1、.第十四、二十一章 基因工程、分子生物學(xué)常用技術(shù)段里原理及其應(yīng)用復(fù)習(xí)測試（一）名詞解釋1dna重組 2基因工程 3限制性核酸內(nèi)切酶 4基因組dna文庫 5cdna文庫 6聚合酶鏈反應(yīng)（pcr） 7載體 8轉(zhuǎn)化 9感染 10核酸分子雜交 11southern印跡雜交 12northern印跡雜交 13斑點印跡 14原位雜交 15dna芯片 16基因診斷 17基因治療（二）選擇題a型題：精品.1 限制性核酸內(nèi)切酶作用特點不包括： a在對稱序列處切開dnabdna兩鏈的切點常不在同一位點c酶切后產(chǎn)生的dna片段多半具有粘性互補末端ddna兩鏈的切點常在同一位點e酶辨認的堿基一般為46個2限制性核酸內(nèi)

2、切酶： a可將單鏈dna任意切斷b可將雙鏈dna序列特異切開c可將兩個dna分子連接起來d不受dna甲基化影響e由噬菌體提取而得3cdna文庫包括該種生物的： a某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因b所有基因組c結(jié)構(gòu)基因與不表達的調(diào)控區(qū)d內(nèi)含子和調(diào)節(jié)區(qū)e內(nèi)含子和外顯子4下列關(guān)于建立cdna文庫的敘述哪項是錯誤的： a從特定組織或細胞中提取mrnab將特定細胞的dna用限制性核酸內(nèi)切酶切割后，克隆到噬菌體或質(zhì)粒中精品.c用逆轉(zhuǎn)錄酶合成mrna的對應(yīng)單股dnad用dna聚合酶，以單股dna為模板合成雙鏈dnae加s-腺苷甲硫氨酸（sam），以使新生的dna雙鏈甲基化5限制性核酸內(nèi)切酶的通常識別序列是： a粘性末端

3、brna聚合酶附著點c回文對稱序列d聚腺苷酸e甲基化“帽”結(jié)構(gòu)6puc系列是指：a經(jīng)人工改造的大腸桿菌質(zhì)粒b天然的大腸桿菌質(zhì)粒c天然的酵母質(zhì)粒d經(jīng)人工改造的大腸桿菌噬菌體e經(jīng)人工改造的酵母質(zhì)粒7用于轉(zhuǎn)染哺乳類細胞的常用載體是： a質(zhì)粒b噬菌體c逆轉(zhuǎn)錄病毒rnad結(jié)構(gòu)基因e乳糖操縱子精品.8轉(zhuǎn)化常指： a噬菌體感染b基因的轉(zhuǎn)位c攝取外來dna，引起細胞生物學(xué)類型的改變d產(chǎn)生點突變e產(chǎn)生移碼突變9基因工程的操作程序可簡單地概括為： a載體和目的基因的分離、提純與鑒定b分、切、接、轉(zhuǎn)、篩c將重組體導(dǎo)入宿主細胞，篩選出含目的基因的菌株d將載體和目的基因接合成重組體e限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用10用于基因治

4、療較為理想的載體是： a質(zhì)粒b噬菌體c經(jīng)改造的逆轉(zhuǎn)錄病毒d人類dnae酵母質(zhì)粒11常用質(zhì)粒有以下特性： a是線形雙鏈dna精品.b插入片段的容量比噬菌體dna大c含有抗生素抗性基因d含有同一限制性核酸內(nèi)切酶的多個切口e不隨細菌繁殖而進行自我復(fù)制12在重組體中切出插入片段最常用的方法是： a以重組時所用限制性核酸內(nèi)切酶將其切出b用其它限制性酶將其切出c用s1核酸酶將其切出d用dna酶將切出e用多種限制性內(nèi)切酶將其切出 13利用pcr擴增特異dna序列主要原理之一是： a反應(yīng)體系內(nèi)存在特異dna片段 b反應(yīng)體系內(nèi)存在特異rna片段 c反應(yīng)體系內(nèi)存在特異dna引物 d反應(yīng)體系內(nèi)存在特異rna引物 e

5、反應(yīng)體系內(nèi)存在的taqdna聚合酶具有識別特異dna序列的作用 14表達人類蛋白質(zhì)的最理想的細胞體系是： a大腸桿菌表達體系 b原核表達體系 c酵母表達體系 d昆蟲表達體系精品. e哺乳類細胞表達體系 15限制性核酸內(nèi)切酶切割dna后產(chǎn)生： a3-磷酸基末端和5-羥基末端 b5-磷酸基末端和3-羥基末端 c3-磷酸基末端和5-磷酸基末端 d5-羥基末端和3-羥基末端 e3-羥基末端和5-羥基末端及磷酸 16下列描述最能確切表達質(zhì)粒dna作為克隆載體特性的是： a小型環(huán)狀雙鏈dna分子 b攜帶有某些抗生素抗性基因 c在細胞分裂時恒定地傳給子代細胞 d具有自我復(fù)制功能 e獲得目的基因17在分子生物

6、學(xué)領(lǐng)域分子克隆主要是指： adna的大量復(fù)制 bdna的大量轉(zhuǎn)錄 cdna的大量剪切 drna的大量剪切 erna的大量反轉(zhuǎn)錄 18在分子生物學(xué)領(lǐng)域重組dna技術(shù)又稱： 精品. a酶工程 b蛋白質(zhì)工程 c細胞工程 d發(fā)酵工程 e分子克隆技術(shù) 19在重組dna技術(shù)中不涉及的酶是： a限制性核酸內(nèi)切酶 bdna聚合酶 cdna連接酶 d反轉(zhuǎn)錄酶 edna解鏈酶 20多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶切割后的dna末端為： a平端末端 b3突出末端 c5突出末端 d粘性末端 e缺口末端 21可識別dna的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈dna的一類酶為： a限制性核酸外切酶 b限制性核酸內(nèi)切酶 c非限制性核

7、酸外切酶精品. d非限制性核酸內(nèi)切酶 edna內(nèi)切酶 22cdna是指： a在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與rna互補的dna b在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與dna互補的dna c在體外經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成的與dna互補的rna d在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與rna互補的rna e在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與dna互補的rna 23基因組代表一個細胞或生物體的： a部分遺傳信息 b整套遺傳信息 c可轉(zhuǎn)錄基因 d非轉(zhuǎn)錄基因 e可表達基因 24在基因工程中通常所用的質(zhì)粒存在于： a細菌染色體 b酵母染色體 c細菌染色體外 d酵母染色體外 e病毒dna外 精品.25就分子結(jié)構(gòu)而論質(zhì)粒是： a環(huán)狀雙鏈dna分子 b環(huán)狀單鏈dna分子 c環(huán)

8、狀雙鏈rna分子 d線狀雙鏈dna分子 e線狀單鏈dna分子 26聚合酶鏈式反應(yīng)可表示為： apec bper cpdr dbcr epcr 27在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是： a化學(xué)合成法 b基因組文庫法 ccdna文庫法 dpcr e差異顯示法 28重組dna的基本構(gòu)建過程是將： a任意兩段dna接在一起 b外源dna接入人體dna精品. c外源基因插入宿主基因 d目的基因接入適當(dāng)載體 e目的基因接入哺乳類dna 29ecor切割dna雙鏈產(chǎn)生： a平端 b5突出粘端 c3突出粘端 d鈍性末端 e配伍末端 30催化pcr的酶是： adna連接酶 b反轉(zhuǎn)錄酶 c末端轉(zhuǎn)移

9、酶 d堿性磷酸酶 etaqdna聚合酶 31將pst內(nèi)切酶切割后的目的基因與用相同內(nèi)切酶切割后的載體dna連接屬： a同聚物加尾連接 b人工接頭連接 c平端連接 d粘性末端連接 e非粘性末端連接精品. 32重組dna技術(shù)中實現(xiàn)目的基因與載體dna拼接的酶是： adna聚合酶 brna聚合酶 cdna連接酶 drna連接酶 e限制性核酸內(nèi)切酶 33以質(zhì)粒為載體，將外源基因?qū)胧荏w菌的過程稱： a轉(zhuǎn)化 b轉(zhuǎn)染 c感染 d轉(zhuǎn)導(dǎo) e轉(zhuǎn)位 34最常用的篩選轉(zhuǎn)化細菌是否含重組質(zhì)粒的方法是： a營養(yǎng)互補篩選 b抗藥性篩選 c免疫化學(xué)篩選 dpcr篩選 e分子雜交篩選 35互補篩選法屬于： a抗藥性標(biāo)志篩選精

10、品. b酶聯(lián)免疫篩選 c標(biāo)志補救篩選 d原位雜交篩選 e免疫化學(xué)篩選 36下列常用于原核表達體系的是： a酵母細胞 b昆蟲細胞 c哺乳類細胞 d真菌 e大腸桿菌 37在對目的基因和載體dna進行同聚物加尾時，需采用： a反轉(zhuǎn)錄酶 b多聚核苷酸激酶 c引物酶 drna聚合酶 e末端轉(zhuǎn)移酶 38在分子生物學(xué)領(lǐng)域分子克隆專指： a細胞克隆 brna克隆 cdna克隆 d抗體克隆精品. emrna克隆 39用于重組dna 的限制性核酸內(nèi)切酶，識別核苷酸序列的： a正超螺旋結(jié)構(gòu) b負超螺旋結(jié)構(gòu) c螺旋結(jié)構(gòu) d回文結(jié)構(gòu) e鋅指結(jié)構(gòu) 40在基因工程中通常所用的質(zhì)粒是： a細菌染色體dna b細菌染色體以外的

11、dna c病毒染色體dna d病毒染色體以外dna e噬菌體dna 41構(gòu)建基因組dna文庫時，首先需要分離細胞的： a染色體dna b線粒體dna c總mrna dtrna errna 42dna連接酶是從t4 噬菌體感染大腸桿菌中分離的，這種連接酶：精品. a只能催化平末端連接，而不能催化粘性末端連接 b即能催化單鏈dna連接又能催化粘性末端雙鏈dna連接 c雙鏈dna中不需一條完整的單鏈 d單鏈中的切口位點可缺少幾個核苷酸e切口存在相鄰的5-磷酸和3-羥基末端，使其以磷酸二酯鍵連接 43末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類： a作用時不需模板 b是從小牛胸腺中分離 c能催化單鏈核苷酸轉(zhuǎn)移到5-磷酸上 d

12、需要帶有5-端磷酸的末端的ssdna e需要有延伸5-端磷酸的末端dsdna 44在基因工程中可用堿性磷酸酶： a防止dna的自身環(huán)化 b同多核苷酸激酶一起進行dna3-羥基末端標(biāo)記 c制備突出的3-末端 d特異切除dna或rna的3-末端羥基 e水解特異的核苷酸片段 45以下哪種酶作用時需要引物： a限制性核酸內(nèi)切酶 b末端轉(zhuǎn)移酶 c反轉(zhuǎn)錄酶精品. ddna連接酶 e堿性磷酸酶 46s1核酸酶的功能是： a切割雙鏈的dna b切割單鏈的rna c切割發(fā)夾環(huán) d切割單鏈dna e以上有兩項是正確的 47在cdna技術(shù)中所形成的發(fā)夾環(huán)可用： a限制性核酸內(nèi)切酶切除 b用3外切酶切除 c用s1核酸

13、酶切除 d用5外切酶切除 e堿性磷酸酶切除 48下面有關(guān)限制性內(nèi)切酶的敘述正確的是： a限制酶是外切酶而不是內(nèi)切酶 b限制酶在特異序列（識別位點）對dna進行切割 c同一種限制酶切割dna時留下的末端序列總是相同的 d一些限制酶在識別位點稍有不同的點切割雙鏈dna，產(chǎn)生粘性末端 e一些限制酶在識別位點相同的位置切割雙鏈dna，產(chǎn)生平末端 精品.49限制性核酸內(nèi)切酶可以特異識別： a雙鏈dna的特定堿基對 b雙鏈dna的特定堿基序列 c特定的三聯(lián)碼 d雙鏈rna的特定堿基序列 e雙鏈rna的特定堿基對 50dna聚合酶的主要用途： a利用它的35聚合活性，合成ds-dna第二條鏈 b對dna的5

14、-端進行填補或末端標(biāo)記 c大腸桿菌dna聚合酶用于缺口平移，制作dna標(biāo)志探針 ddna聚合酶可用于dna測序 etaqdna聚合酶用于pcr 51反轉(zhuǎn)錄酶： a是依賴于dna的rna聚合酶 b用于真核dna反轉(zhuǎn)錄生成mrnac用于rna探針的制備 d用于rna序列測定 e是依賴于rna的dna聚合酶 52基因工程中作為載體應(yīng)具備以下特點： a能在宿主細胞中復(fù)制繁殖 b容易進入宿主細胞精品. c具有多克隆位點 d容易從宿主細胞中分離出來 e以上均是 53下列哪種克隆載體對外源dna的容載量最大： a質(zhì)粒 b粘粒 c酵母人工染色體 d噬菌體 ecdna表達載體 54puc是一種改造型質(zhì)粒，含有：

15、 a乳糖操縱子調(diào)節(jié)基因、啟動子 b多克隆位點 clacz基因 d氨芐青霉素抗性基因 e以上均有 55質(zhì)粒具有以下特點： a是位于細菌染色體外的rna b不能自主復(fù)制 c為單鏈環(huán)形dna d大小在2300kb之間 e以上都不對精品. 56粘粒是一種人工建造的載體不具有以下特點： a可借cos位點將多個粘粒串聯(lián)成大環(huán) b本身約46kb之間 c進入受體細胞后可進行復(fù)制 d可克隆dna大片段 e以上都不是 57下面關(guān)于多克隆位點的描述不正確的是： a僅位于質(zhì)粒載體中 b具有多種限制性內(nèi)切酶識別的位點 c不同酶的識別序列可以重疊 d一般是人工合成后添加到載體中 e可位于不同載體中 58下列篩選重組體的方

16、法中不屬于遺傳學(xué)方法的是： a限制性內(nèi)切酶圖譜法 bpcr cnorthern印跡法 dsouthern印跡法 e抗藥性標(biāo)記基因 59利用基因工程可以進行： a建立染色體基因文庫精品. b分析基因的結(jié)構(gòu)與功能 c疾病的發(fā)生、發(fā)展及治療的分子機制 d疾病的診斷和基因治療 e以上均可以 60southern印跡的dna探針雜交： a只與序列完全相同的rna片段 b可與任何含有相同序列的dna片段 c可與任何含有互補序列的dna片段 d可與用某些限制性核酸內(nèi)切酶切成的dna片段 e只與含有互補序列的rna片段 61下列哪個不是southern印跡法的步驟： a用限制性核酸內(nèi)切酶消化dna bdna與

17、載體連接 c用凝膠電泳分離dna片段 ddna片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上 e用一個標(biāo)記的探針與膜雜交 62下列哪個不是northern印跡法的步驟： a從細胞和組織中提取rna b用凝膠電泳分離rna c將rna轉(zhuǎn)移到支持物上 d與核酸探針進行雜交精品. e將rna反轉(zhuǎn)錄合成dna 63原位雜交具有以下特點： a不需從組織或細胞中提取核酸 b對靶序列有很高的靈敏度 c可完整保護組織與細胞的形態(tài) d準確反映出組織細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài) e以上均是 64下列哪項不是探針的特點： a要加以標(biāo)記 b應(yīng)是雙鏈dna c只與靶核酸序列雜交 d探針長度可以是十幾個堿基到幾千個堿基不等 e高靈敏度 65探針的

18、種類包括： a基因組dna探針 bcdna探針 c寡核苷酸探針 drna探針 e以上均是 66下面哪一步不是獲得基因組dna探針的步驟： 精品. a從基因組文庫篩選得到特定基因 b克隆、擴增 c純化 d連入表達載體 e切取插入片段 67rna探針具有以下特點，但除外： a 采用反轉(zhuǎn)錄方法可以得到b單鏈、雜交效率高 c雜交體系穩(wěn)定 d不存在高度重復(fù)序列 e特異性高 68下面哪一步不是cdna探針的步驟： a從相應(yīng)組織細胞直接中分離特異的cdna b從相應(yīng)組織細胞中分離特異的mrna c反轉(zhuǎn)錄合成cdna d與載體連接 e切割cdna，分離純化 69常用的標(biāo)記物有，但除外： a放射性核素 b生物素

19、 c熒光素精品. d地高辛 entp 70用于標(biāo)記核酸探針的放射性核素主要有，但除外： a32p b35s c3h d125i e14c 71放射性核素標(biāo)記物具有，但除外： a檢測時間短 b靈敏度和特異性高 c可檢出樣品少于1000個分子的核酸量 d半衰期短，穩(wěn)定性差 e污染環(huán)境 72非放射性核素標(biāo)記物包括，但除外： a生物素 b地高辛 c熒光素 d酶 e核酸 精品.73非放射性核素標(biāo)記物具有，但除外： a靈敏度高于放射性核素 b穩(wěn)定 c經(jīng)濟 d實驗周期短 e安全、無污染 74pcr反應(yīng)體系包括，但除外： a基因組dna（模板） b引物 cdntp dtaqdna聚合酶 et4dna連接酶 7

20、5pcr技術(shù)主要應(yīng)用于： a目的基因的克隆 b基因表達與調(diào)控 cdna微量分析 d遺傳病與傳染性疾病的診斷 e以上均可以 76以dna為模板的pcr反應(yīng)，具備以下條件： a反應(yīng)體系一般選用50-100l b引物、taqdna聚合酶精品. c4種dntp、模板dna d緩沖液 e以上均是 77以mrna為模板的pcr反應(yīng)，具備以下條件： a需將mrna反轉(zhuǎn)錄生成cdna b反應(yīng)體系一般選用20l體積、4種dntp、引物 c需要rna酶抑制劑、反轉(zhuǎn)錄酶 dtaqdna聚合酶 e以上均是 78關(guān)于pcr停滯的原因，取決于很多因素，但除外： a樣品模板的拷貝數(shù) bpcr擴增效率 cdna酶種類及活性

21、ddntp的大量消耗e非特異性的競爭因素 79用于核酸分子雜交的探針可以是放射性核素標(biāo)記的： a核糖體 brna c抗體 d抗原 e以上都不是精品.80southern印跡是用dna探針檢測dna片段，而northern印跡則是： a用rna探針檢測dna片段 b用rna探針檢測rna片段 c用dna探針檢測rna片段 d用rna探針檢測蛋白片段 e用dna探針檢測蛋白片段 81用免疫化學(xué)篩選重組體的原理是： a根據(jù)外源基因的表達 b根據(jù)載體基因的表達 c根據(jù)mrna與dna的雜交 d根據(jù)dna與dna的雜交 e根據(jù)rna與rna的雜交 82原位雜交包括： a轉(zhuǎn)膜雜交 b斑點雜交 c菌落雜交或

22、噬菌斑雜交 d直接對染色體或組織的雜交 e以上均有 83外源性dna進入菌體的方式是： a轉(zhuǎn)化 b轉(zhuǎn)錄精品. c翻譯 d半保留復(fù)制 e以上都不是 84要將無粘性末端的兩種平端dna片段結(jié)合在一起，可在： a兩種片段上都接上聚（dt）尾部 b一種片段接聚（dt）尾部，另一種接聚（da）尾部 c兩種片段都接上聚（da）尾部 d反應(yīng)液中加以t4dna連接酶 e有兩項是對的 85用原核生物表達真核生物的基因存在的問題是： a大腸細菌只能表達克隆的cdna b細菌不能切除原始轉(zhuǎn)錄物中相當(dāng)于內(nèi)含子的核苷酸序列 c缺乏翻譯后加工機制 d表達的蛋白質(zhì)常形成不溶性包涵體 e以上都正確 86常用載體有： a質(zhì)粒

23、b噬菌體 c病毒dna d大腸桿菌基因組dna e有3項是正確的精品. 87構(gòu)建cdna文庫時，首先需分離細胞的： a染色體dna b線粒體dna c總mrna dtrna errna 88構(gòu)建dna文庫時，首先需分離細胞的： a染色體dna b線粒體dna c總mrna dtrna errna 89設(shè)計pcr的引物時，應(yīng)考慮引物與模板的： a5端特定序列互補 b5端任意序列互補 c3端特定序列互補 d3端任意序列互補 e中間序列互補 90用于鑒定轉(zhuǎn)化子細胞是否含重組dna的最常用方法是： a抗藥性選擇精品. b分子雜交選擇 crna反轉(zhuǎn)錄 d免疫學(xué)方法 e體外翻譯 91下列哪一步是dna芯片

24、技術(shù)的最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)： a樣品的準備與標(biāo)記 b芯片的制備 c信號的檢測 d數(shù)據(jù)分析處理 e雜交 92基因診斷常用的技術(shù)方法有： a核酸分子雜交 b單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析 cdna序列測定 ddna芯片技術(shù) e以上均是b型題：a基因從原來位置轉(zhuǎn)到基因組的另一位置b噬菌體或病毒dna進入細胞中繁殖c外來dna引起細胞生物學(xué)特性的改變d移碼突變精品.e非移碼突變1感染是指： 2轉(zhuǎn)化是指： 3轉(zhuǎn)位是指： 4結(jié)構(gòu)基因中3個核苷酸的插入或丟失是指： 5結(jié)構(gòu)基因中1個核苷酸的插入或丟失是指： a抗藥性選擇b分子雜交選擇crna轉(zhuǎn)錄d免疫學(xué)方法e體外翻譯6用于鑒定是否有質(zhì)粒轉(zhuǎn)入受體菌的一般方法是： 7用于鑒定轉(zhuǎn)化子

25、細胞是否含目的基因的常用方法： 8利用目的基因表達產(chǎn)物的特異抗體來篩選含目的基因的轉(zhuǎn)化子細胞的方法是：a限制性核酸內(nèi)切酶bdna連接酶c反轉(zhuǎn)錄酶dtaqdna聚合酶e堿性磷酸酶9識別dna回文結(jié)構(gòu)并對其雙鏈進行切割的是：10用于聚合酶鏈式反應(yīng)的是：精品.11將目的基因與載體dna進行連接的酶是： 12特異切除dna或rna5端磷酸的酶是： 13mrna轉(zhuǎn)錄合成cdna的酶是： a支原體b衣原體c噬菌體d細菌e酵母14常用作原核表達體系的是：15常用作真核表達體系的是：a基因組文庫bcdna文庫cmrna文庫dtrna文庫errna文庫16分離細胞染色體可制備： 17分離細胞總mrna可制備：a

26、抗藥性選擇brna反轉(zhuǎn)錄c免疫化學(xué)方法d體外翻譯精品.epcr18對重組體內(nèi)基因進行直接選擇的方法是： 19通過鑒定基因表達產(chǎn)物篩選重組體的方法是：arna聚合酶b末端轉(zhuǎn)移酶c堿性磷酸酶d反轉(zhuǎn)錄酶e核苷酸酶20切除dna末端磷酸基需要用： 21在dna3羥基末端進行同聚物加尾需要用： 22合成cdna需要用：a同聚物加尾連接b人工接頭c粘性末端連接d缺口末端連接e平端連接23外源基因和載體dna經(jīng)限制性酶切后的連接屬于： 24在外源基因和載體dna末端添加同聚物序列后再進行連接屬于： 25在外源基因和載體dna末端添加短核苷酸序列，人為制造粘性末端再進行連接屬于：26需用適當(dāng)?shù)拿笇na突出末

27、端削平或補齊的連接屬于： 精品.a將單鏈dna任意切斷b將雙鏈dna序列特異切開c將兩個dna分子連接起來d將缺口末端連接e切除dna末端磷酸基團27限制性內(nèi)切酶的作用是： 28dna連接酶作用是： 29堿性磷酸酶作用是： a某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因b所有基因結(jié)構(gòu)c不表達的調(diào)控區(qū)d內(nèi)含子和調(diào)節(jié)區(qū)e外顯子和調(diào)節(jié)區(qū)30cdna文庫包括： 31dna文庫包括： 32真核mrna包括：adna聚合酶 brna聚合酶 cdna連接酶 drna連接酶 e限制性核酸內(nèi)切酶精品.33切除特異dna片段： 34連接兩個dna片段： 35大量擴增dna片段： a反轉(zhuǎn)錄酶 b多聚核苷酸激酶 c引物酶 drna聚合酶 e

28、末端轉(zhuǎn)移酶36催化atp的磷酸轉(zhuǎn)移到dna或rna的5端羥基上： 37催化單核苷酸轉(zhuǎn)移到dna的3端羥基上： 38合成cdna： （三）問答題1 簡述基因工程的主要過程。2 什么是載體？可分為幾類？它們各有什么特點？3 puc質(zhì)粒有何特點？4 采用哪些方法可獲取目的基因？5 目的基因與載體的連接有哪幾種方法？簡述其各特點？6 重組體主要有哪些篩選與鑒定方法？7 分子雜交的基本原理是什么？有哪些基本的方法？8 簡述標(biāo)記核酸的核素和非核素有哪幾種？各自有何特點？9 何為pcr？簡述其基本原理。精品.10dna芯片技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用。參考答案（一）名詞解釋1不同來源的dna分子可以通過末端共價連

29、接(磷酸二酯鍵)而形成重新組合的dna分子，這一過程稱為dna重組。2利用重組dna技術(shù)將目的dna片段與載體dna連接并導(dǎo)人宿主細胞，在受體細胞中復(fù)制、擴增、以獲得單一dna分子的大量拷貝。這種含有單一dna重組體的無性系稱為克隆。其中，將基因進行克隆，并利用克隆的基因表達、制備特定的蛋白或多肽產(chǎn)物，或定向改造細胞乃至生物個體的特性所用的方法及相關(guān)的工作統(tǒng)稱為基因工程。3能夠切割dna多聚核苷酸鏈中磷酸二酯鍵的酶稱為核酸酶，其中有選擇地切割dna分子特異序列的核酸酶，稱為限制性核酸內(nèi)切酶，簡稱限制性酶。4 采用限制性酶將基因組dna切成片段，每一dna片段都與一個載體分子拼接成重組dna。將

30、所有的重組dna分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體稱為基因文庫。5mrna為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化合成cdna ，將cdna的混合體與載體進行連接，使每一個cdna分子都與一個載體分子拼接成重組dna。將所有的重組dna分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體就稱為cdna文庫。6pcr又稱基因體外擴增特定序列方法。是在反應(yīng)體系中加入模板dna、dntp、特定設(shè)計的引物及耐熱的dna聚合酶，經(jīng)多次變性、退火、延伸循環(huán)反應(yīng)，使目的dna呈指數(shù)形式合成的過程。精品.7是攜帶外源基因，實現(xiàn)外源基因的擴增或表達所采用的dna分子。常用克隆載體有質(zhì)

31、粒dna、噬菌體dna、粘粒dna、病毒dna等。8指將質(zhì)粒或其它外源dna導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細胞，并使其獲得新的表型的過程。轉(zhuǎn)化常用的宿主細胞是大腸桿菌。9以噬菌體進入宿主菌、病毒進入宿主細胞中繁殖稱為感染。用人工改造的噬菌體或病毒作為載體以其dna與目的序列重組后，在體外用噬菌體或病毒的外殼，將重組dna包裝成有活力的噬菌體或病毒，就能以感染的方式進入宿主細菌或細胞。10核酸分子雜交是依據(jù)兩條核酸單鏈之間堿基互補、變性和復(fù)性的原理，用已知堿基序列的單鏈核苷酸片段作為探針，檢測待測樣品中是否存在與其互補的同源核苷酸序列的方法。11指dna與dna的雜交，將經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化和變性后電泳分離

32、的待測dna片段轉(zhuǎn)印并結(jié)合到一定的固相支持物上，然后與標(biāo)記的dna探針雜交。12指將待測rna樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后與標(biāo)記的核酸探針進行雜交，檢測rna(主要是mrna)的方法。其基本原理和基本過程與southern印跡雜交基本相同。13將rna或dna變性后直接點樣于硝酸纖維素膜或尼龍膜上，再與探針雜交，稱為斑點印跡雜交。精品.14核酸保持在細胞或組織切片中，經(jīng)適當(dāng)方法處理細胞或組織后，將標(biāo)記的核酸探針與細胞或組織中的核酸進行雜交，稱為原位雜交。原位雜交不需要從組織或細胞中提取核酸，對組織中含量極低的靶序列有很高的靈敏度，并可完整地保持組織與細胞的形態(tài)，更能準確地反映出組織

33、細胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。15dna芯片技術(shù)是指將大量已知寡核苷酸或dna探針按特定的排列方式固化在固相支持物表面，按堿基互補配對的原則，與標(biāo)記的特異的單鏈dna或rna分子雜交形成雙鏈，通過對雜交信號的檢測分析，即可得出樣品分子的數(shù)量和序列信息。16是以dna和rna為診斷材料，dna反映基因的存在狀態(tài)，rna反映基因的表達狀態(tài)，通過檢查基因的存在、缺陷或表達異常，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。17基因治療是指以正?；虺C正、替代缺陷基因，或從基因水平調(diào)控細胞中缺陷基因的表達的一種治療疾病的方法。狹義的基因治療是指目的基因?qū)氚屑毎笈c宿主細胞內(nèi)的基因發(fā)生整合，成為宿主基因組的一部分

34、，目的基因的表達產(chǎn)物起治療疾病的目的。而廣義的基因治療則包括通過基因轉(zhuǎn)移技術(shù)或反義核酸技術(shù)、核酶技術(shù)等，使目的基因得到表達、或封閉、剪切致病基因的mrna，而達到治療疾病的目的。（二）選擇題a型題：1. d 2. b 3. a 4. b 5. c 6. a 7. c 8. c 9. b 10. c 11. c 12. a 13. c 14. e 15. b 16. d 17. a 18. e 19. e 20. d 21. b 22. a 23. b 24. c 25. a 精品.26. e 27. d 28. d 29. b 30. e 31. d 32. c 33. a 34. b 35.

35、 c 36. e 37. b 38. c 39. d 40. b 41. a 42. e 43. b 44. a 45. c 46. e 47. c 48. b 49. b 50. e 51. e 52. e 53. c 54. e 55. d 56. e 57. a 58. e 59. e 60. c 61. b 62. e 63. e 64. b 65. e 66. d 67. a 68. a 69. e 70. e 71. a 72. e 73. a 74. e 75. e 76. e 77. e 78. d 79. b 80. b 81. a 82. e 83. a 84. e 85.

36、 e 86. e 87. e 88. c 89. a 90. c91. a 92. e b型題：1. b 2. c 3. a 4. e 5. d 6. a 7. b 8. d 9. a 10. d 11. b 12. e 13. c 14. d 15. e 16. a 17. b 18. a 19. c 20. c 21. b 22. d 23. c 24. a 25. b 26. e 27. b 28. c 29. e 30. a 31. b 32. a 33. e 34. c 35. a 精品.36. b 37. e 38. a （三）問答題1（1）目的基因的獲取：通過化學(xué)合成或pcr的方

37、法獲取，也可從基因組dna文庫或cdna文庫篩選。（2）克隆載體的選擇與構(gòu)建：常用載體有質(zhì)粒、噬菌體、病毒dna。（3）目的基因與載體的連接：利用dna連接酶將目的基因與載體dna進行共價連接形成重組dna分子。（4）重組dna分子導(dǎo)入受體細胞：目的基因與載體連接成重組dna分子后，需將其導(dǎo)入受體菌，隨受體菌生長、繁殖，重組dna分子也復(fù)制、擴增。導(dǎo)入的方法有轉(zhuǎn)化和感染等。（5）重組體的篩選：篩選出含重組dna的受體菌，常用篩選方法有遺傳學(xué)方法如抗藥性標(biāo)志選擇、分子雜交和免疫化學(xué)方法。（6）克隆基因的表達：包括原核表達和真核表達兩種體系?？梢陨捎兴幱脙r值的蛋白質(zhì)或多肽。2載體是為攜帶外源基因

38、，實現(xiàn)外源基因的擴增或表達所采用的dna分子。常用克隆載體有質(zhì)粒dna、噬菌體dna、粘粒dna、病毒dna等。（1）質(zhì)粒 質(zhì)粒是細菌中存在的獨立于染色質(zhì)以外的、能自主復(fù)制的、并與細菌或細胞共存的遺傳成分。多為雙鏈共價閉合環(huán)形dna，可自然形成超螺旋結(jié)構(gòu)，不同質(zhì)粒大小在2300kb之間，15 kb的大小質(zhì)粒比較容易分離純化，15 kb的大質(zhì)粒則不易提取。（2）噬菌體 噬菌體是感染細菌的一類病毒。因為它寄生在細菌中并能溶解細菌細胞，所以稱為噬菌體。有的噬菌體基因組較大，如噬菌體和t噬菌體，有的則較小，如m13、f1、fd噬菌體等。噬菌體由頭和尾構(gòu)成，其基因組是一條長約50kb的線性雙鏈dna分子

39、，組裝在頭部蛋白質(zhì)外殼內(nèi)部。噬菌體感染時，通過尾管將基因組dna注入大腸桿菌，而將其蛋白質(zhì)外殼留在菌外。dna進入大腸桿菌后以其兩端各有12個堿基互補的單鏈末端（cos末端）環(huán)化成環(huán)狀雙鏈，可以兩種不同的方式繁殖：溶菌性方式：溶菌性噬菌體感染細菌后，連續(xù)增殖，直到細菌裂解，釋放出的噬菌體又可感染其它細菌；溶原性方式：溶原性噬菌體感染細菌后，可將自身的dna整合到細菌的染色體中去，和細菌的染色體一起復(fù)制。精品.（3）粘粒 粘粒（cosmid）是將噬菌體的cos區(qū)與質(zhì)粒組合的裝配型載體。質(zhì)粒提供了復(fù)制的起始點、酶切位點、抗生素抗性基因，而cos區(qū)提供了粘粒重組外源dna大片段后的包裝基礎(chǔ)。粘粒本身

40、約46kb，但可借cos區(qū)位點將多個粘粒串聯(lián)成為一個長鏈或大環(huán)，真核基因2945kb的大片段插入兩個相鄰粘粒的限制酶切位點，借噬菌體的包裝系統(tǒng)對兩個cos位點之間的dna片段進行體外包裝。體外包裝好的顆粒感染宿主菌后，能像噬菌體一樣環(huán)化、復(fù)制。由于粘?？煽寺na大片段，可用作建立真核基因組文庫的載體。（4）病毒 質(zhì)粒和噬菌體載體只能在細菌中繁殖，不能滿足真核dna重組的需要。感染人或哺乳動物的病毒，可改造用作動物細胞的載體。所以病毒載體更多地用于真核表達系統(tǒng)，如腺病毒、痘病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒和猴空泡病毒。3（1）pbr322的氨芐青霉素抗性基因和復(fù)制起始位點(ori)。（2）大腸桿菌乳糖操縱子的

41、調(diào)節(jié)基因（laci）、啟動子（plac）、操縱基因（o）及l(fā)acz基因片段，在lacz基因中加入了多克隆位點。lacz基因編碼-半乳糖苷酶n端的-肽，宿主細胞編碼-半乳糖苷酶c端的肽段，兩者可形成互補，而各自都沒有酶的活性，只有兩者融為一體才具有酶的活性，故稱為互補。4（1）基因組dna文庫 采用限制性酶將基因組dna切成片段，每一dna片段都與一個載體分子拼接成重組dna。將所有的重組dna分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體稱為基因文庫。完成dna重組后可通過雜交篩選獲得特定的基因片段。精品.（2）制備cdna文庫 以mrna為模板，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶催化合成cdna ，將cdna的混合體與載體進行連接，使每一個cdna分子都與一個載體分子拼接成重組dna。將所有的重組dna分子都引入宿主細胞并進行擴增，得到分子克隆的混合體，這樣一個混合體就稱為cd