i 密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 博士學(xué)位論文 肉仔 雞對(duì)小肽的吸收 轉(zhuǎn)運(yùn) 及其調(diào)控研究 要 本課題研究了 肉仔雞 對(duì)小肽吸收的機(jī)理和日糧、激素和活性因子對(duì)小肽轉(zhuǎn)運(yùn) 載體 的調(diào)控作用，并比較研究了不同蛋白質(zhì)原料在肉 仔 雞消化道生成 可吸收 小肽的 規(guī)律 。 試驗(yàn)一 研究 了溫度、酸度、培養(yǎng)液成分、樣品前處理等理化 因素對(duì) 穩(wěn)定性的影響。將 別進(jìn)行含 養(yǎng) 液溶解 、 恒溫培養(yǎng) 30 高氯酸溶液稀釋 、 含 養(yǎng) 液 稀釋并煮沸 5 高氯酸溶液稀釋 并煮沸 5處理。結(jié)果表明，上述處理后 3 種二肽的回收率均在 97%以上。 試驗(yàn)二 研究了 雞離體小腸各段的水解以及肽酶抑制劑抑制二肽水解的效果。將 12 只成年產(chǎn)蛋 雞分為 4 組，每只為 1 個(gè)重復(fù)，取小腸分為十二指腸、空腸前段、空腸中段、空腸后段和回腸，制備外翻腸囊，分別在含有不同二肽（ 添加和不添加肽酶抑制劑（ 理組成的 4 種培養(yǎng)液中培養(yǎng)。結(jié)果表明，雞離體外翻腸囊培養(yǎng)液中存在迅速而強(qiáng)烈的二肽水解現(xiàn)象，培養(yǎng) 5 部被水解，而 25則被完全水解，其中以小腸前段的水解作用更為強(qiáng)烈。添加 10 能抑制 水解，但可有效抑制 水解， 培養(yǎng) 25仍有 40%的 被水解。 試驗(yàn)三 研究了日糧氮源形態(tài)對(duì)肉仔雞離體小腸 收轉(zhuǎn)運(yùn)及血清小分子肽含量的影響。 選取預(yù)飼 氨基酸、酪蛋白水解物 和 酪蛋白氮源的 等能等 氨基酸 純合日糧 3 周的肉仔雞各 9 只，取 十二指腸、空腸和回腸，制備外翻腸囊， 分別在空白培養(yǎng)液、氨基酸培養(yǎng)液和 養(yǎng)液 培養(yǎng) 25定黏膜液、漿膜液和組織勻漿液中的 量。結(jié)果表明， 日糧氮源形態(tài)顯著影響肉仔雞離體小腸對(duì) 吸收，酪蛋白 組 吸收 多， 酪蛋白水解物 組 吸收最少。離體小腸不同腸段吸收 能力有顯著差異，十二指腸吸收能力顯著低于空腸和回腸。 日糧氮源形態(tài)影響雞血清肽分子量分布， 氨基酸 組 血清小分子肽比例顯著高于酪蛋白水解物和酪蛋白 組 。 試驗(yàn)四研究了雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 因表達(dá)的 定方法以及 肉仔雞 小腸 分布規(guī)律。 根據(jù)雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 看家基因 列，分別設(shè)計(jì) 物各 1 對(duì)，并通過(guò) 度、循環(huán)數(shù)等 件的優(yōu)化，建立了包括 取、反轉(zhuǎn)錄、 雞小腸 因表達(dá)檢測(cè)方法。采用該方法研究了肉仔雞 因在小腸各段的表達(dá)差異。結(jié)果顯示，肉仔雞小腸 達(dá)水平 隨小腸近端到遠(yuǎn)端逐漸 降低，回腸表達(dá)水平顯著低于十二指腸和空腸，十二指腸和空腸差異不顯著。 試驗(yàn) 五 研究了外源 激素和生長(zhǎng)因子對(duì)肉仔雞 因表達(dá)的調(diào)控作用。 25 日齡肉仔雞 30只隨機(jī)分為 5 組，分別接受 表皮生長(zhǎng)因子、甲狀腺素、胰高血糖素、甲巰咪唑刺激，330 g， 25mg/重 ， 對(duì)照組注射蒸餾水，刺激為每日 1 次，連續(xù) 5d， 取小腸測(cè)定肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 度。結(jié)果表明，甲狀腺素和胰高血糖素在 轉(zhuǎn)錄水平 顯著上調(diào)雞肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 因表達(dá)，而甲狀腺素抑制 劑 甲巰咪唑 和表皮生長(zhǎng)因子 則有下調(diào) 因表達(dá)的趨勢(shì)。 試驗(yàn)六比較研究了不同蛋白質(zhì)飼料在肉仔雞消化道內(nèi)水解釋放小分子肽的特性。 35 只 21 日齡肉仔雞，分為 7 組 ， 分別強(qiáng)飼 70%待測(cè) 飼料（豆粕、魚(yú)粉、菜籽粕、花生仁粕、玉米蛋白粉、血粉、棉籽粕）和 30%淀粉的混合物 50g，研究各種飼料在消化道水解釋放小分子肽（ 花生仁粕 血粉 玉米蛋白粉 豆粕 魚(yú)粉 菜籽粕。 關(guān)鍵詞 ： 肉仔 雞 ， 小肽 ， 吸收 ， 基因表達(dá) ，調(diào)控 ix to of of by of on of in of of in to of by BS 0 f 57% to in of in of or of in at of of 5in of 0 in 0% 5 to of on of in of in of 1 of in 5in in in of by of to of in of to by iv to of in in no to of in 5 by d, in on to to of in of 1 0% 0% by of in No of v 目 錄 第一章 緒論 1 1 小肽的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn) 1 2 小 肽的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制 2 3 小肽轉(zhuǎn)運(yùn)的營(yíng)養(yǎng)意義 7 4 小肽吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的研究方法 9 5 本論文的立題依據(jù)和研究目的 11 第二章 試驗(yàn)研究 13 試驗(yàn)一 理化因素對(duì)二肽穩(wěn)定性的影響 13 1 前言 13 2 材料和方法 14 3 結(jié)果 15 4 小結(jié) 16 試驗(yàn)二 雞離體小腸中 水解 17 1 前言 17 2 材料和方法 17 3 結(jié)果 18 4 討論 19 5 小結(jié) 20 試驗(yàn)三 不同氮源日糧對(duì) 肉仔 雞離體小腸 收轉(zhuǎn)運(yùn)的影響 21 1 前言 21 2 材料和方法 21 3 結(jié)果 24 4 討論 26 5 小結(jié) 27 試驗(yàn)四 半定量 評(píng)定雞小腸肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 因的表達(dá) 28 前言 28 2 材料和方法 28 3 結(jié)果 30 4 討論 32 5 小結(jié) 32 試驗(yàn)五 外源表皮生長(zhǎng)因子、甲狀腺素、胰高血糖素對(duì) 肉 仔雞 小腸肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體因表達(dá)的調(diào)控 33 1 前言 33 2 材料和方法 33 3 結(jié)果 35 4 討論 36 5 小結(jié) 37 試驗(yàn)六 不同蛋白飼料在肉 仔 雞消化道中釋放小肽的特性 38 1 前言 38 2 材料和方法 38 3 結(jié)果 40 4 討論 41 5 小結(jié) 43 第三章 結(jié)論 44 參考文獻(xiàn) 46 致謝 57 作者簡(jiǎn)歷 58 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 傳統(tǒng)蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng) 理論認(rèn)為，飼料完整蛋白質(zhì)首先在胃酸的作用下變性，暴露肽鍵，然后在胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等內(nèi)切酶的作用下降解為長(zhǎng)短不等的多肽鏈。在小腸中，多肽經(jīng)羧肽酶和氨肽酶等外切酶的作用生成游離氨基酸而備吸收利用。在此過(guò)程中，肽僅僅是蛋白質(zhì)消化過(guò)程中的中間體 ，并無(wú)任何營(yíng)養(yǎng)意義。 直到二十世紀(jì)五、六十年代首次提出肽完整吸收的證據(jù)后，人們才開(kāi)始注意到肽潛在的營(yíng)養(yǎng)意義。 1957 年至 1962 年間所進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，在蛋白質(zhì)消化過(guò)程中，除了生成游離氨基酸外，還有大量的小肽生成，而且肽可完整進(jìn)入腸黏膜細(xì)胞，并在黏膜細(xì)胞中進(jìn)一步水解成氨基酸，而后進(jìn)入血液循環(huán)（ 1962）。隨后 （ 1968）進(jìn)一步證實(shí)小腸可大量攝取肽。（ 1984）首次在小腸黏膜上發(fā)現(xiàn)了小肽載體， （ 1994）則成功地克隆了 I 型小肽載體（ 至此，小肽能 被小腸吸收的觀點(diǎn)才被廣泛接受，小肽營(yíng)養(yǎng)成為蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)研究的新領(lǐng)域。 1 小肽的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn) 大量的研究表明，進(jìn)入小腸的日糧蛋白被胃蛋白酶和胰蛋白酶消化，生成氨基酸和小肽的混合物，小腸中蛋白質(zhì)消化產(chǎn)物的吸收主要以小肽形式而非氨基酸的形式進(jìn)行（ ，1984）。而 動(dòng)物對(duì)肽的吸收有其完全不同于氨基酸吸收的機(jī)制。 已知氨基酸逆濃度梯度的主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)因中性、堿性、酸性氨基酸和亞氨基酸四類(lèi)氨基酸而存在四種轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，其轉(zhuǎn)運(yùn)是通過(guò)不同的 或非 轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)進(jìn)行的，其中以依賴(lài) 的耗能轉(zhuǎn)運(yùn)方式為主（ ， 1980； 1991）。 與氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)相比， 由于肽轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)具有耗能低而不易飽和的特點(diǎn)，哺乳動(dòng)物對(duì)肽中氨基酸殘基的吸收速度大于對(duì)游離氨基酸的吸收速度（ ， 1984； 1988； 1992），吸收效率也更高。 1984）報(bào)道，來(lái)源于小肽的氨基酸吸收速率較游離氨基酸更快更穩(wěn)定，表明肽轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的容量大于氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，不易飽和。 （ 1980）采用腸道灌注技術(shù)研究表明，人對(duì)水解酪蛋白和乳清蛋白水解物中 吸收多于等摩爾組成的游離氨基酸混合物，各種氨基酸之間的吸收差異也較小，即氨基酸的吸收更為均勻或平衡。 （ 1984）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，大鼠對(duì)雞蛋白蛋白酶解產(chǎn)物的氨基酸利用效率比相應(yīng)游離氨基酸高，因而具有更高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。 （ 1988）報(bào)道，對(duì)饑餓 8 小時(shí)的豬在十二指腸灌注乳水解產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)其中氨基酸的吸收量比等摩爾相同氨基酸組成的游離氨基酸混合物更多，吸收速度也更快。樂(lè)國(guó)偉等（ 1997）研究麻醉?xiàng)l件下公雞十二指腸灌注酪蛋白水解寡肽 與 游離氨基酸對(duì)門(mén)靜脈血液中氨基酸和肽的影響也發(fā)現(xiàn)，雞對(duì)寡肽中氨基酸 的吸收速度顯著快于游離氨基酸。趙昕紅（ 1998）從仔豬十二指腸灌注二肽（ 等量氨基酸混合物，觀測(cè)肝門(mén)靜脈中氨基酸含量的變化。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，仔豬肝門(mén)靜脈對(duì)二肽中來(lái)的賴(lài)氨酸的攝取速度及吸收量要遠(yuǎn)大于對(duì)游離氨基酸混合物中賴(lài)氨酸的攝??；來(lái)源于肽的甘氨酸吸收總量也高于游離氨基酸混合物。 另一方面，氨基酸以小肽形式吸收可避免某些游離氨基酸在吸收時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的競(jìng)爭(zhēng)，從而中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率。趙昕紅（ 1998）發(fā)現(xiàn)，灌注二肽（ ，仔豬對(duì)其他大部分氨基酸的吸收量也高于灌注等量的兩種游離氨基酸。 （ 1994）則認(rèn)為，肽載體轉(zhuǎn)運(yùn)能力可能高于各種氨基酸載體轉(zhuǎn)運(yùn)能力的總和，并且在蛋白質(zhì)消化過(guò)程中，以肽形式存在的氨基酸濃度遠(yuǎn)比游離氨基酸存在的濃度大，而且肽的吸收速度也快。 （ 1993）報(bào)道，小牛經(jīng)消化道的肽結(jié)合氨基酸流量大約比游離氨基酸流量高 。 還有研究表明，肽形式存在的氨基酸可降低高濃度時(shí)某些氨基酸的毒性作用。在饑餓、限飼、胃腸疾病、手術(shù)后的傷口愈合期、動(dòng)物的快速增長(zhǎng)與高產(chǎn)期及某些氨基酸吸收障礙的先天性疾病中，以小肽形式補(bǔ)充氨基酸，可改善動(dòng)物或人的氨基酸吸收，滿足機(jī)體對(duì)氨基酸和 氮的需求。如胱氨酸尿癥患者不能吸收游離精氨酸，但可以正常吸收 ， 1975）。而患有 傳性氨基酸代謝?。┑幕颊卟荒芪沼坞x的中性氨基酸，但可以吸收肽結(jié)合的中性氨基酸（ ， 1976）。感染隱孢子蟲(chóng)對(duì)大鼠腸道的損傷導(dǎo)致氨基酸營(yíng)養(yǎng)吸收障礙，但對(duì)二肽的吸收能力代償性增強(qiáng)（ ， 2003）。此外小肽（特別是二肽、三肽）的低抗原性，也使得食后不會(huì)引起過(guò)敏反應(yīng)；小肽較氨基酸更低的滲透壓，也 有利于減少 腹瀉等不良反應(yīng)。 基于氨基酸以小肽形式轉(zhuǎn)運(yùn)的諸多優(yōu)點(diǎn)，預(yù)示 著小肽可能在人類(lèi)和動(dòng)物蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)方面發(fā)揮著重要作用。 2 小 肽的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制 研究證明，小腸肽的轉(zhuǎn)運(yùn)是有轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白參與的二肽和三肽的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。已知肽的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是生物的共同特征。肽跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的顯著特點(diǎn)主要表現(xiàn)為在生物進(jìn)化過(guò)程中轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及其肽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的保守性。有機(jī)物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)往往與跨膜的離子梯度相耦聯(lián)。對(duì)于微生物，氨基酸、糖和肽轉(zhuǎn)運(yùn)的主要驅(qū)動(dòng)力是跨膜質(zhì)子梯度，而動(dòng)物界氨基酸和糖的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的驅(qū)動(dòng)力進(jìn)化為 度，但小肽轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制則在進(jìn)化過(guò)程中被保留下來(lái)，成為一種完全有別于其它物質(zhì)的獨(dú)特轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。 生物同時(shí)具備肽 轉(zhuǎn)運(yùn)的質(zhì)子驅(qū)動(dòng)力和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)的 動(dòng)力對(duì)于維持最佳的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)具有重要作用，這樣就可以防止氨基酸和肽轉(zhuǎn)運(yùn)中對(duì)能量的競(jìng)爭(zhēng)，從而保證兩種轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)能夠同時(shí)發(fā)揮作用。 肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體 目前已發(fā)現(xiàn)的高等動(dòng)物體內(nèi)的肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體蛋白有 5 種，包括 鼠的肽 /組氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體（ 人的肽 /組氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體 (韓飛等， 2003）。其中研究最多的是 表達(dá)部位主要在消化道，在腎臟中也有微弱的表達(dá)， 表達(dá)部位則主要在腎臟。 小腸對(duì)小肽（主 要是二肽和三肽）的吸收是通過(guò)位于小腸上皮細(xì)胞刷狀緣膜的 H+耦合的肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體（ 行的（ 1996），而質(zhì)子是作為肽轉(zhuǎn)運(yùn)的驅(qū)動(dòng)力發(fā)揮作用的（ 1985）。 迄今為止， 唯一被克隆的小腸肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體。目前已經(jīng)從人類(lèi)（ ， 1995）、大鼠（ ， 1995）、小鼠（ ， 2000）、家兔（ ， 1994； ， 1994）、綿羊（ 2001）、 雞（ ， 2002）、豬（ ， 2005） 和人結(jié)腸癌細(xì)胞 ，1998）中克隆出該載體蛋白。此外也在豬、牛、雞、羊和鰻鱺（ ， 1999； ， 1999；， 2000）小腸以及人胰腺癌細(xì)胞 ， 1998）和其他人類(lèi)癌中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 細(xì)胞（ ， 1997 和 2000）中測(cè)得 能性研究發(fā)現(xiàn)， 轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)還存在于人類(lèi)腸細(xì)胞 1988），以及猴（ ， 1977）、 倉(cāng)鼠（ ， 1975）、天竺鼠（ 1980）、蟾蜍（ ， 1987）、豹蛙（ 1974）、斑泥螈（ 1982）的小腸中。由此可見(jiàn) 運(yùn)系統(tǒng)是脊椎動(dòng)物蛋白質(zhì)代謝的共同特征。 肽的轉(zhuǎn)運(yùn)是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程。大量研究表明， +-/肽耦聯(lián)的轉(zhuǎn)運(yùn)載體（ 1991）。該載體利用從腸腔（ 1975）到腸細(xì)胞（ 1984）的質(zhì)子梯度轉(zhuǎn)運(yùn)二肽、三肽（ 1972； 1990； 2005）。 與 K+， 關(guān)（ 1994； 001； 2002），而該質(zhì)子梯度是由腸細(xì)胞腔面膜的 H+泵所建立和維持的（ 1999）。根據(jù)研究結(jié)果推測(cè)， H+和肽分子一起穿過(guò)上皮細(xì)胞腔面膜被 合于腔面膜的 H+交換系統(tǒng)再將 H+泵出 細(xì)胞，同時(shí)將 換入細(xì)胞，以維持跨細(xì)胞膜的質(zhì)子梯度驅(qū)動(dòng)力，同時(shí)結(jié)合于基底膜的 K+a+泵出細(xì)胞，以維持胞外到胞內(nèi)的 度（ 1985）。因此從總體來(lái)看，肽的轉(zhuǎn)運(yùn)也是一個(gè)耗能的過(guò)程。 也有不同于上述假說(shuō)的一些觀點(diǎn)。 1997）認(rèn)為， H+泵產(chǎn)生的 能還有堿性載體（如 ）參與這一過(guò)程。也有學(xué)者認(rèn)為肽的轉(zhuǎn)運(yùn)不是單向的。 2002）采用膜片鉗研究 一些二肽如 向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)，并且可能通過(guò)影響周轉(zhuǎn)速率增強(qiáng)內(nèi)向電流。 1993）和 1999）也觀察到小肽分子經(jīng)基底膜的反向轉(zhuǎn)運(yùn)現(xiàn)象。 對(duì)肽轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程詳細(xì)機(jī)制的了解仍然不多。目前僅僅知道質(zhì)子耦聯(lián)的肽轉(zhuǎn)運(yùn)是一個(gè)有序而同步的轉(zhuǎn)運(yùn)模型，其中先與 1996）。 對(duì) 自不同物種的 中雞的序列最長(zhǎng)，為 714個(gè)殘基（ 2002），兔和牛的最短，為 707個(gè)殘基（ 1994；2001），但其分子量均為 79且分子結(jié)構(gòu)也大體相同。據(jù)預(yù)測(cè)，不同物種的 2個(gè)跨膜區(qū)（ 1994； 1995； 1995； 2000； 2001；2002），在第 9和第 10個(gè)跨膜區(qū)之間存在一個(gè)大的親水環(huán)。氨基酸序列分析表明，在大的胞外環(huán)上有 3（兔 1994）到 7個(gè)（ 1995）潛在的 部 分物種的 和一個(gè)蛋白激酶 人的 有 則有 4個(gè) 個(gè) 同物種的 鼠 7%和88%的同源性（ 1995）。兔和人的 1%的同源性（ 1995）。雞 、小鼠、大鼠和綿羊的 同源性，綿羊 鼠和兔的 3%、 81%和 78%的同源性（ 2005）。 不同動(dòng)物 所研究的所有動(dòng)物小腸都有 在肌肉、心臟未檢出 他部位的表達(dá)情況則因動(dòng)物而異。雞的全部小腸、腎臟和盲腸中都有 囊、腺胃和肝臟沒(méi)有（ 1999）。兔除了小腸，還有腎臟、肝臟都有少量表達(dá)，大腦有微量表達(dá)，但胃和盲腸沒(méi)有表達(dá)（ 1994）。大鼠的肝中也無(wú)表達(dá)，腎臟有中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 微量表達(dá)。人則肝、腎、胰有表達(dá)，大腦未見(jiàn) 表達(dá)（ 1995）。綿羊和泌乳奶牛的 胃和瘤胃中表達(dá)，而真胃、肝臟、腎臟、盲腸和結(jié)腸以及奶牛的乳腺中未檢測(cè)到1999）。其在腸黏膜主要表達(dá)在吸收細(xì)胞的刷狀緣膜，腸絨毛的底部沒(méi)有表達(dá)。測(cè)定 996； 1998）和 1998）。有報(bào)道則認(rèn)為， 1999； 1993）。這些報(bào)道之間的差異可能與細(xì)胞分化程度有關(guān)（ 1999）。從其在腸道的表達(dá)強(qiáng)度來(lái)看，不同動(dòng)物也存在差異。雞以十二指腸為主，豬以空腸為主，而反芻動(dòng)物以空腸和回腸為主（ 1999）。 同組織對(duì)肽的吸收和利用狀況。 響小肽吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的因素 已知腸道對(duì)肽的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)是一個(gè)復(fù)雜的生理過(guò)程，激素、生長(zhǎng)因子、腸道損傷、小肽底物分子結(jié)構(gòu)、飼糧類(lèi)型、營(yíng)養(yǎng)水平可能都在肽的轉(zhuǎn)運(yùn)中起著調(diào)控干預(yù)作用。 物 肽載體 底物分子具有廣泛的適應(yīng)性，能夠轉(zhuǎn)運(yùn)幾乎所有的二肽和三肽（ ，2001）。除此之外， 轉(zhuǎn)運(yùn)多種肽類(lèi)衍生物，其中包括 青霉素、先鋒霉素等） （ ， 1999） 、 血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（ 1989；， 2000）、腎素抑制劑（ ， 1990）、凝血酶抑制劑（ ， 1995）和類(lèi)二肽抗癌藥物 士欣）（ ， 1992）等，以及多種藥物前體物，如 伐西洛韋，纈更昔洛韋和 ， 1989； ， 1998； ， 2000）等。肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體的這些特點(diǎn)不但在營(yíng)養(yǎng)上具有重要意義，而且在醫(yī)學(xué)和藥學(xué)領(lǐng)域都有巨大的應(yīng)用前景。 但體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肽載體如 底物也有一定的選擇性，它可選擇轉(zhuǎn)運(yùn)不同分子結(jié)構(gòu)的底物。首先，肽的轉(zhuǎn)運(yùn)具有立體構(gòu)型特異性。據(jù) （ 1995）和 （ 1996）的報(bào)道，中性氨基酸和 （ 1995）研究發(fā)現(xiàn)， 肽轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)完全沒(méi)有親和力，而 保留了與 當(dāng)?shù)挠H和力。（ 1996）則認(rèn)為，底物分子對(duì) 胞系 親和力順序?yàn)?且盡管 轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)有親和力，但它既不能被 胞攝取，也不能穿過(guò)培養(yǎng)的單層 胞，也就是說(shuō)沒(méi)有發(fā)生該肽的轉(zhuǎn)運(yùn)。對(duì) 行側(cè)鏈修飾則能顯著提高其親和力和轉(zhuǎn)運(yùn)速率（ ， 1997a； ， 2001）。 末端基團(tuán)是影響肽分子是否能被轉(zhuǎn)運(yùn)的另一個(gè)重要因素。最早認(rèn)為，最適于轉(zhuǎn)運(yùn)的二肽或三肽應(yīng)當(dāng)具有游離的氨基端和羧基端（ 1987）。一般而言， N 端 換該基團(tuán)會(huì)降低轉(zhuǎn)運(yùn)效率。但也有研究證實(shí)，缺乏 u 和 1988）發(fā)現(xiàn)，巰基替代 （ 2002）報(bào)道，表達(dá)于倉(cāng)鼠卵母細(xì)胞的綿羊 估計(jì)肽載體對(duì)底物分子結(jié)構(gòu)的選擇性可能與其轉(zhuǎn)運(yùn)活性中心有關(guān)，但至今對(duì)肽載體蛋白的三維結(jié)構(gòu)及其活性中心尚不了解。 研究還發(fā)現(xiàn)， 物之間存在競(jìng)爭(zhēng)抑制關(guān)系。 （ 1