1、1,除菌過濾驗(yàn)證頗爾生命科學(xué)中國(guó)技術(shù)研究中心,2,除菌過濾及驗(yàn)證發(fā)展簡(jiǎn)史,1983 ASTM issues（美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法組織）發(fā)布微生物挑戰(zhàn)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法 1987 FDA發(fā)行無菌工藝指南，提出除菌過濾 1994 FDA 發(fā)行指南文件 3 “凡過濾工藝，包括預(yù)過濾器、除菌過濾器等，需進(jìn)行描述。” “必須提交驗(yàn)證報(bào)告，包含過濾器細(xì)菌挑戰(zhàn)數(shù)據(jù)、化學(xué)兼容性數(shù)據(jù)” “產(chǎn)品過濾分裝點(diǎn)的過濾器對(duì)產(chǎn)品的影響，需進(jìn)行描述 (例如, 吸附活性組分、釋放溶出物等).”,1. ASTM, “Standard Test Method for Determining Bacterial Retention of Me

2、mbrane Filters Utilized for Liquid Filtration” Standard No. F838-83 (1983, No. F838-05, rev. 2005) 2. FDA Guideline on Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing, 1987 3. FDA Guidance for Industry for the Submission Documentation for Sterilization Process Validation in Applications for Hum

3、an and Veterinary Drug Products, 1994,3,除菌過濾及驗(yàn)證發(fā)展簡(jiǎn)史,1995 FDA 人用藥物 CGMP 通告 4 “除菌過濾工藝需要特別嚴(yán)格的驗(yàn)證。” “確保在最惡劣狀態(tài)下，工藝參數(shù)得到充分研究、評(píng)估、記錄?！?“在藥物開發(fā)階段到上市藥物的生產(chǎn)階段，除菌過濾工藝的這些相關(guān)數(shù)據(jù)都必須提供?！?4、FDA Human Drug CGMP Notes, Dec. 1995,4,除菌過濾及驗(yàn)證發(fā)展簡(jiǎn)史,1998 PDA 發(fā)行除菌過濾驗(yàn)證技術(shù)報(bào)告（ Technical Report No. 26） 5 1998-2003 FDA 內(nèi)部稿, 2002 議案, 2003

4、 指南草稿 2004 FDA 發(fā)行無菌工藝指南修正版6,5、PDA Technical Report No. 26, “Sterilizing Filtration of Liquids,” PDA Journal of Pharmaceutical Science and Technology, v.52, no. S1 (supplement), March, 1998 6、FDA Guidance for Industry - Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing Current Good Manufacturing P

5、ractice (Section IX. Validation of Aseptic Processing and Sterilization), 2004,5,除菌級(jí)過濾器定義,1987 無菌工藝指南7 “通過107/cm2 缺陷假單胞菌（ P. diminuta ）挑戰(zhàn)的過濾器 ” 2004 無菌工藝指南8 “適當(dāng)驗(yàn)證的過濾器，能從流體中濾除全部微生物”,7、FDA Guideline on Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing, 1987 8、FDA Guidance for Industry - Sterile Dru

6、g Products Produced by Aseptic Processing Current Good Manufacturing Practice, 2004,6,附錄1 無菌藥品 第六十二條 可采用濕熱、干熱、離子輻射、環(huán)氧乙烷或過濾除菌的方式進(jìn)行滅菌。每一種滅菌方式都有其特定的適用范圍，滅菌工藝必須與注冊(cè)批準(zhǔn)的要求相一致，且應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證。 第六十三條 任何滅菌工藝在投入使用前，必須采用物理檢測(cè)手段和生物指示劑，驗(yàn)證其對(duì)產(chǎn)品或物品的適用性及所有部位達(dá)到了滅菌效果。,新版GMP,7,附錄1 無菌藥品 第四十一條 過濾器應(yīng)當(dāng)盡可能不脫落纖維。嚴(yán)禁使用含石棉的過濾器。過濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生

7、反應(yīng)、釋放物質(zhì)或吸附作用而對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。 第七十五條 非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應(yīng)當(dāng)符合以下要求： （四）過濾除菌工藝應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，驗(yàn)證中應(yīng)當(dāng)確定過濾一定量藥液所需時(shí)間及過濾器二側(cè)的壓力。任何明顯偏離正常時(shí)間或壓力的情況應(yīng)當(dāng)有記錄并進(jìn)行調(diào)查，調(diào)查結(jié)果應(yīng)當(dāng)歸入批記錄。 （五）同一規(guī)格和型號(hào)的除菌過濾器使用時(shí)限應(yīng)當(dāng)經(jīng)過驗(yàn)證，一般不得超過一個(gè)工作日。,新版GMP,8,過程驗(yàn)證的基本原則指南, 1987,“驗(yàn)證: 建立有文件支持的證據(jù)，能高度確保某個(gè)特定的過程將持續(xù)地生產(chǎn)出符合預(yù)先確定的規(guī)格和質(zhì)量要求的產(chǎn)品。”,9,過濾器驗(yàn)證三階段,核心驗(yàn)證 持續(xù)驗(yàn)證 工藝特定驗(yàn)證,10,核心驗(yàn)證：PALL過

8、濾器驗(yàn)證指南,由PALL公司進(jìn)行驗(yàn)證并提供數(shù)據(jù) 標(biāo)準(zhǔn)條件(ASTM F838-05)下細(xì)菌挑戰(zhàn)數(shù)據(jù) 符合1987年FDA 無菌工藝指南“除菌級(jí)”定義 參考潤(rùn)濕流體（水或醇）前進(jìn)流完整性數(shù)據(jù)和細(xì)菌挑戰(zhàn)結(jié)果關(guān)聯(lián) 標(biāo)準(zhǔn)溶媒（常為水或醇）中濾芯溶出物數(shù)據(jù) 生物安全性數(shù)據(jù)（美國(guó)藥典）,11,完整性 (100%) 100前進(jìn)流檢測(cè) 與相應(yīng)的細(xì)菌截留數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián) 細(xì)菌挑戰(zhàn)試驗(yàn) (批次抽樣) 蒸氣高壓滅菌 (批次抽樣),持續(xù)驗(yàn)證：除菌級(jí)過濾器上市標(biāo)準(zhǔn),12,流出物沖洗 (抽樣) 內(nèi)毒素(熱原), 清潔度, pH, TOC, 電導(dǎo)率 依據(jù)USP標(biāo)準(zhǔn) 材料驗(yàn)證 生物安全 依據(jù)USP Biol. Toxicity,

9、in vivo,(體內(nèi)的生物毒性 ）Class VI（第六級(jí)）-121C 可控的、清潔的裝配環(huán)境 高壓純水沖洗,持續(xù)驗(yàn)證：除菌級(jí)過濾器上市標(biāo)準(zhǔn),13,P級(jí)證書,14,條件通常與核心驗(yàn)證時(shí)不同,流體差異 工藝差異,工藝特定驗(yàn)證,現(xiàn)正被法規(guī)監(jiān)管所強(qiáng)調(diào),15,除菌過濾器的驗(yàn)證,Drug/Biologics Master File (DMF/BMF) at FDA,生物相容性 USP 生物反應(yīng)性,生物安全性基礎(chǔ)研究,16,有效性驗(yàn)證方案設(shè)計(jì),“無需在實(shí)際生產(chǎn)區(qū)域進(jìn)行過濾器有效性驗(yàn)證試驗(yàn)（包括微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)）。 然而，實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)必須模擬實(shí)際的生產(chǎn)條件。 過濾器有效性驗(yàn)證試驗(yàn)較為復(fù)雜，過濾器用戶無力承擔(dān)

10、時(shí)，常常由外部實(shí)驗(yàn)室或過濾器制造商進(jìn)行試驗(yàn)。 “然而, 對(duì)于有效性驗(yàn)證數(shù)據(jù)（關(guān)于過濾器生成無菌濾出物的功效）的復(fù)核，過濾器用戶負(fù)有責(zé)任。,17,參數(shù)驗(yàn)證目標(biāo),檢測(cè)流體對(duì)過濾器、 B. diminuta 假單胞菌以及對(duì)微生物特性潛在的影響 細(xì)菌存活性和截留性檢測(cè) 化學(xué)兼容性檢測(cè) 檢測(cè)過濾器對(duì)產(chǎn)品組分的影響 溶出物析出物檢測(cè) 組分吸附檢測(cè) 產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性檢測(cè)數(shù)據(jù),18,考慮的關(guān)鍵因素:,pH 表面張力 粘度 等滲溶摩 離子強(qiáng)度,產(chǎn)品,溫度 壓力 時(shí)間 濾出體積 流速,工藝,在產(chǎn)品料液中的存活性,細(xì)菌,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：細(xì)菌存活性與細(xì)菌挑戰(zhàn),19,細(xì)菌挑戰(zhàn)實(shí)驗(yàn),料液類型,料液中接種細(xì)菌挑戰(zhàn),料液循環(huán)過濾工藝

11、時(shí)間 清洗過濾器 用接種細(xì)菌的替代溶液挑戰(zhàn),料液循環(huán)過濾工藝時(shí)間 清洗過濾器 用接種細(xì)菌的料液挑戰(zhàn),非殺菌,中度殺菌,殺菌,20,細(xì)菌挑戰(zhàn)試驗(yàn)典型實(shí)驗(yàn)裝置,21,除菌級(jí)過濾器細(xì)菌攔截實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn),Brevundimonas diminuta (ATCC 19146)缺陷假單胞菌，或其它代表“最惡劣”狀況的微生物種群 嚴(yán)格控制的培養(yǎng)條件 (美國(guó)實(shí)驗(yàn)材料協(xié)會(huì)ASTM F838-05規(guī)范) 合適微生物尺寸 (B. diminuta 0.3 x 0.8 m) 微生物個(gè)體獨(dú)立分散 證明可穿透0.45 m 對(duì)照過濾器 模擬“最惡劣”工藝條件 挑戰(zhàn)量 1 x 107 cfu/cm2 對(duì)濾液進(jìn)行全流體無菌檢測(cè),

12、22,“當(dāng)考慮化學(xué)兼容性時(shí)，重要的是應(yīng)包含過濾器的全部組成.” “完整性檢測(cè)是和細(xì)菌挑戰(zhàn)試驗(yàn)關(guān)聯(lián)的物理測(cè)試方法，是一種兼容性測(cè)試的方法”,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：化學(xué)兼容性,PDA TR26 Sterilizing Filtration of Liquids, 2008,23,化學(xué)兼容性檢測(cè),確認(rèn)過濾器與客戶工藝流體化學(xué)兼容性 過濾器與工藝流體在設(shè)定條件下接觸特定時(shí)間 通過接觸前、后過濾器完整性檢測(cè)結(jié)果判斷 外觀檢查 全濾芯挑戰(zhàn)，僅用膜片測(cè)試是不夠的 水流量、稱重等方法不適合，因其制定接受標(biāo)準(zhǔn)困難 同材質(zhì)和結(jié)構(gòu)的濾芯可以不考慮面積大小,24,“他們 （制藥商）必須有數(shù)據(jù)顯示溶出物的種類、數(shù)量和毒性”,驗(yàn)證實(shí)

13、驗(yàn)：溶出物檢測(cè),Motisse (FDA) Human Drug CGMP Notes, 1994,25,溶出物的來源: 硬件、支撐層、濾膜、潤(rùn)濕劑、添加劑等。 對(duì)過濾器溶出物進(jìn)行定量、定性分析 不揮發(fā)物殘留 (NVR)定量檢測(cè) 紫外可見光譜UV-Vis 、紅外光譜FTIR 、氣質(zhì)聯(lián)用GC/MS等方法定性檢測(cè) 依據(jù)工藝流體特性選擇模型溶劑* 檢測(cè)條件反映工藝溫度和時(shí)間,* Weitzmann, C., “ The use of model solvents for evaluating extractables from filters used to process pharmaceutic

14、al products,” Pharmaceutical Technology, 21 (#4), 72-99 (1997),溶出物檢測(cè),26,吸附作用評(píng)估,PDA TR26 Sterilizing Filtration of Liquids, 2008,EU guidelines to GMP Annex 1,27,吸附作用評(píng)估,100%,濾出體積,濃度,28,驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性檢測(cè)數(shù)據(jù)生成,水潤(rùn)濕實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn) 使用前的試驗(yàn)稀釋產(chǎn)品 使用前-試驗(yàn)后水的去除驗(yàn)證 使用后-試驗(yàn)時(shí)產(chǎn)品的去除驗(yàn)證 時(shí)間,29,確定用客戶產(chǎn)品潤(rùn)濕過濾器時(shí)恰當(dāng)?shù)耐暾詤?shù) 完整性檢測(cè)方法包括： 前進(jìn)流、泡點(diǎn)、壓力衰

15、減 產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)流體潤(rùn)濕完整性數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián) 標(biāo)準(zhǔn)流體潤(rùn)濕的完整性數(shù)據(jù)與細(xì)菌挑戰(zhàn)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)（參見驗(yàn)證指南 ） 產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性數(shù)據(jù)源自實(shí)驗(yàn)檢測(cè)值，不是理論計(jì)算值,產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性檢測(cè)數(shù)據(jù),30,產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性檢測(cè)數(shù)據(jù)生成,對(duì)大多數(shù)用戶產(chǎn)品可行 使用產(chǎn)品潤(rùn)濕的數(shù)據(jù)可使生產(chǎn)簡(jiǎn)單 法規(guī)對(duì)使用參數(shù)的評(píng)價(jià)要求 法規(guī)要求滅菌后使用前的試驗(yàn) 文件和測(cè)試要求已經(jīng)變得更加復(fù)雜,31,過濾器驗(yàn)證要求小結(jié),實(shí)驗(yàn) 0.2m 0.2m 氣體 化學(xué)兼容性 Yes Yes Yes 吸附 可能 可能 No 細(xì)菌挑戰(zhàn) Yes No 可能 產(chǎn)品潤(rùn)濕IT值 可提供 No No 溶出物 Yes Yes No 常規(guī) IT Yes

16、No Yes,32,選擇最惡劣條件產(chǎn)品分類,參考“1987 Aseptic Processing Guideline”（無菌工藝指南）對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行分類 “最惡劣條件” 的調(diào)整必須科學(xué)地進(jìn)行 “是指這樣一組條件，其中包括了極端的環(huán)境、工藝極限的上限與下限 （標(biāo)準(zhǔn)操作程序之內(nèi)的相應(yīng)指標(biāo)亦涵括在內(nèi)）；在最惡劣條件下, 產(chǎn)品事故或工藝失效的發(fā)生概率升至最高 (對(duì)比理想條件)，但未必一定導(dǎo)致產(chǎn)品事故或工藝失效?！?通常，最高組分含量和最極端操作條件（最大流速、最大壓差、極端溫度等）是“最惡劣條件”的典型代表,33,最惡劣條件的選擇,34,過濾器驗(yàn)證報(bào)告內(nèi)容,細(xì)菌存活性 確定物料殺菌特性，合理的清洗方案 細(xì)

17、菌截留性 確認(rèn)最惡劣工藝條件下濾膜除菌能力 化學(xué)兼容性 確認(rèn)最惡劣工藝條件下過濾器與物料接觸后的完整性 溶出物 對(duì)過濾器在模型溶媒中溶出物進(jìn)行定性、定量測(cè)定 吸附效應(yīng) 特定產(chǎn)品的濾出液中產(chǎn)品定性、定量測(cè)定 產(chǎn)品潤(rùn)濕完整性數(shù)據(jù) 建立產(chǎn)品潤(rùn)濕的完整性檢測(cè)參數(shù),35,Pall公司的驗(yàn)證服務(wù)流程,簽訂合作協(xié)議,客戶填寫PPQ表格,Pall為客戶編寫驗(yàn)證方案,雙方完善驗(yàn)證方案,客戶向Pall送達(dá)： 1。簽署/批準(zhǔn)的驗(yàn)證方案 2。產(chǎn)品樣品/MSDS表,Pall完成驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),Pall完成驗(yàn)證報(bào)告,客戶審查接收驗(yàn)證報(bào)告,1填表格,2送物料,3收?qǐng)?bào)告,36,頗爾生命科學(xué)中國(guó)技術(shù)中心,資質(zhì) ISO9001:2000 ISO 14001: 2004 OSHAS 18001: 1999 （2008年2月， Lloyds Register Qualit