1、.,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),一、外植體的選擇：,種質(zhì)優(yōu)良,植株健壯,取材的最適時(shí)期,適宜的大小,選材,第1章 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 構(gòu)建及操作技術(shù),.,二、外植體滅菌,1：對(duì)材料進(jìn)行預(yù)處理 2：材料表面滅菌： 1）水洗,濾紙吸干; 2)70%酒精浸3060s; 3）用滅菌劑處理; 4）用無菌水沖洗.,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,表面滅菌劑的種類較多，可選取12種使用。,常用滅菌劑使用濃度及效果比較表,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,三、外植體的接種與培養(yǎng),（一）接種無菌操作 定義:把經(jīng)表面滅菌處理后植物材料，切碎或分離出器官、組織、細(xì)胞，再經(jīng)無菌操作轉(zhuǎn)接到無菌培養(yǎng)基上，這一過程叫做接種。

2、,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,(1)在接種前1-2周用甲醛熏蒸接種室； (2)接種前15-20min，打開超凈工作臺(tái)的風(fēng)機(jī)以及臺(tái)上的紫外燈； (3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實(shí)驗(yàn)服，及拖鞋等； (4)上工作臺(tái)后，用酒精棉球擦拭雙手。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺(tái)面； (5)先用酒精棉球擦拭接種工具，再將鑷子和剪子蘸95%酒精在酒精燈火焰上灼燒，放置冷卻。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),接種前的準(zhǔn)備工作：,.,(1)對(duì)接種材料進(jìn)行消毒； (2)先解開包口紙，將試管等拿成斜角，使試管口在酒精火焰上方轉(zhuǎn)動(dòng)，灼燒數(shù)秒鐘； (3)用灼燒過的鑷子夾取外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入或放在培養(yǎng)基表

3、面； (4)接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘； (5)接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話、走動(dòng)和咳嗽等； (6)接種工具隨時(shí)蘸95%酒精灼燒，避免交叉污染； (7)接種完畢后要清理干凈并用70%酒精擦工作臺(tái)。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),接種時(shí)的無菌操作技術(shù)：,.,（二） 外植體培養(yǎng),外植體培養(yǎng)：指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室里，使之生長(zhǎng)，分裂和分化形成愈傷組織或進(jìn)一步分化成再生植株的過程。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,培養(yǎng)的環(huán)境條件:,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,定義：培養(yǎng)物在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)一段時(shí)間以后，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)枯竭，水分散失，以及代謝產(chǎn)物的積累，必須轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng),這

4、個(gè)過程叫做繼代培養(yǎng)。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,四、外植體成苗途徑,1、外植體愈傷組織根、芽試管苗 同時(shí)長(zhǎng)芽和根 先長(zhǎng)芽，再長(zhǎng)根 先長(zhǎng)根，再長(zhǎng)芽 2、外植體胚狀體試管苗（胚狀體途徑） 3、外植體根、芽試管苗（器官發(fā)生途徑）,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,外植體,愈傷組織,胚狀體,芽、根,根、芽,芽,芽,根,根,試管苗,外植體成苗途徑：,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),B,A,C,.,(1)、直接從器官上發(fā)生(2)、從愈傷組織發(fā)生(3)、從游離的單細(xì)胞發(fā)生(4)、從小孢子發(fā)生,(1)數(shù)量多 (2)速度快 (3)結(jié)構(gòu)完整,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),胚狀體的產(chǎn)生途徑：,誘導(dǎo)胚狀體比誘導(dǎo)芽的優(yōu)點(diǎn)

5、：,.,五、培養(yǎng)過程中常出現(xiàn)的問題 及解決方法,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),污染,褐變,玻璃化現(xiàn)象,組織培養(yǎng)三大難題,.,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),1、污染原因 細(xì)菌污染 真菌污染,（一）污染,真菌污染,.,2、污染的預(yù)防措施,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),(1)減少或防止材料帶菌(2)外植體滅菌要徹底(3)玻璃器皿和金屬器皿的滅菌(4)布質(zhì)制品的滅菌(5)無菌室的消毒(6)操作人員一定要嚴(yán)格按照無菌操作的程序進(jìn)行接種。,.,1、定義： 是指外植體在培養(yǎng)中體內(nèi)的多酚氧化酶被激活，使細(xì)胞里的酚類物質(zhì)氧化成棕褐色的醌類物質(zhì)，有時(shí)使整個(gè)培養(yǎng)基變褐，從而抑制其他酶的活性，影響材料的培養(yǎng)。,第三節(jié) 外植

6、體的選擇與培養(yǎng),（二）、外植體的褐變,.,植物品種 生理狀態(tài) 培養(yǎng)基成分 培養(yǎng)條件不當(dāng),第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),2、褐變的主要原因,.,選擇合適的外植體： 合適的培養(yǎng)條件： 連續(xù)轉(zhuǎn)移 加抗氧化劑： 加活性炭,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),3、減輕褐變現(xiàn)象發(fā)生的措施,.,（三）玻璃化現(xiàn)象,1、定義：在長(zhǎng)期的離體培養(yǎng)繁殖時(shí)，有些試管苗的嫩莖、葉片呈現(xiàn)半透明水漬狀，這種現(xiàn)象稱為玻璃化。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,2、玻璃化現(xiàn)象產(chǎn)生的原因,細(xì)胞分裂素濃度較高時(shí)； 瓊脂濃度低時(shí)； 溫度低、光照時(shí)間長(zhǎng)時(shí)； 氣體交換不良時(shí)； 培養(yǎng)基中無機(jī)離子種類及比例不當(dāng)時(shí)。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),.,適當(dāng)控

7、制培養(yǎng)基中無機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分； 適當(dāng)提高培養(yǎng)基中蔗糖和瓊脂濃度； 適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長(zhǎng)素量； 增加自然光照，控制光照時(shí)間； 降低培養(yǎng)溫度，進(jìn)行變溫培養(yǎng)； 增加容器通風(fēng)，最好進(jìn)行CO2施肥。,第三節(jié) 外植體的選擇與培養(yǎng),3、預(yù)防措施：,.,第四節(jié)、試管苗馴化與移栽,第1章 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 構(gòu)建及操作技術(shù),試管苗,草莓,.,1、試管苗的生態(tài)環(huán)境： 高溫且恒溫、 高濕、 弱光、 無菌,一、試管苗的特點(diǎn),第四節(jié)、試管苗馴化與移栽,百合試管苗,.,(1)生長(zhǎng)細(xì)弱； (2)光合作用差 (3)葉片氣孔數(shù)目少，活性差 (4)根的吸收功能弱 (5)對(duì)逆境的適應(yīng)和抵抗能力差,第四節(jié)、試管苗馴化與

8、移栽,小麥試管苗,2、特點(diǎn)：(與常規(guī)苗相比）,.,二、煉苗（馴化）,馴化的目的： 通過減肥、增光、降溫、控水等措施，提高試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)性，提高光合作用的能力，提高試管苗的移栽成活率。,第四節(jié)、試管苗馴化與移栽,.,三、試管苗的移栽,1、直接移栽法 2、常規(guī)移栽法 3、嫁接移栽法,第四節(jié)、試管苗馴化與移栽,（一）移栽方法：,.,四、提高試管苗移栽成活率的途徑,1、試管苗的生理狀況：移栽壯苗 2、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)：適當(dāng)加入生長(zhǎng)素，去除細(xì)胞分裂素，有利生根，提高成活率 3、無機(jī)鹽濃度：適當(dāng)降低 4、加入少許活性炭 5、控制好移栽前10天的光、溫、濕環(huán)境因子 6、使試管苗從無菌向有菌逐漸過

9、渡,第四節(jié)、試管苗馴化與移栽,.,本章小結(jié)：,(1) 常用的培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基；B5培養(yǎng)基；White培養(yǎng)基；N6培養(yǎng)基；KM-8P培養(yǎng)基。 (2) 水、無機(jī)鹽、有機(jī)物質(zhì)、天然復(fù)合物、凝固劑是構(gòu)成培養(yǎng)基的五種主要成分。 (3) 配制母液。即先配成大量元素10倍液；微量元素100倍液；鐵鹽100倍液；有機(jī)物100倍液。 (4) 培養(yǎng)基配置、分裝、高壓滅菌 (5) 篩選培養(yǎng)基方法，即單因子試驗(yàn)法、多因子試驗(yàn)法、廣譜實(shí)驗(yàn)法。,第1章 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室 構(gòu)建及操作技術(shù),.,本章小結(jié)：,(6) 植物培養(yǎng)技術(shù)：滅菌、接種、培養(yǎng)和馴化四個(gè)環(huán)節(jié)。 (7) 滅菌與消毒的方法。 (8) 接種程序：植物材料表面的消毒；切割外植