動(dòng)物血液原蟲(chóng)病病原檢查技術(shù)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊笳莆談?dòng)物血液原蟲(chóng)病的血液涂片技術(shù)和染色方法；正確判斷各種常見(jiàn)血液原蟲(chóng)的形態(tài)特點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)器材（一）儀器設(shè)備 生物顯微鏡（帶油鏡鏡頭）、載玻片、注射針頭、剪刀、染色缸（二）試劑 姬姆薩氏染料、甘油、甲醇、香柏油（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雞（四）示教標(biāo)本 1 伊氏錐蟲(chóng)2 雙芽巴貝斯蟲(chóng)3 環(huán)形泰勒蟲(chóng)4 卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)5 沙氏住白細(xì)胞蟲(chóng)三、實(shí)驗(yàn)方法、步驟和操作要領(lǐng)（一）姬姆薩氏染色液的配制1姬姆薩氏染色液原液配方。 姬姆薩氏染色粉 0.5g 中性純甘油 25ml 無(wú)水中性甲醇 25ml2 姬姆薩氏染色液原液配制過(guò)程。（1）先將姬姆薩氏染色粉置研缽中，加少量甘油充分研磨，再加甘油再研磨，直至甘油全部加完為止。將其倒入棕色小口試劑瓶中，在研缽中加入少量甲醇以沖洗甘油染液，沖洗液仍倒入上述瓶中，再加甲醇再洗再倒入，直至25 ml甲醇全部用完為止。（2）塞緊瓶蓋，充分搖勻，而后將瓶置于65溫箱中24h或室溫35d，并不時(shí)搖動(dòng)，然后過(guò)濾到棕色小口試劑瓶中，即為原液。 （二）血液涂片的制作及染色 1血液涂片的制作。（1）薄片法（適合于觀察紅細(xì)胞內(nèi)蟲(chóng)體，如巴貝斯蟲(chóng)）。 用消毒注射針頭刺破雞的翅下靜脈。 用潔凈載玻片的一端，從雞的翅下靜脈穿刺處接觸血滴表面，蘸取少量血液。 另取一塊邊緣光滑的載玻片，作為推片。先將此推片的一端置于血滴的前方，然后稍向后移，觸及血滴，使血液均勻分布于兩玻片之間，形成一線。 推片載玻片與血片載玻片成3045角，平穩(wěn)地向前推進(jìn)，使血液接觸面散布均勻，即成薄的血片。 抹片完成后，立即置流動(dòng)空氣中干燥，以防血球皺縮或破裂，并加甲醇固定，待干。（2）厚滴法（適合于觀察血漿內(nèi)蟲(chóng)體，如伊氏錐蟲(chóng)）。 取血液12滴置潔凈載玻片上。 用另一塊載玻片之角，將血滴涂散至直徑1cm即可。 置室溫中待其自行干燥(至少經(jīng)1h之久，否則血膜附著不牢，染色時(shí)易脫)。 染色前先將血片置于蒸餾水中，使紅細(xì)胞溶解，血紅蛋白脫落，血膜呈灰白色為止，再進(jìn)行染色。2血液涂片的染色過(guò)程。（1）血片用甲醇固定2 min。（2）將血片浸于用10份蒸餾水加1份染液稀釋的染色液缸中30 min (過(guò)夜最好)?；?qū)⒄麴s水與染液按21稀釋好的染色液直接滴加于血片上，染色10 min 。（3）血片取出后，用潔凈的水沖洗。待干鏡檢。附：血液涂片的制作及染色流程圖。（圖16-1） 圖16-1 血液抹片的制作及染色流程圖四、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1配制染色液時(shí)姬姆薩氏染料必須充分研磨。2采血前先用酒精棉消毒待干，以免皮屑污染血片和酒精溶血。3取血滴時(shí)必須在針頭刺破后流出的表層血液用玻片迅速蘸取，以免血液凝固。4注意在病畜出現(xiàn)高溫期，未作藥物處理前采血，以提高蟲(chóng)體檢出率。5涂片時(shí)血膜不宜過(guò)厚，使紅細(xì)胞均勻分布于玻片上。6血片必須充分干燥后再用甲醇固定，以免血膜脫落。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告如何制作染色效果好且無(wú)雜質(zhì)污染的血液涂片？試作分析、闡述。附：參考資料 1家畜常見(jiàn)血液原蟲(chóng)的形態(tài)特征描述。（1）伊氏錐蟲(chóng)。伊氏錐蟲(chóng)寄生于動(dòng)物血漿內(nèi)，蟲(chóng)體呈紡錘或柳葉狀，體長(zhǎng)1824m，寬12m。前端比后端更尖。經(jīng)姬姆薩染色后，蟲(chóng)體呈淡藍(lán)色。在顯微鏡下可看見(jiàn)下列幾部分構(gòu)造： 原生質(zhì)：淺藍(lán)色部分。 核：在蟲(chóng)體中部呈紫紅色橢圓形。 副基體：在蟲(chóng)體后端呈紫紅色的小圓點(diǎn)。 波動(dòng)膜：在蟲(chóng)體的一側(cè)呈波狀。 鞭毛：在蟲(chóng)體后端，從付基體附近的毛基體開(kāi)始圍繞波動(dòng)膜邊緣，直到蟲(chóng)體的前端游離，呈細(xì)長(zhǎng)鞭毛狀。（圖16-2、圖16-3）圖16-2 錐蟲(chóng)模式圖1.核 2.波動(dòng)膜 3.副基體 4.生毛體 5.顆粒 6.空泡 7.鞭毛圖16-3 血液涂片中的錐蟲(chóng) （2）雙芽巴貝斯蟲(chóng)。雙芽巴貝斯蟲(chóng)寄生在紅細(xì)胞內(nèi)。蟲(chóng)體較大，有梨形、環(huán)形、橢圓形、變形蟲(chóng)形等。典型蟲(chóng)體呈雙梨形，細(xì)的一端聯(lián)在一起成銳角排列。蟲(chóng)體大于紅細(xì)胞半徑，經(jīng)姬姆薩染色后，原生質(zhì)淺藍(lán)色，邊緣較深，有二團(tuán)紫紅色的染色質(zhì)。（圖16-4）圖16-4 血液涂片中的雙芽巴貝斯蟲(chóng)（3）環(huán)形泰勒蟲(chóng)。環(huán)形泰勒蟲(chóng)寄生在牛的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及紅細(xì)胞內(nèi)。配子體呈小環(huán)形，短棒狀或逗點(diǎn)狀。在每個(gè)紅細(xì)胞中通常有15個(gè)蟲(chóng)體，大小為0.72.9m，染色后原生質(zhì)呈淺藍(lán)色，染色質(zhì)呈紫紅色。（圖16-5）裂殖體，又稱石榴體，有不同形狀和大小，存在于淋細(xì)胞的胞漿中或淋巴液中。通?？煽吹綔\藍(lán)色的原生質(zhì)背景上有暗紫色數(shù)目不等的染色質(zhì)核。（圖16-6）圖16-6 泰勒蟲(chóng)裂殖體（石榴體）圖16-5 泰勒蟲(chóng)配子體 2家禽常見(jiàn)血液原蟲(chóng)的形態(tài)特征描述。（1）卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)?？ㄊ献“准?xì)胞蟲(chóng)配子體寄生在雞的血細(xì)胞內(nèi)。配子體剛侵入紅細(xì)胞時(shí)呈圓點(diǎn)狀或逗點(diǎn)，每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)可有13蟲(chóng)體（圖16-7）。隨著蟲(chóng)體的發(fā)育長(zhǎng)大，紅細(xì)胞的胞漿及胞核萎縮消失，配子體變?yōu)榻鼒A形，大小為15.515.0；有一紫紅色的核仁（圖16-8）。圖16-7 卡氏住白細(xì)胞蟲(chóng)第期配子