1、,檢驗(yàn)科 吳 迪,生化分析儀原理,1,臨床生化自動(dòng)分析儀分類,按運(yùn)行速度： 1大型生化儀速度600 test / 小時(shí)以上 2中型生化儀速度300-600 test / 小時(shí) 3小型生化儀速度300 test /小時(shí)以下 按儀器結(jié)構(gòu)： 1流動(dòng)式自動(dòng)生化分析儀 2離心式自動(dòng)生化分析儀 3分立式自動(dòng)生化分析儀,分立式自動(dòng)分析儀的主要部件,加樣系統(tǒng) 比色系統(tǒng) 分光系統(tǒng) 供排水系統(tǒng) 清洗系統(tǒng) 操作控制與數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),加樣系統(tǒng),試劑倉(cāng) 樣品轉(zhuǎn)盤(pán)、進(jìn)樣架系統(tǒng)（樣本放入?yún)^(qū)、條碼掃描通道、測(cè)定緩沖區(qū)、樣本回收區(qū)） 樣品取樣單元 試劑取樣單元 混合部件,比色系統(tǒng),光源 比色杯 分立式比色轉(zhuǎn)盤(pán) 比色杯恒溫 水浴、

2、空氣浴、恒溫液循環(huán)間接加熱 比色杯類型 硬質(zhì)石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。,分光系統(tǒng),干涉濾光片 光柵分光式 無(wú)相差蝕刻凹面光柵 后分光集束式光路系統(tǒng),關(guān)于雙波長(zhǎng)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn),通過(guò)計(jì)算兩個(gè)波長(zhǎng)之間的差值，可糾正樣品中脂血、溶血和黃疸干擾的影響；也可補(bǔ)償電壓波動(dòng)的影響，從而獲得穩(wěn)定的測(cè)定結(jié)果。,自動(dòng)生化分析儀的工作程序,自動(dòng)分析儀的基本分析方法,終點(diǎn)法 （1點(diǎn)）終點(diǎn)法和2點(diǎn)終點(diǎn)法 速率法 速率法和2點(diǎn)速率法（固定時(shí)間法）,終點(diǎn)法,被測(cè)物質(zhì)（反應(yīng)底物）在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中完全被消耗或轉(zhuǎn)換，即反應(yīng)達(dá)到平衡（終點(diǎn)），通過(guò)測(cè)定產(chǎn)物（反應(yīng)生成物）的多少來(lái)定量測(cè)定被測(cè)底物的含量。 終點(diǎn)法一般用來(lái)檢測(cè)代謝

3、物的濃度，通過(guò)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)液（校準(zhǔn)液）的反應(yīng)吸光度，建立一條濃度與吸光度變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線。 通過(guò)檢測(cè)標(biāo)本的吸光度與標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度進(jìn)行比較，計(jì)算出該標(biāo)本中待測(cè)物的濃度。,終點(diǎn)法,終點(diǎn)法 終點(diǎn)法可根據(jù)試劑原理不同設(shè)置為（一點(diǎn)）終點(diǎn)法和兩 點(diǎn)終點(diǎn)法。 對(duì)于單一試劑，在加入標(biāo)本后，反應(yīng)即可進(jìn)行，在反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)后，讀取反應(yīng)點(diǎn)（吸光度），故一般選用一點(diǎn)終點(diǎn)法。 對(duì)于兩種以上的試劑，加入第一試劑，主要起緩沖或者消除干擾等作用，此時(shí)可讀取初始反應(yīng)點(diǎn)，加入第二（或第三）試劑后，在反應(yīng)達(dá)到終點(diǎn)后，讀取結(jié)束反應(yīng)點(diǎn)。此即兩點(diǎn)終點(diǎn)法。 本質(zhì)均為終點(diǎn)法。,終點(diǎn)法反應(yīng)曲線舉例（單試劑）,終點(diǎn)法反應(yīng)曲線舉例（單試劑）,終點(diǎn)法反應(yīng)曲

4、線舉例（雙試劑）,終點(diǎn)法反應(yīng)曲線舉例（雙試劑）,終點(diǎn)法反應(yīng)曲線舉例（雙試劑免疫比濁法）,速率法,速率法分為：連續(xù)監(jiān)測(cè)速率法和兩點(diǎn)速率法（固定時(shí)間法）。 連續(xù)監(jiān)測(cè)速率法：在可見(jiàn)光區(qū)(GGT、ALP：405nm黃色)或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段時(shí)間內(nèi)連續(xù)監(jiān)測(cè)某一物質(zhì)的生成 (或消耗的) 速率，計(jì)算待測(cè)物的活性，一般用于樣本中酶活性的檢測(cè)。 酶促反應(yīng)，在一定條件和測(cè)定范圍內(nèi)，當(dāng)Km底物濃度，符合零級(jí)速率法，底物消耗/生成的速率只與催化反應(yīng)的酶的活性有關(guān)，為正比例關(guān)系，直線的斜率為定值（即K值或factor）,連續(xù)監(jiān)測(cè)速率法的反應(yīng)曲線,兩點(diǎn)速率法,兩點(diǎn)速率法適用于反應(yīng)吸光度

5、隨時(shí)間的變化而變化，在一定時(shí)間內(nèi)無(wú)到達(dá)終點(diǎn)的趨勢(shì)，該反應(yīng)的變化規(guī)律為在一定時(shí)間內(nèi)反應(yīng)的趨勢(shì)為直線或接近于直線。 設(shè)定參數(shù)時(shí)選擇在直線上的兩個(gè)點(diǎn)作為檢測(cè)點(diǎn)。,速率法的吸光度計(jì)算,速率法吸光度計(jì)算： 如讀點(diǎn)為21-26 ; 用最小二乘法，得到測(cè)光點(diǎn)21-26間每分鐘吸光度的變化量。 兩點(diǎn)速率法吸光度計(jì)算: 如讀點(diǎn)為21-26 ; T 為：(26-21) 點(diǎn)間隔的時(shí)間 (A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T,定標(biāo)方法,對(duì)于終點(diǎn)法和兩點(diǎn)速率法，必須通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)液，建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。 速率法檢測(cè)的酶類可以采用理論因數(shù)法（K因數(shù)或Factor法），不過(guò)目前，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室對(duì)酶類（速率法）測(cè)試亦采

6、用標(biāo)準(zhǔn)液校正Factor的方式，以消除儀器和試劑的系統(tǒng)誤差。,定標(biāo)方法2點(diǎn)定標(biāo),兩點(diǎn)定標(biāo)：以水作為零點(diǎn)，標(biāo)準(zhǔn)液作為另一點(diǎn)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。此方法適用于濃度隨吸光度變化呈線性變化的試劑。曲線的方程為：Y=AX 對(duì)于一些特殊試劑如：K，Na，CL，因水中痕量離子濃度的存在或者線性范圍限制，一般不以水作為零點(diǎn)，而采用定值的高、低兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。曲線的方程為：Y=AX+B。,2點(diǎn)定標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,2點(diǎn)定標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,定標(biāo)方法多點(diǎn)定標(biāo),多點(diǎn)定標(biāo)：采用兩個(gè)以上的標(biāo)準(zhǔn)液來(lái)建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。該曲線的特征一般為非線性，即吸光度與濃度的變化不是直線關(guān)系。計(jì)算方式在自動(dòng)生化儀上可選擇為：SPLINE或LOGIT-LOG法。 對(duì)于一些通過(guò)（膠乳增強(qiáng)）免疫比濁法測(cè)定的試劑，多為此方法。因?yàn)榭乖贵w反應(yīng)形成的濁度的線性范圍較窄。,多點(diǎn)定標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,多點(diǎn)定標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,多點(diǎn)定標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,自動(dòng)生化分析儀的操作控制系統(tǒng),儀器操作和控制軟件的功能： （1）設(shè)置系統(tǒng)參數(shù) （2）設(shè)置項(xiàng)目參數(shù) （3）設(shè)置試劑參數(shù) （4）設(shè)置校準(zhǔn)品和質(zhì)控品參數(shù) （5）實(shí)施校準(zhǔn)和質(zhì)控測(cè)試 （6）進(jìn)行樣品測(cè)試 （7）結(jié)果查詢 （8）反應(yīng)全程監(jiān)控 （9）執(zhí)行維護(hù),自動(dòng)生化分析儀的上機(jī)參數(shù),生化分析儀的參數(shù)就是儀器工作的指令，操作者通過(guò)設(shè)置正確的參數(shù)控