ICS07080 A 4049. / 中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準 GB/T321322015 動物性材料 羊毛 羊絨 鴨絨 鵝絨 屬 ( 、 、 、 ) 性 DNA 鑒定方法 實時熒光 PCR 法 DNAidentificationofwool cashmere ducksdown oosesdownanimal , , ,g materialsReal-timefluorescencePCR method2015-10-09發(fā)布 2016-11-01實施 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局 發(fā) 布 中 國 國 家 標 準 化 管 理 委 員 會 中 華 人 民 共 和 國 國 家 標 準動物性材料(羊毛、羊絨、鴨絨、鵝絨)屬性 DNA 鑒定方法 實時熒光 PCR 法 GB/T321322015 * 中 國 標 準 出 版 社 出 版 發(fā) 行 北京市朝陽區(qū)和平里西街甲 號 2 (100029) 北京市西城區(qū)三里河北街 號 16 (100045) 網(wǎng)址 : 服務(wù)熱線 :400-168-0010年 月第一版 2015 11 * 書號 :1550661-52011 版權(quán)專有 侵權(quán)必究 GB/T321322015 前 言 本標準按照 給出的規(guī)則起草 GB/T1.12009 。 本標準由全國生化檢測標準化技術(shù)委員會 提出并歸口 (SAC/TC387) 。 本標準起草單位 深圳市計量質(zhì)量檢測研究院 中國測試技術(shù)研究院 珠海出入境檢驗檢疫局 : 、 、 。 本標準主 要 起 草 人 陳 國 培 賴 心 田 林 霖 周 李 華 梁 玉 英 莫 秋 華 洪 曉 明 唐 復(fù) 潤 胡 科 新 : 、 、 、 、 、 、 、 、 、何永盛 楊友紅 楊志敏 楊國武 楊澤 、 、 、 、 。 GB/T321322015 動物性材料 羊毛 羊絨 鴨絨 鵝絨 屬 ( 、 、 、 ) 性 DNA 鑒定方法 實時熒光 PCR 法 1 范圍 本標準規(guī)定了羊毛 羊絨 鴨絨 鵝絨動物性材料中 成分實時熒光 定性檢驗方法 、 、 、 DNA PCR 。 本標準適用于動物性材料中羊毛 羊絨 鴨絨 鵝絨等動物源性 成分的鑒定 、 、 、 DNA 。2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 僅注日期的版本適用于本文 。 , 件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改單 適用于本文件 。 , ( ) 。 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 GB/T6682 3 原理 本標準使用十二烷基磺酸鈉 異硫氰酸胍 巰基乙醇法或其他等效 提取法 獲得適用于實時 - - DNA , 熒光 檢測的 同時依據(jù)多種動物的物種特異性基因片段設(shè)計成特異性熒光引物 通過實時 PCR DNA。 , 熒光 反應(yīng) 檢測其中是否含有各種動物源性 成分 從而達到對動物性材料進行屬性 成 PCR , DNA , DNA 分定性檢測的目的 。4 儀器設(shè)備及器具 41 實時熒光 儀 . PCR 。42 超凈工作臺 . 。43 離心機 最高轉(zhuǎn)數(shù) g . ( 15000 )。44 微量移液器 . :0.2L2L,1L10L,2L20L,20L200L,200L1000L。45 恒溫水浴鍋 . :(651)。46 超純水系統(tǒng) 電阻率 . ( 18.2 Mcm)。47 紫外分光光度計 . :230nm、260nm、280nm。5 試劑和材料 除非另有說明 在分析中僅使用分析純試劑 水應(yīng)符合 一級水要求 , , GB/T6682 。51 溶液 稱取 十二烷基磺酸鈉 粉末 加入 . 2% SDS : 2gSDS(sodiumdodecylsulfate,sodiumsalt, ) , 三 羥甲基 氨基甲烷5mL1mol/LTris-HCl(pH8.0)Tris-:tris(hydroxymethyl)aminomethane, ( ) 及 乙 二 胺 四 乙 酸 加 水 定 容 至 4mL0.5 mol/L EDTA(pH8.0)(ethylenediaminetetraaceticacid, ), 室溫保存100mL, 。52 異硫氰酸胍提取液 稱取 異硫氰酸胍 氯化鈉 . : 47.25g 、1.75g 、4gPVPK-40(Poly