53 浙 江 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn) 624 2006 動(dòng)物組織中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺殘留量的測(cè)定 氣相色譜 of of in 006布 2007施 浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布 624 2006 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)是在參閱了國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)我國(guó)技術(shù)發(fā)展水平研究制定的，建立了氣相色譜 織 中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等 4種 2方法 。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 A、附錄 本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。 本標(biāo)準(zhǔn) 起草單位： 浙江省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心 、 浙江省疾病預(yù)防控制中心。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人： 陳慧華、應(yīng)永飛、吳平谷、任玉琴、陸春波、陳勇、周文海、林仙軍、趙永信。 624 2006 1 動(dòng)物組織中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇和萊克多巴胺殘留量的測(cè)定 氣相色譜 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了氣相色譜質(zhì)譜（ 測(cè) 定 動(dòng)物組織中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等 4種 2的 方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于 畜禽肌肉、肝臟、肺、腎等 組織中特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺等 4種 2的測(cè)定 。 本 方法檢測(cè)限為 ： 特布他林 倫特羅 丁胺醇 克多巴胺 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括 勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 方法原理 試樣 加入內(nèi)標(biāo) 物后 ，用甲醇提取 和 離子交換固相萃取柱 凈化 ， 氮?dú)獯蹈?，與 N， 進(jìn)行 衍生 化反應(yīng)， 于氣相色譜質(zhì)譜儀上進(jìn)行測(cè)定。內(nèi)標(biāo)法定量。 4 試劑和溶液 所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實(shí)驗(yàn)室用水 為去離子水 ， 應(yīng) 符合 6682二級(jí)水的規(guī)定 。 醇 酸乙酯 ：色譜純 水 酸 鹽酸溶液：取鹽酸（ 9水至 500勻，即得。 0 鹽酸溶液：取 鹽酸溶液（ 15水至 100勻，即得。 水硫酸鈉： 450 干燥 12h， 備用 。 己烷 苯 ：色譜純 生劑： N， 氨水 /乙酸乙酯溶液：取氨水 （ 4乙酸乙酯 （ 至 100超聲 15充分混勻，即配即用。 離子交 換固相萃取柱 1)：每根柱填料量為 400體積 5 準(zhǔn)品 ： 特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺，純度 98%。 位素 內(nèi)標(biāo)物： 00 g/00 g/ 2特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品（ 10 1) 離子交換固相萃取柱 是由杭州富?？萍挤?wù)有限公司提供的產(chǎn)品的商品名稱，給出這一信息是為了給本標(biāo)準(zhǔn)的使用者提供方便，而不是主管部門對(duì)這一產(chǎn)品的認(rèn)可。 624 2006 2 精密稱定，分別 置 100量瓶中，用甲醇溶解并 定容至刻度，其濃度 均 為 以下冰箱中 保存 ， 有效 期為 6 個(gè)月。 2分別準(zhǔn)確 吸取適量的 2于同一容量瓶中 ，用甲醇稀釋成 含 特布他林、克倫特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺 均為 混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液，置 4 8 冰箱中 保存 ， 有效 期為 1 個(gè)月。 2分別準(zhǔn)確 吸取適量的 2位素內(nèi)標(biāo)物 （ 于同一容量瓶中 ，用甲醇稀釋成 含 為 合內(nèi)標(biāo)工作液，置 4 8 冰箱中 保存 ，有效 期為 1 個(gè)月。 5 儀器設(shè)備 相色譜 ： 配有電子轟擊（ 。 心機(jī) ：最大轉(zhuǎn)速 9000r/以上。 織 絞碎機(jī) 。 織勻漿機(jī)：最大轉(zhuǎn)速 10000r/以上。 液漏斗： 125 塞 玻璃 試管 ： 510 旋混合器 。 析天平 ：感量 聲波清洗器 。 心管 ： 5010 吹儀 。 液器：量程 20L 200L， 100L 1000L。 6 分析步驟 樣制備 取有代表性的樣品，經(jīng)絞碎后，保存 于 冰箱中 ，備用 。 樣提取 稱取 試樣 5g（精確到 置于 50 中，加 2作 液（ 50L；加 甲醇2010000r/0s，加蓋， 于 60 超聲波清洗器中超聲 20取出 離心管， 冷卻后 8000r/0出上清液 至分液漏斗 中，另 取 甲醇 10并上清液 ；加正己烷 20離甲醇相，在 60 下氮?dú)獯抵?2 鹽酸 （ 3分混勻后，在 9000r/0出上清液 ，備用 。 樣凈化 依次用甲醇 5 530鹽酸溶液 （ 5 離子交換固相萃取柱 （ 取 去流出液， 并依次 用水 5子， 抽干； 用 4氨水 /乙酸乙酯溶液（ 10收集 洗脫液，經(jīng) 無(wú)水硫酸鈉 （ 水 ， 50 氮 氣 吹干 ；殘余物中 加乙酸乙酯 5于 超聲波清洗器中超聲 55000r/出上清液至 550 氮吹至干 ，吹 干 物備用 。 生 化 吹 干 物 加入甲苯（ 100生劑 （ 100L，加 塞 后于渦旋混合器 充分 混勻， 在 80 5的烘箱中 恒溫衍生 60氮?dú)獯蹈桑?加甲苯 另取 2量，加 250L，加乙酸乙酯 5氣吹干， 與樣品 同步進(jìn)行衍生化。 器測(cè)定 624 2006 3 譜條件 色譜柱： 5%苯基 甲基聚硅氧烷彈性石英毛細(xì)管柱 (30 m或 具同等性能的色譜柱 ； 進(jìn)樣口溫度： 280 ； 柱溫程序：初溫 120 ，保持 3 后以 10 30 ，保持 5以 10 保持 3 載氣：高純氦氣（ ； 流速： 分流進(jìn)樣 ； 進(jìn)樣量： 譜條件 溫 230 ； 電子能量： 70 接口溫度： 280 ； 電子倍增器電壓： 高于調(diào)諧電壓 200V； 質(zhì)量掃描范圍： 30 550U； 溶劑延遲： 10 選擇離子監(jiān)測(cè)方式（ 。 監(jiān)測(cè)離子（ m/z）：特布他林 86、 356*、 426；克倫特羅 86*、 262、 243；沙丁胺醇 369*、 440、 207；萊克 多巴胺 179、 250*、 502； 5*、 262； 72*、 443；其中帶 *離子為定量離子，分三段進(jìn)行采集， 特布他林 、 克倫特羅 、 第 階段， 沙丁胺醇 、 第 階段萊克多巴胺 第 階段， 詳見 表 1。 在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖參見附錄 A；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖參見附錄 B。 表 1 4 種 2 種內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間和質(zhì)譜條件 藥物名稱 采集階段 選擇離子 （ m/z） 定量離子 （ m/z） 特布他林 356， 86， 426 356 克倫特羅 86, 243, 262 86 95， 262 95 沙丁胺醇 369， 207， 440 369 372， 443 372 萊克多巴胺 250, 179, 502 250 相色譜 性 方法 在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物與同時(shí)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間 之差在 2并且所選擇的離子相對(duì)豐度比符合表 2要求，可判定為樣品中存在該藥物殘留。 表 2 試樣離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)離子豐度比的允許偏差范圍 占基峰相對(duì)豐度（） 最大 允許偏差（ ） 50 10 20 50 15 10 20 20 10 50 量 方法 624 2006 4 以峰面積按內(nèi)標(biāo)法 進(jìn)行單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn) 定量 ，標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣品液中藥物響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)線性范圍內(nèi)。 以 m/z 95） 作為 計(jì)算克倫特羅（ m/z 86）和萊克多巴胺（ m/z 250）濃度 的內(nèi)標(biāo)物 ，以 m/z 372） 作為 計(jì)算特布他林（ m/z 356）和沙丁胺醇（ m/z 369）濃度 的內(nèi)標(biāo)物 。 7 結(jié)果計(jì)算 按內(nèi)標(biāo)法單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)計(jì)算試樣中 4種 2 試樣中 4種 2含量按下式計(jì)算： A X D M 式中： X 試樣中 2組分 的含量 ， g/ A 試樣 色譜峰對(duì)應(yīng)的 2組分 的質(zhì)量 ， M 試樣 質(zhì) 量 ， g； D 稀釋倍數(shù) ； 計(jì)算結(jié)果保留 3位有效數(shù)字。 8 精密度 在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與算術(shù)平均值之比應(yīng)不大于 20。 9 回收率 本方法回收率在 60 130之間。 624 2006 5 圖 2 1. 特布他林（ , 2. , 3. 克倫特羅（ , , 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 100002000030000400005000060000700008000090000100000110000T i m e - - A b u n d a n c C : s 4,5 6 3 附錄 A (資料性附錄 ) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)總離子流圖 624 2006 6 附錄 B (資料性附錄 ) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)譜圖 圖 2） A. B. 40 60 80 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 005 0 0 0 01 0 0 0 0 01 5 0 0 0 02 0 0 0 0 02 5 0 0 0 03 0 0 0 0 03 5 0 0 0 04 0 0 0 0 04 5 0 0 0 05 0 0 0 0 05 5 0 0 0 06 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c 83 (m 21 8 7 2 1 2 2 7 82 4 61 3 3 1 6 71 1 7 3 4 21 5 159 2 3 2 3 5 73 2 32 9 440 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 34002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0 02 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c 03 (m 51117102 226 333291 35031750 100 150 200 250 300 350 400 450 500020000400006000080000100000120000140000160000180000200000220000240000260000280000300000m / z - - A b u n d a n c eS ca n 6 6 6 (13 6 m : n 2 94 440177117 339232317 490 535396 46540 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 420 44002 0 0 0 04 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 01 0 0 0 0 01 2 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 01 8 0 0 0 02 0 0 0 0 02 2 0 0 0 02 4 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c eS 37 (m 81251193 223 299115 165 319 373 40850 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 5 5 002 0 0 0 0 04 0 0 0 0 06 0 0 0 08 0 0 0 0 01 0 0 0 0 0 01 2 0 0 0 0 01 4 0 0 0 01 6 0 0 0 0 01 8 0 0 0 0 0m / z - - A b u n d a n c eS ca n 16 4 9 (19 4 m : n 6 71 7 95 0 22 3 41 4 9 2 0 53 9 991 1 1 7 3 4 02 9 74 2 83 7 2 4 5 74 7 93 1 8 5 3 340 60 80 1 0 0 1 2 0 1 4 0 1 6 0 1 8 0 2 0 0 2 2 0 2 4 0 2 6 0 2 8 0 3 0 0 3 2 0 3 4 0 3 6 0 3 8 0 4 0 0 4 2 0 4 4 0 4 6 001 0 0 0 0 02