1、最新資料推薦免疫組化的標準化和質(zhì)量控制免疫組化是一項綜合性的操作技術(shù)，是病理診斷的主要輔助手段之一，其影響因素復(fù)雜，包括技術(shù)人員是否熟練掌握整個實驗的操作程序，抗體的特異性， 檢測方法的敏感性，組織的固定，抗原的修復(fù)及修復(fù)液的PH 值等眾多因素。步驟較多，且環(huán)環(huán)相扣，加強質(zhì)量管理和可信性尤為重要?，F(xiàn)就我科近年來免疫組化染色和具體操作過程中進行精細而有效的全程質(zhì)控，具體操作規(guī)程和質(zhì)控事項綜述如下：一、標本的固定：標本的及時固定是最重要的環(huán)節(jié)，也是不可逆的，我科要求手術(shù)室設(shè)立專人專管制度，普通標本離體后要求手術(shù)室及時固定，特殊標本離體后及時送我科當天由取材醫(yī)師及時剖開固定，淋巴結(jié)切開固定，乳腺標本

2、每隔一厘米切開固定，胃腸標本剖開固定，首選 10% 的中性緩沖福爾馬林固定液固定，由于中性緩沖福爾馬林液滲透力強，組織收縮小，能夠使大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，提高免疫組織化學檢測的陽性率。固定液的量一般為組織塊體積的5-10 倍，小標本固定時間為4-6 小時，大標本固定時間為18-24 小時，固定后水洗10-20 分，利用蠟塊內(nèi)抗原的長期保存。二、脫水：我科在脫水程序中設(shè)置一個后固定步驟，彌1最新資料推薦補病理標本取材時固定不良造成的組織形態(tài)缺陷和抗原定位不良現(xiàn)象。同時建立以處理組織標本塊數(shù)2000 塊為標準的組織脫水試劑規(guī)范化更換制度，保證脫水質(zhì)量是保證組織切片質(zhì)量的前題，這一點對免疫組化染色

3、尤為重要。三、切片、烤片、脫蠟：切片厚度3-4 個微米之間，淋巴結(jié)更薄些，切片完整，厚薄均勻，無皺褶和刀痕，烤片溫度 60 攝氏度溫箱烤片1-2 小時，暫不染色的切片放置4 攝氏度的冰箱，短時間保存，脫蠟必須干凈。四、選擇優(yōu)質(zhì)的抗體及檢測系統(tǒng)是優(yōu)秀染片質(zhì)量的保證，我科每月的組化切片為500 左右，一直是手工操作，嚴格的操作規(guī)程非常重要，每一步細化到人，我科一直沿用中杉金橋的工作液試劑盒，效果穩(wěn)定，參加多次省質(zhì)控及全國質(zhì)控都獲得合格證書。五、抗原修復(fù)：我科一直采用高壓修復(fù)，用大功率加熱至沸騰后，將功率調(diào)至中檔，再放入切片，加蓋，加減壓閥繼續(xù)加熱至冒氣并維持 2 分鐘后，撤火緩慢冷卻。高壓修復(fù)具有

4、壓力穩(wěn)定、受熱均勻，背景著色淺的優(yōu)點。對于核染色陽性的抗原用PH9.0 的 EDTA 修復(fù)液效果好，胞質(zhì)、胞膜染色陽性的，用PH8.0 的 EDTA 抗原修復(fù)液效果好。六、 DAB 顯色的穩(wěn)定性：我科用中杉金橋的DAB 顯色試劑盒穩(wěn)定，顯色效果好。在顯色時，一般陽性部分廣泛或陽性定位在胞質(zhì)的組織顯色非常迅速，1-3 分鐘即可見明顯2最新資料推薦棕色，應(yīng)及時終止顯色。 陽性部分稀少且定位在胞核的組織，需顯微鏡下觀察，時間不宜過長，以免造成背景染色。七、復(fù)染：為了襯托免疫組化的陽性染色，蘇木素顏色不宜太深， 1-2 分鐘，同時操作中使用了粘附載玻片，建議復(fù)染的蘇木素因勤于過濾，減少人為背景染色。八、在整個染色過程中切片始終保持濕潤，不能干片，滴加一抗時應(yīng)將切片上的水甩干，以免抗體被稀釋，滴加抗體時確保覆蓋全部組織，以免邊緣未覆蓋到抗體引起邊緣效應(yīng)，同時孵育盒要放平，以免抗體流至組織一端，造成假陰性或局部弱陽性結(jié)果。綜上所述，質(zhì)控工作總是發(fā)生在實驗檢測前才能生效，如標本制作前的固定及制作中的質(zhì)控流程和切片質(zhì)量對免疫組化的染色效果都是相互影響、相互依存的。在免疫組化操作過程中，有許多至關(guān)重要的步驟都是一環(huán)扣一環(huán)，每走一步都要進行有效監(jiān)控，才能做出高質(zhì)量的切片。因此，要求操作人員有高度的責任心，嚴格遵循操作規(guī)范，為病理診斷提供表達