、增強(qiáng)用藥順應(yīng)性等。 藥物、輔料等與皮膚的相互作用問題； 血藥的持續(xù)時(shí)間；生物利用度等。,緩控釋給藥： 緩釋制劑的突釋問題； 體內(nèi)駐留時(shí)間( MRT )。,粘膜給藥： 生物利用度； 輔料與粘膜的作用以及對(duì)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。,載體給藥系統(tǒng)： 載體材料對(duì)藥物

12、轉(zhuǎn)運(yùn)的影響； 活性藥物的測(cè)定；,生物技術(shù)藥物： 給藥技術(shù)相對(duì)滯后； 生物技術(shù)藥物對(duì)給藥系統(tǒng)的依賴性很大； PD/PK研究；,三. 先進(jìn)、配套、規(guī)范的體內(nèi)藥物分析檢測(cè)技術(shù) 是制劑處方體內(nèi)評(píng)價(jià)的基本手段,1. 靈敏、專一的體內(nèi)藥物（被測(cè)組分）檢測(cè)技術(shù)方法的建立 與應(yīng)用成為藥學(xué)領(lǐng)域重要研究?jī)?nèi)容,新型化學(xué)結(jié)構(gòu)藥物 生物技術(shù)藥物 高活性低劑量藥物,如：低劑量結(jié)構(gòu)特殊的化學(xué)合成藥物； 天然藥物中的糖類藥物； 生物技術(shù)藥品 內(nèi)源性化合物藥物,SFDA：,（一）生物樣本分析方法的建立和確證 （PP6-11 / PP1-30） 1. 常用分析方法 2. 方法學(xué)確證（Method Validation） 2.1

13、特異性(Specificity) 2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍（Calibration Curve） 2.3 定量下限（Lower Limit of quantitation，LLOQ） 2.4 精密度與準(zhǔn)確度(Prcision and Accuracy) 2.5 樣品穩(wěn)定性(Stability) 2.6 提取回收率 2.7 微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證 3. 方法學(xué)質(zhì)控 4. 分析數(shù)據(jù)的記錄與保存 4.1 方法建立的數(shù)據(jù) 4.2 樣品分析的數(shù)據(jù) 4.3 其他相關(guān)信息,靈敏度高：,2. 體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定方法的特點(diǎn),濃度低：,樣品來源有限,專一性,樣品量少：,個(gè)體差異大：,方法快捷：,方法

14、可靠：,分析方法和檢測(cè)手段配套：,內(nèi)標(biāo)法定量方法 ：提高分析方法的可靠性；操作簡(jiǎn)便。 在實(shí)際操作中，由于樣品處理步驟繁瑣，難于達(dá)到每次操作的完全 平行，因而會(huì)引入較大的誤差。,對(duì)內(nèi)標(biāo)化合物的基本要求： 供選作內(nèi)標(biāo)的化合物，其理化性質(zhì)與被測(cè)組分應(yīng)相近； 內(nèi)標(biāo)的色譜峰應(yīng)靠近被測(cè)組分的色譜峰，最好位于幾個(gè)被測(cè)組分色譜 峰的中間，但又能完全分離。 內(nèi)標(biāo)濃度的選擇 ：一般內(nèi)標(biāo)加入量應(yīng)控制在使標(biāo)準(zhǔn)曲線中段的藥物與 內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)值（注意不是濃度）比近似為1 。,3. 體內(nèi)藥物（代謝產(chǎn)物）分析測(cè)定中的特殊問題,對(duì)內(nèi)標(biāo)的純度要求：從實(shí)際應(yīng)用角度出發(fā)，不苛求內(nèi)標(biāo)具有高純度與 高含量，只要求在同一次測(cè)定中，標(biāo)準(zhǔn)曲線和

15、樣品各管內(nèi)內(nèi)標(biāo)加入量 相等。 內(nèi)標(biāo)物能很好地溶解在樣品中，但不能與樣品發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。 供作內(nèi)標(biāo)的化合物不應(yīng)當(dāng)是體內(nèi)的內(nèi)源性成分，或藥物在體內(nèi)可能產(chǎn) 生的代謝物，并且最好不用患者可能同時(shí)使用的其他藥物。,內(nèi)原性藥物分析：生物機(jī)體內(nèi)天然固有的物質(zhì)，如生物遞質(zhì)類、激 素類等。,內(nèi)源性物質(zhì)作為外源性藥物，如何區(qū)分于內(nèi)源性的干擾？ 生物耗竭：如：利血平對(duì)單胺遞質(zhì)的耗竭； 注意：內(nèi)源性物質(zhì)耗竭與生物機(jī)體生理機(jī)能變化關(guān)系。 扣除本底：本底樣品的樣本數(shù)量； 內(nèi)源性物質(zhì)的分泌（時(shí)辰）節(jié)律性； 同位素標(biāo)記：將化合物用同位素標(biāo)記后給予動(dòng)物，以便區(qū)別于生物 機(jī)體內(nèi)的內(nèi)源性物質(zhì)。,間接分析測(cè)定方法：不是直接測(cè)定藥物的本

16、身濃度，而是通過其它指標(biāo) 相應(yīng)的變化，間接、定量的反映被測(cè)成分的量。,4. 方法學(xué)確認(rèn)（評(píng)價(jià)、確證、考評(píng)、validation ）,“生物樣品測(cè)定的關(guān)鍵是方法學(xué)的確證。方法學(xué)確證是整個(gè)藥代動(dòng)力學(xué)研究的基礎(chǔ)。這是藥代動(dòng)力學(xué)研究有別于其它藥理毒理研究的特殊之處。所有藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果，都依賴于生物樣品的測(cè)定，只有可靠的方法才能得出可靠的結(jié)果。在通過特異性、靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性等研究建立了檢測(cè)方法學(xué)，得到了標(biāo)準(zhǔn)曲線后，在檢測(cè)過程中還應(yīng)進(jìn)行方法學(xué)質(zhì)控，制備隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線并對(duì)質(zhì)控樣品進(jìn)行測(cè)定，以確保檢測(cè)方法的可靠性。”,引自: 化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性研究技術(shù)指導(dǎo)原則,名詞解釋:,

17、體內(nèi)藥物分析方法的評(píng)價(jià)內(nèi)容：,（1） Selectivity: （2） Linear Range and Response Factor： （3） Inter-Day Precision and Accuracy: （4） Intra-Day Precision and Accuracy: （5） Dilution Integrity: （6） Sensitivity: （7） Recovery (Extraction Efficiency)： （8） Matrix Effects: （9） Carryover Evaluation： （10） Stability: （11） Relative

18、 Retention:,受試驗(yàn)藥物標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖 正常生物樣品（空白）色譜圖 （6個(gè)不同來源的受試個(gè)體） 正常生物樣品外加受試藥物色譜圖 （ 6個(gè)不同來源的受試個(gè)體：血漿種屬；血漿外加藥物濃度；內(nèi)標(biāo)濃度） 給藥后生物樣品色譜圖 （受試種屬；給藥途徑、劑量；生物樣品采集時(shí)間點(diǎn)）,Selectivity:,被測(cè)組分與內(nèi)源性物質(zhì)、試劑中雜質(zhì)、代謝產(chǎn)物以及其它干擾物質(zhì)有良好的分離; 必須證明所測(cè)定的物質(zhì)是預(yù)期的分析物，內(nèi)源性物質(zhì)和其他代謝物不得干擾樣品的測(cè)定。對(duì)于色譜法至少要考察6個(gè)不同來源空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖。對(duì)于質(zhì)譜法則應(yīng)著重考察

19、分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)。,必須用至少6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(n = / 5); 應(yīng)使用與待測(cè)樣品相同的生物介質(zhì); 定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)濃度; 不允許將定量范圍外推求算未知樣品的濃度。 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)。,Linear Range and Response Factor：,標(biāo)準(zhǔn)曲線 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍最低和最高濃度樣品的色譜圖 空白生物樣品外加被試藥物(低、中、高三個(gè)濃度； n5)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的反算(back-calculated)測(cè)定濃度,Inter-Day Precision and Accuracy: Intra-Day

20、 Precision and Accuracy:,要求選擇3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。 低濃度選擇在定量下限（LLOQ）附近，其濃度在LLOQ的3倍以內(nèi)； 高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限； 中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè)定5個(gè)樣品，為獲得批間精密度應(yīng)至少 連續(xù)測(cè)定3個(gè)分析批。 精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，RSD一般應(yīng)小于15%，在LLOQ附近RSD應(yīng)小于20%。 準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%115%范圍內(nèi)，在LLOQ附近應(yīng)在80%120%范圍內(nèi)。,Precision of the method, defined by the percent relat

21、ive standard deviation ( %RSD = （standard deviation）（mean）100)， was determined from the interpolated QC sample concentrations.,Accuracy of the method, defined by the percent relative error ( %RE = （standard observed concentrationnominal concentration） （ nominal concentration ）100),Precision and Accu

22、racy,Dilution Integrity:,目的是為解決在樣品測(cè)定過程中，出現(xiàn)超過最高定量上限的樣品的測(cè)定問題。 采用與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的空白血漿，對(duì)超出定量上限的樣品進(jìn)行一定比例的稀釋，稀釋后的待測(cè)樣品濃度應(yīng)在所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)。 高濃度樣品稀釋后，所測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度不受稀釋的影響。,Sensitivity:,定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點(diǎn)，要求至少能滿足測(cè)定35個(gè)半衰期時(shí)樣品中的藥物濃度，或Cmax的1/101/20時(shí)的藥物濃度，其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實(shí)濃度的80%120%范圍內(nèi)，RSD應(yīng)小于20%。應(yīng)由至少5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)試結(jié)果證明。,最低檢測(cè)濃度(X/ml) 最低檢測(cè)量(X)

23、最低定量下限(LLOQ),Recovery (Extraction Efficiency),提取回收率: 應(yīng)考察高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果應(yīng)當(dāng)一致、精密和可重現(xiàn)。,低、中、高(3個(gè)濃度):,萃取回收率:,Matrix Effects:,在采用質(zhì)譜方法進(jìn)行體內(nèi)藥物定量檢測(cè)時(shí),應(yīng)進(jìn)行基質(zhì)效應(yīng)試驗(yàn),觀察基質(zhì)對(duì)藥物測(cè)定的影響.,基質(zhì)（matrix） 尚無統(tǒng)一的解釋，曾稱為“一種分析物（analyte）的環(huán)境（milieu）”，即指標(biāo)本中除分析物以外的一切組成。,(兩種測(cè)定方式的藥物濃度相等),Matrix Factor (MF;基質(zhì)因子): peak area (fortified sam

24、ples) / peak area (analytical samples,含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品,不含有生物基質(zhì)、已知濃度樣品,IS adjusted Matrix Factor (內(nèi)標(biāo)校正的基質(zhì)因子):,ratios of peak area(Drug/IS) (fortified samples) ratio of peak area (Drug/IS) (analytical samples),含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標(biāo)濃度樣品,不含有生物基質(zhì)、已知藥物和內(nèi)標(biāo)濃度樣品,Carryover試驗(yàn)：,一般是在分析測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量上限濃度的樣品之后，立即測(cè)定 一個(gè)空白樣品（最好是雙空白

25、生物樣品）。 要求：空白生物樣品在被測(cè)藥物和內(nèi)標(biāo)的出峰位置（或時(shí)間），沒 有 殘留現(xiàn)象；或殘留的相應(yīng)信號(hào)為L(zhǎng)LOQ或內(nèi)標(biāo)信號(hào)的20%以下。,Stability:,（1）藥物母液（長(zhǎng)期或較長(zhǎng)時(shí)間）放置穩(wěn)定性 （2）血漿樣品長(zhǎng)期放置穩(wěn)定性 （3）血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性 （4）血漿樣品處理后（自動(dòng)進(jìn)樣器）穩(wěn)定性 （5）血漿樣品凍融穩(wěn)定性,樣品的濃度一般設(shè)為：低、中、高（三個(gè)濃度梯度）； 常依樣品測(cè)定中的QC樣品進(jìn)行試驗(yàn)。 原則上以研究過程的實(shí)際狀況為穩(wěn)定性考察的依據(jù)。,標(biāo)明：藥物的濃度；藥物儲(chǔ)存的介質(zhì)（或溶媒）； 樣品放置（或儲(chǔ)存）的條件和環(huán)境； 放置的時(shí)間或處置的條件等。,Relative Ret

26、ention:,評(píng)價(jià)和觀察分析系統(tǒng)的適宜性(suitability) 選定一個(gè)濃度的樣品(QC中的一個(gè)濃度) 進(jìn)行不同日期(批)的測(cè)定 計(jì)算出相對(duì)保留的可接受范圍,5. 常用分析測(cè)試方法：,以LC-MSn為主流的檢測(cè)分析手段： 選擇性、靈敏度明顯提高；方法學(xué)建立和樣品測(cè)試快。,生物技術(shù)制劑分析技術(shù)：,生物技術(shù)藥物：分子量大，穩(wěn)定性差，半衰期短； 多次注射給藥，順應(yīng)性差； 對(duì)給藥系統(tǒng)的依賴性大。 藥物制劑中的穩(wěn)定化性， 提高生物利用度問題， 延長(zhǎng)體內(nèi)時(shí)間， 體內(nèi)、外評(píng)價(jià)問題。,sample poolingone point (36# & D2 ),快速樣品檢測(cè)方法：適合于處方設(shè)計(jì)初期的評(píng)篩。,1

27、. 藥物相互作用的類別 ( Types of Drug Interactions )：,藥物理化性質(zhì)相互作用：藥劑學(xué)的相互作用 藥物效應(yīng)學(xué)的相互作用：藥理、毒理的相互作用 藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用：ADME的相互作用,四. 藥物制劑設(shè)計(jì)和體內(nèi)評(píng)價(jià)考慮的問題,（1） 藥物的理化性質(zhì)相互作用：,兩種或兩種以上的藥物可以發(fā)生種種物理、化學(xué)反應(yīng)； 藥物藥物之間、藥物賦形劑之間；,產(chǎn)生沉淀：,沉淀不明顯：,藥物制劑中的增溶劑被稀釋：,改變組織或受體的敏感性：,（2） 藥效學(xué)的相互作用：,藥物合用時(shí)，一種藥物可以對(duì)另一藥物的血濃度沒有明顯影響，但可以改變后者的藥理效應(yīng)。,對(duì)受體以外部位的影響：,改變體液和電解

28、質(zhì)的平衡：這種相互作用多發(fā)生在作用于心肌、 神經(jīng)肌肉突觸傳遞及腎臟的藥物； 如：兩性霉素B和排鉀利尿藥可增加強(qiáng)心甙的毒性； 保泰松、吲哚美辛可加重皮質(zhì)激素類的水鈉潴留等。,（3）藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用： 影響藥物的ADME以及藥物與血漿蛋白的結(jié)合。,影響藥物的吸收： 腸蠕動(dòng)變化對(duì)藥物吸收的影響：,影響吸收部位酶或菌叢變化： 口服地高辛以后，部分藥物可在腸道細(xì)菌的作用下轉(zhuǎn)化為無強(qiáng)心 作用的雙氫地高辛和雙氫地高辛甙元。但口服紅霉素等藥物后可 抑制腸道里這些細(xì)菌的轉(zhuǎn)化作用，使地高辛的轉(zhuǎn)化減少，在腸道 里的吸收增加，血濃度升高，可引起中毒。,影響與血漿蛋白的結(jié)合：,大多數(shù)藥物吸收后，在不同程度上可與血漿

29、蛋白結(jié)合； 結(jié)合型與游離型藥物保持一定的動(dòng)態(tài)平衡； 游離型藥物可轉(zhuǎn)運(yùn)、保持活性； 結(jié)合型藥物一般沒有藥理活性； 當(dāng)游離型藥物的濃度降低時(shí)，被結(jié)合的藥物又能再分離出來；這種機(jī) 制有利于避免血藥濃度瞬間過高，也可以延長(zhǎng)藥物的治療作用時(shí)間。,與血漿蛋白的結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)作用： 不同的藥物與血漿蛋白的結(jié)合力不同。當(dāng)兩種藥物合用時(shí)，結(jié)合力 強(qiáng)的藥物可把結(jié)合力弱的藥物置換出來，使后者游離型的藥物濃度 增加，引起不良反應(yīng)。 如：磺胺類、水楊酸類藥物保泰松，可以置換甲苯磺丁脲等口服降血 糖藥，引起低血糖反應(yīng)； 保泰松、羥基保泰松、水楊酸類、安妥明、苯妥英鈉可置換雙香 豆素、華法林等抗凝血藥，引起凝血障礙、出血等。,大

30、部分藥物進(jìn)入機(jī)體后主要在肝臟內(nèi)經(jīng)微粒體酶的催化而代謝； 藥物也可經(jīng)肝外代謝，如腎臟和血漿的酶對(duì)藥物也有轉(zhuǎn)化作用； 藥物進(jìn)入到機(jī)體后，根據(jù)藥物的性質(zhì)，無非是以幾種方式存在或發(fā)揮活性：,影響藥物的生物轉(zhuǎn)化：,藥酶介導(dǎo)：（1）藥物消除的形式；排泄？轉(zhuǎn)化？ （2）側(cè)重考慮藥物是否多酶介導(dǎo)問題,抑制作用：由于D2的加入，使原來D1藥效劑量下的適宜血藥濃度升 高，可能會(huì)產(chǎn)生毒性； 側(cè)重考慮藥物的毒性問題。,誘導(dǎo)作用：由于D2的加入，使原來D1藥效劑量下的適宜血藥濃度降 低，可能會(huì)達(dá)不到原來的藥效作用； 側(cè)重考慮藥物的藥效問題！,影響腎臟的排泄：,藥物從腎臟排出體外，主要通過腎小球?yàn)V過、腎小管分泌的途徑。腎

31、小管還有被動(dòng)和主動(dòng)重吸收的功能。,腎小管的分泌是一個(gè)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程，要通過特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)載體，包括酸性藥物載體和堿性藥物載體。當(dāng)兩種酸性藥物（或堿性藥物）合用時(shí)，可相互競(jìng)爭(zhēng)酸性（或堿性）載體，競(jìng)爭(zhēng)力弱的由腎小管分泌途徑排出的就少，可以引起一些不良反應(yīng)。,如：痛風(fēng)病人合用丙磺舒和消炎痛，消炎痛的不良反應(yīng)發(fā)生率可明顯 增加； 雙香豆素也能減少氯磺丙脲由腎小管分泌排出，引起低血糖反應(yīng)。,腎小管的重吸收率可受尿液pH的改變而改變； 如：奎尼丁與氫氯噻嗪合用，后者可使尿液堿化，前者大部分不解離， 脂溶性強(qiáng)，易被腎小管重吸收，使血濃度升高，引起心臟毒性反 應(yīng)，如必需用利尿藥，可改用不使尿液堿化的速尿等利尿藥。,

32、P-gp 介導(dǎo)的腸道部位依賴性的吸收對(duì)開發(fā)藥物緩控釋制劑具有一定指導(dǎo)意義，開發(fā)緩控釋制劑的前提是了解藥物在不同腸道部位的吸收特征，即了解P-gp 介導(dǎo)的分泌在腸道不同部位對(duì)藥物吸收的貢獻(xiàn)大小，以確定該藥物是否適合制成緩控釋制劑。,4. 藥物轉(zhuǎn)運(yùn)子 ( transporter )：,ATP結(jié)合盒（ATP-binding cassette，ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族。 P-gp是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。 P-gp 作為一種能量依賴性藥物外排泵，通ATP供能，將細(xì)胞內(nèi)的藥物泵出細(xì)胞外，從而降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度。,在藥物制劑處方設(shè)計(jì)中要充分考慮輔料對(duì)P-gp 活性的影響，從而改善藥物處置、提高藥物

33、生物利用度，并克服腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性。,P-gp對(duì)藥物外排作用主要有4大特點(diǎn)： ( 1 ) 底物廣泛： ( 2 ) ATP 依賴性： ( 3 ) 飽和性： ( 4 ) 競(jìng)爭(zhēng)性： 當(dāng)兩種親和力不同的底物同時(shí)存在時(shí)，親和力大的底物易與 P-gp結(jié)合而被泵到細(xì)胞外，親和力小的底物與Pgp結(jié)合少， 易在細(xì)胞內(nèi)蓄積,P-gp與藥酶CYP3A4在腸道內(nèi)協(xié)同作用： CYP3A4在肝臟和小腸細(xì)胞的微粒體中有豐富表達(dá)； P-gp不直接參與藥物代謝過程，但影響藥物在小腸首過代謝代謝過程。 P-gp和CYP3A4不僅分布近似，而且通常有相近的底物和抑制劑，CYP3A4 和P-gp 發(fā)揮協(xié)同作用。,食物及制劑輔科對(duì)

34、P-gp功能的影響:,食物成分 多種黃酮類化合物能直接與P-gp 的核苷結(jié)合位作用，抑制P-gp 的 ATP 酶活性，阻斷P-gp介導(dǎo)的經(jīng)腸分泌，從而促進(jìn)P-gp相應(yīng)底物的 吸收。 葡萄柚汁中的呋喃香豆素bergamottin 不僅抑制細(xì)胞色素P450 3A4 酶的活性, 同時(shí)也抑制P-gp介導(dǎo)的ATP水解。由于日常生活中果汁 和藥草提取物廣泛使用，應(yīng)充分考慮其與藥物間的相互作用以及其 在臨床上的應(yīng)用。,制劑輔料 某些制劑輔料也能夠調(diào)節(jié)P-gp 的活性： 例如： 吐溫-80 普郎尼克P-85 tri-tonX2100 cremophor EL PEG 300 PEG 400 (2 ,6-二甲基

35、-環(huán)糊精) TPGS 等,首過代謝：,難溶性藥物：,藥物釋放時(shí)間：,妨礙吸收的多種類型反應(yīng)能降低生物利用度。,其它因素： 年齡；性別；活動(dòng)情況； 遺傳表型；應(yīng)激； 疾?。何杆崛狈Γ粻I(yíng)養(yǎng)不良；胃腸手術(shù)等。,5. 生物利用度低的原因：,6. 復(fù)方藥物的制劑配方：,提高臨床用藥的順應(yīng)性；增加療效，減小毒性。,選準(zhǔn)藥品：根據(jù)研制復(fù)方的預(yù)期目的選準(zhǔn)藥品及比例。,如：鎮(zhèn)痛復(fù)方：鎮(zhèn)痛藥物 嗜睡藥物 比例 藥物-1 藥物-3 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 ,（1）復(fù)方氨氯地平和特拉唑嗪膠囊體內(nèi)評(píng)價(jià)：,比格犬口服復(fù)方氨氯地平特拉唑嗪后，比較復(fù)方中兩藥與單藥在比格犬體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特性；并考察兩藥合用時(shí)

36、的相互作用。,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：,研究?jī)?nèi)容： 單次(首次)口服苯磺酸氨氯地平(0.6mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)； 單次(首次)口服鹽酸特拉唑嗪(0.24 mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)； 末次口服苯磺酸氨氯地平(0.6mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)； 末次口服鹽酸特拉唑嗪(0.24 mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)； 單次(首次)口服AT復(fù)方(0.6mg/kg0.24mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)； 連續(xù)多次口服AT復(fù)方(0.6mg/kg0.24mg/kg)的藥代動(dòng)力學(xué)。,首次口服氨氯地平單藥及復(fù)方后氨氯地平,首次口服特拉唑嗪?jiǎn)嗡幖皬?fù)方后特拉唑嗪,平均藥時(shí)曲線：,首次： A：?jiǎn)嗡帲旱停?復(fù)方：高； T：?jiǎn)嗡帲?復(fù)方：相近； 似乎

37、是T抑制了代謝A的藥酶？但首次（僅1次）用藥，不可能產(chǎn)生誘導(dǎo)作用。,首次和末次口服氨氯地平單藥,首次和末次口服特拉唑嗪?jiǎn)嗡?A：首次：低； 末次：高； T：首次： 末次： 相近； A多次連續(xù)用藥后，對(duì)藥酶有自身抑制作用。,首次和末次口服復(fù)方后氨氯地平,首次和末次口服復(fù)方后特拉唑嗪,復(fù)方：A：首次：低； 末次：高； T：首次： 末次： 相近； 復(fù)方多次連續(xù)用藥后，A血藥升高，表明T抑制了代謝A的藥酶。,制劑處方的體內(nèi)、外評(píng)價(jià)的差異：,藥劑處方的體內(nèi)評(píng)價(jià)研究,制劑處方評(píng)價(jià)的種屬之間差異：,制劑處方的早期評(píng)篩： 研制具有預(yù)期體內(nèi)過程和理想藥代特性的藥物制劑，藥代動(dòng)力學(xué)應(yīng)早期參與對(duì)處方的篩選。 為優(yōu)化和修正處方，快速提供和反饋早期的處方體內(nèi)評(píng)價(jià)和預(yù)測(cè)結(jié)果。,研究室基本情況,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物代謝與藥代動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 國(guó)家科技部臨床前藥代動(dòng)力學(xué)技術(shù)平臺(tái)建設(shè)單位 首都科技條件平臺(tái)開放實(shí)驗(yàn)室 北京中關(guān)村開放實(shí)驗(yàn)室 全軍新藥評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,藥物代謝與藥代動(dòng)力學(xué)動(dòng)力學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,化學(xué)合成藥物與中藥和天然產(chǎn)物代謝專業(yè)實(shí)驗(yàn)室 生物技術(shù)藥品代謝專業(yè)實(shí)驗(yàn)室 基因藥物和治療性疫苗專業(yè)實(shí)驗(yàn)室 肝細(xì)胞及藥物代謝酶學(xué)專業(yè)實(shí)驗(yàn)室 同位素標(biāo)記與體