中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)010中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布 2010布 2010施食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 of 1in 010 I 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替 幼兒配方食品和乳粉 維生素 本標(biāo)準(zhǔn)與 要變化如下： 標(biāo)準(zhǔn)名稱改為嬰幼兒食品和乳品中維生素 取消了原標(biāo)準(zhǔn)第一法（熒光分光光度法）； 對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了修改； 外標(biāo)法定量采用多點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線法； 在結(jié)果計(jì)算時(shí)明確樣品中維生素 增加附錄 本標(biāo)準(zhǔn)附錄 本標(biāo)準(zhǔn)所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為： 413 010 1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中維生素 本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒食品和乳品中維生素 2 規(guī)范性引用文件 本標(biāo)準(zhǔn)中引用的文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 3 原理 樣品在稀鹽酸環(huán)境中恒溫水解，酶解，樣液用堿性鐵氰化鉀衍生，正丁醇（或異丁醇）萃取后，經(jīng)相色譜柱分離，用熒光檢測器（ 375 435 測，外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為 6682 規(guī)定的一級(jí)水。 正丁醇或異丁醇。 鐵氰化鉀。 氫氧化鈉。 濃鹽酸。 三水乙酸鈉。 冰乙酸。 甲醇：色譜純。 維生素 胺素鹽酸鹽或硫胺素硝酸鹽，純度 99 %。 鐵氰化鉀溶液（ 20 g/L） ：稱取 2 g 鐵氰化鉀（ ，用水溶解并定容至 100 用前配制。 氧化鈉溶液（ 100 g/L） ：稱取 25 g 氫氧化鈉（ ，用水溶解并定容至 250 性鐵氰化鉀溶液：將 5 氰化鉀溶液（ 200 氧化鈉溶液（ 合。臨用前配制。 酸（ 0.1 ） ：吸取 9 鹽酸（ ，溶于 1000 中。 酸（ ） ：吸取 0.1 鹽酸（ 50 水稀釋并定容至 500 010 2 酸鈉溶液（ ） ：稱取 g 三水乙酸鈉（ ，加 900 溶解，用冰乙酸（ 至 容至 1000 m 微孔濾膜過濾。 酸鈉溶液（ 2.0 ） ：稱取 g 三水乙酸鈉（ ，用水溶解并定容至 100 合酶溶液， 稱取 g 木瓜蛋白酶 （活力單位 600 U/g） 、 g 淀粉酶 （活力單位 4000 U/g） ，用水溶解并定容至 50 用前配制。 準(zhǔn)溶液 生素 500 g/稱取相當(dāng)于硫胺素 50 確至 0.1 維生素 ，用 鹽酸（ 解并定容于 100 于 0 4 冰箱中，保存期為 3個(gè)月。 生素 確吸取 準(zhǔn)儲(chǔ)備液（ ， 用水稀釋并定容至 100 溶液中維生素 10 g/用前配制。 生素 別吸取維生素 0 用水溶解并定容至 100 該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為 0 g/g/g/g/g/g/用前配制。 5 儀器和設(shè)備 高效液相色譜儀，帶有熒光檢測器。 高壓滅菌鍋。 離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 4000 轉(zhuǎn) /分鐘。 ：精度 組織搗碎機(jī)（轉(zhuǎn)速在 0 轉(zhuǎn) /分鐘 12000 轉(zhuǎn) /分鐘可調(diào)）。 m 微孔有機(jī)濾膜。 天平：感量為 6 分析步驟 試樣的處理 液提取 稱取 5 g 10 g（精確至 g）試樣（如有必要，將試樣放入搗碎機(jī)中搗碎；試樣中含維生素 100 60 .1 鹽酸（ 充分搖勻，用棉花塞和牛皮紙封口，放入高壓滅菌鍋內(nèi)，在 121 下保持 30 冷卻至 40 以下后取出，輕搖數(shù)次；用 2.0 乙酸鈉溶液（ 至 右，加入 2.0 根據(jù)酶活力不同適當(dāng)調(diào)整用量）混合酶液（ 搖勻后，置于 37 的培養(yǎng)箱中過夜；將酶解液轉(zhuǎn)移至 100 水定容至刻度，濾紙過濾，取濾液備用。 液衍生化 取上述濾液 25 塞比色管中，加入 5 性鐵氰化鉀（ 充分混勻后，加 丁醇（或異丁醇）（ 強(qiáng)烈振蕩后靜置約 10 分分層，吸取正丁醇（或異丁醇）相（上層）于 4000 轉(zhuǎn) /分鐘 6000 轉(zhuǎn) /分鐘離心 5 上清液經(jīng)有機(jī)微孔濾膜過濾（ 供進(jìn)樣用。 010 3 另取 準(zhǔn)工作液（ 與試液同步進(jìn)行衍生化。 注1： 室溫條件下衍 生產(chǎn)物在 4 h 內(nèi)穩(wěn)定。 注2： 作過程應(yīng)在避免強(qiáng)光照射的環(huán)境下進(jìn)行。 測定 譜參考條件 色譜柱： 徑 5 m， 250 4.6 相當(dāng)者。 流動(dòng)相： 乙酸鈉溶液（ 甲醇（ = 65+35。 流速： mL/ 檢測波長：激發(fā)波長 375 射波長 435 進(jìn)樣量： 20 L。 準(zhǔn)曲線繪制 將維生素 生物依次按上述推薦色譜條件上機(jī)測定，記錄色譜峰面積，色譜圖參見附錄 A。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 液測定 將試液衍生物按上述推薦色譜條件進(jìn)樣測定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得試液相應(yīng)的濃度。 7 分析結(jié)果的表述 試樣中維生素 1）計(jì)算： cV100 X （ 1） m1000 式中： X 試樣中維生素 硫胺素計(jì)） ，單位為毫克每百克（ 00 g） ； c 試液的進(jìn)樣濃度，單位為微克每毫升（ g/； V試樣定容體積，單位為毫升（ ； m 試樣質(zhì)量，單位為克（ g） 。 以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。