016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替232092008奶粉中葉黃素的測定 液相色譜本標(biāo)準(zhǔn)與232092008相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中葉黃素的測定”;擴大適用范圍,增加在冷凍飲品、米面制品、焙烤食品、果醬、果凍和飲料中葉黃素的液相色譜測定方法;對原標(biāo)準(zhǔn)的原理進行了修改,把原用丙酮為溶劑提取改為用乙醚增加操作過程的注意點;增加了對包括奶粉在內(nèi)的脂肪含量高的樣品的皂化步驟,并提供了不同前處理方法以適應(yīng)各種樣品基質(zhì)分析需要;增加了對葉黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的校正要求;對于在試驗操作過程中葉黃素可能產(chǎn)生異構(gòu)化的現(xiàn)象,增加了對因異構(gòu)化生成的順式葉黃素的定性與定量要求。0161 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中葉黃素的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中葉黃素的液相色譜測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方奶粉、乳品、冷凍飲品、米面制品、焙烤食品、果醬、果凍和飲料中葉黃素的液相色譜測定。2 原理脂肪含量高(脂肪含量以干基計不低于3%)的食品經(jīng)氫氧化鉀溶液室溫皂化使葉黃素游離后,再以乙醚0+40+20,體積比)提取,液相色譜法分離,紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測,外標(biāo)法定量。其他食品直接以乙醚0+40+20,體積比)提取樣品中葉黃素。提取液經(jīng)中性氧化鋁固相萃取小柱凈化后,液相色譜法分離,紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測,外標(biāo)法定量。樣品在提取與分析過程中,反式結(jié)構(gòu)的葉黃素可能發(fā)生異構(gòu)化,轉(zhuǎn)化為順式葉黃素。對于轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的順式葉黃素,可通過保留時間定性、峰面積加合定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。己烷(色譜純。醚(O:色譜純。己烷(色譜純。水乙醇(色譜純。基叔丁基醚,色譜純。丁基羥基甲苯(氧化鉀(0%氫氧化鉀溶液:稱取10),加水溶解稀釋至100 20%氫氧化鉀溶液:稱取20),加水溶解稀釋至100 萃取溶劑:稱取1),以200)溶解,加入400)和400),混勻。),以100)溶解,混勻。的乙醇溶液:稱取1),加乙醇(解稀釋至1L。0162 準(zhǔn)品葉黃素(27準(zhǔn)儲備液(50g/準(zhǔn)確稱取5黃素()溶解并定容至100標(biāo)準(zhǔn)儲備液充氮避光置于以下的冰箱中可保存六個月。注:葉黃素標(biāo)準(zhǔn)儲備液使用前需校正,具體操作見附錄A。準(zhǔn)工作液:從葉黃素標(biāo)準(zhǔn)貯備液()定容至刻度,準(zhǔn)工作液充氮避光置于以下的冰箱中可保存一個月。性氧化鋁固相萃取小柱,500用前以5)淋洗,保持柱體濕潤。機系。4 相色譜儀,帶二極管陣列檢測器或紫外檢測器。外可見分光光度計。析天平:織搗碎機。渦振蕩器。蕩器。壓濃縮裝置。相萃取裝置。心機:轉(zhuǎn)速不低于4500r/ 分析步驟注:由于葉黃素對光敏感,除非另行說明,所有試驗操作應(yīng)在無500樣制備將一定數(shù)量的樣品按要求經(jīng)過粉碎、均質(zhì)、縮分后,儲存于樣品瓶中。制備好的試樣應(yīng)充氮密封后置于以下的冰箱中保存。肪含量高的食品(如嬰幼兒配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤堅果類食品等)準(zhǔn)確稱取2g(勻試樣于50)和10),混勻,加入10氧化鉀溶液(渦旋振蕩1溫避光振蕩皂化3010)避光渦旋振蕩提取3500r/復(fù)提取2次,合并提取液,以10500r/復(fù)洗滌1次,合并有機相于室溫減壓濃縮至近干,)渦旋振蕩溶解殘渣并定容至50163 (供液相色譜測定。液態(tài)奶:準(zhǔn)確稱取10g(品于50)和10),混勻,加入2氫氧化鉀溶液(渦動1溫避光振蕩皂化3010)避光渦旋振蕩提取3500r/復(fù)提取2次,合并提取液,以10500r/復(fù)洗滌1次,合并有機相于室溫減壓濃縮至近干,)渦旋振蕩溶解殘渣并定容至25供液相色譜測定。他食品(如米、面制品、果醬等)準(zhǔn)確稱取5g(勻樣品置于5010)避光渦旋振蕩提取3500r/復(fù)提取2次,合并提取液,于室溫減壓濃縮至近干,以3)渦旋振蕩溶解,重復(fù)操作1次,合并萃取溶劑,混勻,待凈化。將上述溶液以約1mL/用3)洗脫,合并流出液與洗脫液,于室溫減壓濃縮至近干,)渦旋振蕩溶解殘渣并定容至10供液相色譜測定。譜柱:m,250徑)或相當(dāng)者;溫:30;動相:甲醇/水(88+12,體積比,甲基叔丁基醚(梯度洗脫,08醇/水由100%變換至10%;醇/水由10%變換至100%,保留10 流速: 檢測波長:445 進樣量:50L。準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜中,測定相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣溶液的測定待測樣液中葉黃素的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi),否則應(yīng)適當(dāng)稀釋或濃縮。標(biāo)準(zhǔn)工作液與待測樣液等體積進樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時間和峰面積,對試樣溶液的色譜峰根據(jù)保留時間進行定性(待測樣品中化合物色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍應(yīng)在內(nèi)),外標(biāo)法定量。平行測定次數(shù)不少于兩次。:由于在樣品的提取與分析過程中,溫度、光照等原因均可使反式結(jié)構(gòu)的葉黃素發(fā)生異構(gòu)化,轉(zhuǎn)化為順式葉黃素。可按以下步驟獲得順式葉黃素:以乙醇為溶劑,配制800g/入2),搖勻,混合液在日光或日光燈下放置30獲得順式結(jié)構(gòu)的葉黃素。由此制備的含順式結(jié)構(gòu)的葉黃素在檢測時可作為對照品。 分析結(jié)果的表述試樣中葉黃素含量按式(1)計算:0164 X=cF100(1)式中:X試樣中葉黃素的含量,單位為微克每百克(g/100g);c由標(biāo)準(zhǔn)曲線而得的樣液中標(biāo)準(zhǔn)品的含量,單位為微克每毫升(g/V樣品最終定容體積,單位為毫升(m稱樣量,單位為克(g);F校正系數(shù)?？赏ㄟ^以下方式獲得:用液相色譜分析試樣溶液,將順式與反式葉黃素色譜峰面積加合作為總峰面積,其中反式葉黃素峰面積除以總峰面積所得值為校正系數(shù)。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。8 其他本方法的檢出限:嬰幼兒配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤堅果類等食品,當(dāng)取樣量為2g、定容體積為5出限為3g/100g;液態(tài)奶等,當(dāng)取樣量為10g、定容體積為25出限為3g/100g;米、面制品、果醬等食品,當(dāng)取樣量為5g、定容體積為10出限為3g/100g。本方法的定量限:嬰幼兒配方奶粉、乳粉、冰淇淋、焙烤堅果類等食品,當(dāng)取樣量為2g、定容體積為5量限為10g/100g;液態(tài)奶等當(dāng)取樣量為10g、定容體積為25量限為10g/100g;米、面制品、果醬等食品,當(dāng)取樣量為5g、定容體積為10量限為10g/100g。0165 附 錄 1乙醇定容至25取該溶液至1乙醇為空白,以分光光度計在445式(算標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度:c=500F(中:c 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,g/標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光值;2500轉(zhuǎn)換系數(shù);乙醇中葉黃素的吸光系數(shù),為2550;F校正系數(shù),可按下述方式獲得:用液相色譜分析校準(zhǔn)后的標(biāo)準(zhǔn)溶液,將順式與反式葉黃素色譜峰面積加合作為總