書書書犌犅前言本標準代替顯性致死試驗。本標準與相比，主要變化如下：標準名稱修改為“食品安全國家標準嚙齒類動物顯性致死試驗”；增加了術語和定義；修改了試驗目的和原理；修改了試驗方法；修改了數(shù)據(jù)處理；增加了試驗報告；增加了試驗的解釋。犌犅食品安全國家標準嚙齒類動物顯性致死試驗范圍本標準規(guī)定了嚙齒類動物顯性致死試驗的基本試驗方法和技術要求。本標準適用于評價受試物的致突變作用。術語和定義顯性致死突變發(fā)生于生殖細胞的一種染色體畸變，這種遺傳上的結構或數(shù)目改變并不引起生殖細胞（精子或卵子）的機能障礙，而是直接造成受精卵或發(fā)育期胚胎的死亡。試驗目的和原理顯性致死試驗是檢測受試物誘發(fā)哺乳動物生殖細胞遺傳毒性的試驗方法，其觀察終點為顯性致死突變。致突變物可引起哺乳動物生殖細胞染色體畸變，以致不能與異性生殖細胞結合或導致受精卵在著床前死亡，或導致胚胎早期死亡。一般以受試物處理雄性嚙齒類動物，然后與雌性動物交配，按照順次的周期對不同發(fā)育階段的生殖細胞進行檢測，經過適當時間后，處死雌性動物檢查子宮內容物，確定著床數(shù)、活胚胎數(shù)和死亡胚胎數(shù)。如果處理組死亡胚胎數(shù)增加或活胚胎數(shù)減少，與對照組比較有統(tǒng)計學意義，并呈劑量反應關系或試驗結果能夠重復者，則可認為該受試物為哺乳動物生殖細胞的致突變物。試驗方法受試物受試物的配制：受試物應溶解或懸浮于合適的溶媒中，溶媒應為無毒物質，不與受試物發(fā)生化學反應。首選溶媒為水，脂溶性的受試物可使用食用植物油（如橄欖油、玉米油等），不溶于水或油的受試物可使用羧甲基纖維素、淀粉等配成混懸液，不能配制成混懸液時，還可配制成如糊狀物的其他形式。一般情況下受試物應現(xiàn)用現(xiàn)配，有資料表明其溶液或混懸液儲存穩(wěn)定者除外。給予途徑：應采用灌胃法，或用喂飼法，小鼠常用灌胃體積為體重體重，大鼠常用灌胃體積為體重。陽性對照物也可采用腹腔注射的方法，注射體積為體重體重。給予受試物的方式：一般采用每天次、連續(xù)的給予方式。如果認為其他方式合理的也可采用，如一次性或連續(xù)個月給予受試物。實驗動物動物品系與級別：動物品系應選擇顯性致死本底值低、受孕率高且著床數(shù)多、經生殖能力預試受孕率在以上者，推薦使用小鼠或大鼠。實驗動物應符合和的有關規(guī)定且有質量犌犅合格證，健康的雄性成年小鼠（性成熟，周齡周齡，或體重以上），或大鼠（性成熟，周齡周齡，或體重以上）。交配用的成年雌鼠，應該是未曾有過交配和生育史者，不同交配周期的雌鼠周齡、體重應相近似。動物數(shù)量：應使用適當數(shù)目的雄性動物，雄鼠的數(shù)目應足以使每個交配周期每組產生只只受孕雌鼠。每組雄鼠應不少于只。動物飼養(yǎng)：實驗動物飼養(yǎng)條件應符合、飲用水應符合、飼料應符合的有關規(guī)定。劑量試驗至少設個受試物劑量組，高劑量組應能引起動物出現(xiàn)某些毒性體征，如生育力輕度下降，高劑量組受試物劑量可在之間。急性毒性試驗給予受試物最大耐受劑量（最大使用濃度和最大灌胃容量）求不出時，則以體重、或人體可能攝入量的倍、或受試物最大給予劑量為最高劑量，然后在此劑量下再設個劑量組。一般應同時做陽性和陰性（溶媒）對照組，如果同一實驗室最近個月內陽性對照組巳獲得陽性結果，且實驗室環(huán)境條件和動物品系沒有變化，則可不再設陽性對照組。陽性對照物常選用環(huán)磷酰胺（），體重體重，腹腔注射，每天次，連續(xù)；其他還可選用三亞乙基密胺（）、甲基磺酸乙酯（）、甲基磺酸甲酯（）等。試驗步驟和觀察指標交配：給予雄鼠受試物后次日（一次染毒法），或末次給予雄鼠受試物后次日（多次染毒法），雄鼠與雌鼠按或比例同籠交配后，或根據(jù)陰道精子、陰栓檢查確定交配成功后，取出雌鼠另行飼養(yǎng)。間隔后，雄鼠以同樣比例再與另一批雌鼠同籠交配，小鼠如此進行批批，大鼠批批。胚胎檢查：以雄鼠與雌鼠同籠日期算起第天第天，處死雌鼠后，剖腹取出子宮，檢查并記錄每一雌鼠的活胚胎數(shù)、早期死亡胚胎數(shù)與晚期死亡胚胎數(shù)。胚胎存活或死亡的鑒別方法如下：活胎：完整成形，色鮮紅，有自然運動，機械刺激后有運動反應。早期死亡胚胎：胚胎形體較小，外形不完整，胎盤較小或不明顯。最早期死亡胚胎會在子宮內膜上隆起一小瘤。如已完全被吸收，僅在子宮內膜上留一隆起暗褐色點狀物。晚期死亡胚胎：成形，色澤暗淡，無自然運動，機械刺激后無運動反應。數(shù)據(jù)處理和結果評價數(shù)據(jù)處理統(tǒng)計分析方法顯性致死試驗的檢查結果，以試驗組為單位分別計算每個交配周期的下列指標。按試驗組與對照組動物的各項指標分別采用適當?shù)慕y(tǒng)計分析方法，如檢驗、單因素方差分析或秩和檢驗等，以評定受試物的致突變性。受孕率可用檢驗，平均著床數(shù)、平均死亡胚胎數(shù)可用單因素方差分析或秩和檢驗法，胚胎死亡率經反正弦轉換后用單因素方差分析或秩和檢驗。生育能力指標生育能力指標按式（）式（）計算：犌犅受孕率受孕雌鼠數(shù)交配雌鼠數(shù)（）總著床數(shù)活胚胎數(shù)早期死亡胚胎數(shù)晚期死亡胚胎數(shù)（）平均著床數(shù)總著床數(shù)受孕雌鼠數(shù)（）顯性致死指標顯性致死指標按式（）式（）計算：死亡胚胎數(shù)早期死亡胚胎數(shù)晚期死亡胚胎數(shù)（）胚胎死亡率死亡胚胎數(shù)總著床數(shù)（）平均死亡胚胎數(shù)死亡胚胎數(shù)受孕雌鼠數(shù)（）結果評價主要依據(jù)顯性致死指標的結果進行判定：）試驗組與對照組相比較，胚胎死亡率（）和（或）平均死亡胚胎數(shù)明顯高于對照組，有統(tǒng)計學意義并有劑量反應關系時，即可確認為陽性結果。）若統(tǒng)計學上差異有顯著性，但無劑量反應關系時，則應進行重復試驗，結果能重復者可確定為陽性。與此同時，應在綜合考慮生物學意義和統(tǒng)計學意義的基礎上做出最終評價。試驗報告試驗名稱、試驗單位名稱和聯(lián)系方式、報告編號。試驗委托單位名稱和聯(lián)系方式、樣品受理日期。試驗開始和結束日期、試驗項目負責人、試驗單位技術負責人、簽發(fā)日期。試驗摘要。受試物：名稱、批號、劑型、狀態(tài)（包括感官、性狀、包裝完整性、標識）、數(shù)量、前處理方法、溶媒。實驗動物：物種、品系、級別、數(shù)量、年齡或體重、性別、來源（供應商名稱、實驗動物生產許可證號）、動物檢疫、適應情況，實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境（溫度、相對濕度、實驗動物使用許可證號），飼料來源（供應商名稱、實驗動物飼料生產許可證號）。試驗方法：試驗分組、每組動物數(shù)、陽性和陰性（溶媒）對照組，選擇劑量的原則或依據(jù)、劑量、受試物給予途徑及期限，試驗周期、交配程序、確定是否交配成功的方法、動物處死時間、觀察指標、統(tǒng)計學方法。試驗結果：以文字描述和表格逐項進行匯總，包括中毒體征、妊娠情況、著床數(shù)、活胚胎數(shù)、死亡胚胎數(shù)及相關指標（胚胎死亡率、平均死亡胚胎數(shù)），給出結果的統(tǒng)計處理方法。試驗結論：根據(jù)觀察到的效應和產生效應的劑量