1、2020/9/24,李宏業(yè)1,分析方法驗(yàn)證,主講人：李宏業(yè) 歐美GMP認(rèn)證高級咨詢師 北京宏匯萊科技有限公司總經(jīng)理 天津大學(xué)制藥工程碩士班GMP課程專職講師 國家食品藥品監(jiān)督管理局高級研修學(xué)院培訓(xùn)講師,重點(diǎn)議題,法規(guī)要求 驗(yàn)證目的 檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容 分析方法確認(rèn) 分析方法再驗(yàn)證,2020/9/24,李宏業(yè)2,分析方法的法規(guī)要求,第十二條 質(zhì)量控制的基本要求： （四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證或確認(rèn)；,2020/9/24,李宏業(yè)3,分析方法的法規(guī)要求,第二百二十三條 物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求： （二

2、）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證： 1.采用新的檢驗(yàn)方法； 2.檢驗(yàn)方法需變更的； 3.采用中華人民共和國藥典及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法； 4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。,2020/9/24,李宏業(yè)4,分析方法的法規(guī)要求,（三）對不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；,2020/9/24,李宏業(yè)5,2020/9/24,6,分析方法的法規(guī)要求,藥典或官方標(biāo)準(zhǔn)收載的方法 不需完整驗(yàn)證 需驗(yàn)證方法的適用性（確認(rèn)） 自研方法或?qū)俜綐?biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了大幅調(diào)整 需完整驗(yàn)證,驗(yàn)證的目的,證明采用的

3、方法適合于相應(yīng)的檢測要求。,2020/9/24,李宏業(yè)7,2020/9/24,lihongye,8,檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容,注： 表示通常不需論證的項(xiàng)目； + 表示通常需論證的項(xiàng)目； 假如已論證重現(xiàn)性，可不需再論證中間精密度； 缺乏專屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來作補(bǔ)充； 有些情況不需要。,2020/9/24,lihongye,9,術(shù)語（1）,準(zhǔn)確度是指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（）表示。 精密度是指在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度，一般用偏差，標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。,2020/9/24,

4、lihongye,10,術(shù)語（2）,專屬性是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物，輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法補(bǔ)充。 檢測限是指試樣中被測物能被檢測出的最低量。 定量限是指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測量結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。,2020/9/24,lihongye,11,術(shù)語（3）,線性是指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。 范圍是指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 耐用性是指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于提供常規(guī)檢驗(yàn)依據(jù)。,2

5、020/9/24,12,分析方法的驗(yàn)證項(xiàng)目,典型分析方法驗(yàn)證的項(xiàng)目： 專屬性 specificity 精密度 precision 準(zhǔn)確度 accuracy 檢測限 detection limit 定量限 quantitation limit 線性 linearity 范圍 range 耐用性 robustness,2020/9/24,13,分析方法的驗(yàn)證-專屬性,專屬性 定義：指一種方法在有可能的干擾物質(zhì)（如雜質(zhì)、 降解產(chǎn)物和基質(zhì)）存在時(shí)，能夠準(zhǔn)確無誤地評估 被分析物的能力 鑒別:確?？梢澡b別被分析物 純度檢查：確保所有的分析過程能夠?yàn)殡s質(zhì)的含量提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，如相關(guān)物質(zhì)檢查、重金屬限度檢查、

6、有機(jī)揮發(fā)性雜質(zhì)檢查等 含量測定：提供準(zhǔn)確的檢測結(jié)果以保證含量樣品中被分析物的含量或效價(jià)值準(zhǔn)確無誤,2020/9/24,14,分析方法的驗(yàn)證-專屬性,專屬性 方法 定性分析（鑒別）：樣品陽性結(jié)果空白陰性結(jié)果結(jié)構(gòu)相似物質(zhì)的陰性結(jié)果； 雜質(zhì)檢查（對照品可得）：將可能的雜質(zhì)對照品加入樣品中； 雜質(zhì)檢查（對照品不可得）： 用另外一種官方的標(biāo)準(zhǔn)或經(jīng)驗(yàn)證的方法對樣品和經(jīng)降解的樣品分析，比較兩種方法得到的雜質(zhì)概況,2020/9/24,15,分析方法的驗(yàn)證-專屬性,雜質(zhì)檢查（對照品不可得） 使用其他技術(shù)對峰純度進(jìn)行檢查， 如二極管陣列檢測器、MS等 含量測定： 被分析物與其他干擾峰完成分離。向樣品中加入一定量的

7、干擾物，含量測定的結(jié)果不受干擾；檢查主峰的純度,分析方法的驗(yàn)證-專屬性,鑒別試驗(yàn)： 本品的紅外吸收圖譜應(yīng)與對照品的圖譜一致。 采用與被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物以及被測物分別進(jìn)行紅外測試。 被測物為正反應(yīng)。 被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物為負(fù)反應(yīng)。被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。,2020/9/24,李宏業(yè)16,分析方法的驗(yàn)證-專屬性,鑒別： 化學(xué)滴定的顏色反應(yīng)； 采用與被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物以及被測物分別進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。 被測物為正反應(yīng)。 被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物為負(fù)反應(yīng)。 被測物結(jié)構(gòu)類似的化合物可選用中間體、副產(chǎn)物或降解產(chǎn)物等。,2020/9/24,李宏業(yè)

817,2020/9/24,18,分析方法的驗(yàn)證-精密度,精密度precision 定義：對均一樣品重復(fù)取樣檢測每個(gè)檢測結(jié)果間的接近程度，RSD%,CV% 重復(fù)性repeatability：短時(shí)間內(nèi)同一分析人員使用 同一儀器 中間精密度intermediate precision:在同一實(shí)驗(yàn) 室內(nèi)的變化，如不同分析時(shí)間、不同分析人員、不 同分析儀器 重現(xiàn)性reproducibility:在不同實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù),2020/9/24,19,分析方法的驗(yàn)證-精密度,精密度 方法 100濃度6次 3濃度3次,2020/9/24,20,分析方法的驗(yàn)證-準(zhǔn)確度,準(zhǔn)確度 定義：方法的檢測結(jié)

9、果與真實(shí)值的接近程度。 方法： 原料藥：分析已知含量的對照品；第二種確定 的方法分析，結(jié)果比較 制劑：加樣回收；第二種確定的方法分析，結(jié) 果比較 應(yīng)在方法的范圍內(nèi) 計(jì)算回收率：3濃度3次,2020/9/24,21,分析方法的驗(yàn)證-檢測限,檢測限detection limit 定義：在聲明的實(shí)驗(yàn)條件下所能檢測到的被分析物的最小量。限度檢查的指標(biāo)；表示為在樣品中的濃度, ppm 方法： 檢測已知濃度的樣品(對照品) 雜質(zhì)的DL0.05% 信噪比2:1/3:1,2020/9/24,22,分析方法的驗(yàn)證-定量限,定量限quantitation limit 定義：在聲明的實(shí)驗(yàn)條件下被分析物可被定量分析并

10、能滿足合格的精密度和準(zhǔn)確度的最小值。微量物質(zhì)的定量分析：有關(guān)物質(zhì)定量分析，有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)的定量分析。，ppm 方法： 已知濃度樣品（對照品） 相關(guān)物質(zhì)0.05 證明精密度和準(zhǔn)確度 信噪比10:1,2020/9/24,23,分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍,線性和范圍 linearity and range 定義： 線性：在給定的范圍內(nèi)使檢測結(jié)果直接或通過 數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后與被分析物在樣品中的濃度成比例 的能力 范圍：在適當(dāng)?shù)木芏取?zhǔn)確度和線性基 礎(chǔ)上檢測到的被分析物的最低水平到最高水平 區(qū)間,2020/9/24,24,分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍,方法：一定范圍內(nèi)的不同濃度點(diǎn)進(jìn)樣，繪制響應(yīng)值（y）與濃度(

11、x)之間的回歸線，計(jì)算回歸方程，相關(guān)系數(shù)（r,r2） 主成分含量測定：80120檢測濃度 雜質(zhì)含量測定：定量限（50）120標(biāo)準(zhǔn) 裝量差異：70130檢測值 溶出實(shí)驗(yàn)：20規(guī)定范圍,分析方法的驗(yàn)證-線性與范圍,2020/9/24,李宏業(yè)25,要提供如下數(shù)據(jù)： 回歸方程ya + bx 回歸曲線 相關(guān)系數(shù),2020/9/24,26,分析方法的驗(yàn)證-耐用性,耐用性robustness 定義：分析方法的某些參數(shù)發(fā)生微小變化時(shí)方法抗干擾的能力，表示在正常使用時(shí)的可靠性 方法：刻意改變參數(shù)，考察結(jié)果的變化 流動(dòng)相的pH值、流動(dòng)相的組成（極性的變化）、 不同供應(yīng)商柱子、柱溫、流速等

12、,分析方法的驗(yàn)證-耐用性,液相：評估柱溫、流速、色譜柱、緩沖鹽pH、有機(jī)相比例、流動(dòng)相比例、溶液放置時(shí)間對檢測結(jié)果的影響 氣相：評估柱溫、流速、色譜柱、溶液放置時(shí)間對檢測結(jié)果的影響,2020/9/24,李宏業(yè)27,2020/9/24,28,分析方法的驗(yàn)證-系統(tǒng)適用性,系統(tǒng)適用性system suitability 耐用性驗(yàn)證的結(jié)果 影響參數(shù)在方法中列出 在日常樣品分析前、過程中進(jìn)行考察 色譜方法中尤為重要,分析方法的驗(yàn)證-系統(tǒng)適用性,液相和氣相可以不同； 液相：任何兩個(gè)組分之間的分離度R不小于1.5；重復(fù)進(jìn)樣(6次)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不大于2.0% 氣相：任何兩個(gè)組

13、分之間的分離度R不小于3；重復(fù)進(jìn)樣(6次)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD不大于15%。,2020/9/24,李宏業(yè)29,2020/9/24,30,分析方法的驗(yàn)證,USP對不同方法驗(yàn)證項(xiàng)目的要求 * 根據(jù)不同的方法特點(diǎn)也可能需要 “” 需要 “” 不需要,2020/9/24,31,分析方法的驗(yàn)證,I類方法：制劑中原料藥或活性成分（包括防腐劑）的定量分析方法； II類方法：原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度檢查； III類方法：藥物性能特征分析方法：溶出，藥物釋放 IV類方法：鑒別實(shí)驗(yàn),分析方法確認(rèn),適用于藥典方法和其他已驗(yàn)證的法定標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)樗幍浞椒ê推渌?/p>

14、法定標(biāo)準(zhǔn)被認(rèn)為是驗(yàn)證過的分析方法，不需要驗(yàn)證，但需要通過方法確認(rèn)來證明方法在該實(shí)驗(yàn)室條件下的適應(yīng)性。,2020/9/24,李宏業(yè)32,分析方法確認(rèn),對于方法確認(rèn)，通常采用兩種方式： 一、由兩名檢驗(yàn)人員分別獨(dú)立對同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)（如可能使用不同的儀器）比較兩人的檢測結(jié)果來證明方法在本實(shí)驗(yàn)室（人員，分析儀器，試劑）的適用性； 二、根據(jù)驗(yàn)證目的和評估結(jié)果選擇相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行確認(rèn)：（具體見下表）,2020/9/24,李宏業(yè)33,分析方法確認(rèn),2020/9/24,李宏業(yè)34,分析方法再驗(yàn)證,在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制

15、劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進(jìn)行部分或完整的再驗(yàn)證，以保證分析方法可靠。,2020/9/24,李宏業(yè)35,分析方法再驗(yàn)證,當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應(yīng)無干擾。,2020/9/24,李宏業(yè)36,分析方法再驗(yàn)證,當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時(shí)，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準(zhǔn)確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時(shí)，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進(jìn)行再驗(yàn)證。,2020/9/24,李宏業(yè)37,分析方法再驗(yàn)證,再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。 當(dāng)這種改變到達(dá)一定程度時(shí)，則需要完整的驗(yàn)證。如分析方法完全改變時(shí)，則應(yīng)視為新方法并需要完整的驗(yàn)證。方法再驗(yàn)證是對分析方法的完善過程，應(yīng)