畢業(yè)論文（設(shè)計）題目金銀花中綠原酸提取工藝的優(yōu)化指導(dǎo)老師專業(yè)班級生物技術(shù)及應(yīng)用0701姓名學(xué)號2010年5月30日摘要采用正交實驗設(shè)計方法，篩選一種金銀花中的綠原酸提取工藝。研究主要利用微波與超聲波技術(shù)，考察提取時間、溫度、料液比及提取溶劑濃度對綠原酸提取效率的影響，然后運(yùn)用極差分析方法優(yōu)化提取工藝參數(shù)；研究結(jié)果表明，微波提取中PH值為4，提取時間3MIN，料液比120，乙醇濃度55為最佳提取條件；超聲波提取中PH值為4，提取時間60MIN，料液比125，乙醇濃度55為最佳提取條件；兩種提取方法提取率依次為986和862。從經(jīng)濟(jì)，效率等綜合因素比較得出，微波提取法是一種比較好的提取方法。關(guān)鍵詞金銀花綠原酸正交試驗設(shè)計微波提取法超聲波提取法目錄引言11材料與方法111實驗材料112試劑113主要儀器114實驗方法2141試驗流程2142綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立2143微波提取法正交實驗3144超聲提取法正交實驗42結(jié)果與分析521綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制322微波提取法正交實驗結(jié)果322超聲波提取法正交實驗結(jié)果53結(jié)論6參考文獻(xiàn)7引言金銀花為中醫(yī)常用藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱的功能。全世界忍冬科植物約200種，我國有98種，廣布于全國各地，而以西南部種類最多，其中可供藥用的品種達(dá)47種。其主要活性成分為綠原酸，另外還有黃酮類、揮發(fā)油等活性成分。綠原酸具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝利膽等方面的藥理作用，千年傳統(tǒng)經(jīng)驗及近代藥理實驗和臨床應(yīng)用都證明金銀花對于多種病菌有較強(qiáng)的抗菌作用和較好的治療效果，因此對綠原酸的深入研究具有重要意義1,2。目前金銀花中提取綠原酸的方法主要有五類水提法，醇提法，酶解法，超聲波法，微波法3。本實驗以金銀花為材料，選用了微波提取法和超聲波提取法，通過改變金銀花的提取因素（時間，PH值，料液比，乙醇濃度），建立正交實驗表，來確定最佳提取條件，并且比較了微波提取法和超聲波提取法之間的優(yōu)劣，為開發(fā)利用金銀花中綠原酸資源提供科學(xué)依據(jù)4。1材料與方法11實驗材料金銀花（山東平邑）綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所）12試劑95乙醇，去離子水13主要儀器分光光度計（752N上海精密科學(xué)儀器有限公司）分析天平（SPS202F梅特勒托利多稱重設(shè)備系統(tǒng)有限公司）冷凍干燥儀（12LD德國ALPHA）超聲波清洗器（KQ500DA昆山市超聲儀器有限公司）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE52AA上海亞榮生化儀器廠）真空泵（SHBIII鄭州長城科工貿(mào)有限公司）粉碎機(jī)（XA1江蘇金塘市江南儀器廠）14實驗方法141試驗流程根據(jù)試驗設(shè)計方案，其實驗流程如下金銀花105烘干2H粉碎機(jī)粉碎超聲波（微波）提取過濾定容稀釋紫外檢測計算提取率142綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立用分析天平精確稱取綠原酸對照品00203G，以濃度為95的乙醇溶液定容于100ML棕色容量瓶中，作為母液。利用該母液配置一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以濃度為95的乙醇溶液為參比，在324NM下測定其吸光度。以吸光度Y為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度X為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。143微波提取法正交實驗在微波功率600，提取次數(shù)為兩次的條件下，以PH值，提取時間，料液比，乙醇濃度為考察因素，每個因素選取3個水平，建立L934正交表5,6,7。表11試驗因素水平表水平APH值B提取時間MINC料液比D乙醇濃度121115402421205536312570144超聲波提取法正交實驗在超聲功頻率40KHZ，電功率500W，40，提取次數(shù)為兩次條件下，以PH值，提取時間，料液比，乙醇濃度為考察因素，每個因素選取3個水平進(jìn)行設(shè)計，建立L934正交表8,9。表12試驗因素水平表水平APH值B提取時間MINC料液比D乙醇濃度1230115402445125553660135702結(jié)果與分析21綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表21綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Y00338X00087R2099920000100200300400500600700510152025綠原酸濃度UG/ML吸光數(shù)值A(chǔ)圖21綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線由圖21得出，回歸方程Y00338X00087，線性范圍為3216G/ML，相關(guān)系數(shù)R09992。22微波提取法正交實驗結(jié)果綠原酸濃度UG/ML32649612816吸光度值A(chǔ)01130231033304330556表22微波提取法正交實驗設(shè)計表因素APH值B提取時間MINC料液比D乙醇濃度提取率實驗11111855實驗2122296實驗31333972實驗42123990實驗52231984實驗62312944實驗731321006實驗83213947實驗93321956K12785280427462810K22917289728992910K32909287029662900優(yōu)水平A2B3C3D2RJ0440011707300363見表22，用極差分析法對試驗結(jié)果進(jìn)行分析，從表中的RJ值可知，試驗因素影響的大小料液比PH值乙醇濃度提取時間。比較各K值，得到優(yōu)化水平為A2、B3、C3、D2，最佳組合為A2B3C3D2，即PH值為4，提取時間3MIN，料液比125，乙醇濃度55為最佳提取條件。表23微波提取法方差分析表因素偏差平方和自由度FCF005F001PH值03652097244608650提取時間00472012544608650料液比08482225844608650乙醇濃度02422064444608650誤差8見表23，從方差分析可知，料液比的影響大于其它因素，但FC均小于F005和F001，可見提取因素對綠原酸的提取影響小，因此從經(jīng)濟(jì)高效等原因考慮，為節(jié)約時間，降低能耗，因此選用PH值為4，提取時間3MIN，料液比125，乙醇濃度55為最佳提取條件，提取率為986。23超聲波提取法正交實驗結(jié)果表24超聲波提取法正交實驗設(shè)計表見表24，用極差分析法對試驗結(jié)果進(jìn)行分析，從表中的RJ值可知，實驗因素影響的大小乙醇濃度料液比提取時間PH值。比較各K值，得到優(yōu)化水平為A2、B2、C3、D3，最佳組合為A2B2C3D3，即PH值為4，提取時間60MIN，料液比125，乙醇濃度55為最佳提取條件。因素APH值B提取時間MINC料液比D乙醇度提取率實驗11111598實驗21222884實驗3133391實驗42123894實驗52231818實驗62312805實驗73132838實驗83213839實驗93321753K12392233022962169K22817259525312527K32484246825662697優(yōu)水平A2B2C3D3RJ0417088309001760表25超聲波提取法素方差分析表因素偏差平方和自由度FCF005F001PH值02802014544608650提取時間11712060644608650料液比14372074444608650乙醇濃度48432250644608650誤差7738見表25，從方差分析中可知，乙醇濃度的影響大于其它因素，F(xiàn)C均小于F005和F001，可見提取因素對提取率影響小，因此從經(jīng)濟(jì)高效等原因考慮，為節(jié)約時間，降低能耗，因此選用PH值為4，提取時間60MIN，料液比120，乙醇濃度55為最佳提取條件，提取率為862。3結(jié)論微波提取法最優(yōu)條件進(jìn)行提取PH值為4，提取時間3MIN，料液比120，乙醇濃度55，提取率為986。超聲波波提取法最優(yōu)條件進(jìn)行提取PH值為4，提取時間3MIN，料液比120，乙醇濃度55，提取率為862。通過綜合因素比較，對于金銀花中綠原酸的提取,微波提取法提取率高，省時，經(jīng)濟(jì)，是一種比較好的提取方法10。金銀花為中醫(yī)常用藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱的功能，其主要活性成分為綠原酸，具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝利膽等方面的藥理作用。本實驗對金銀花中綠原酸提取方法進(jìn)行了摸索，確定了一種比較好的提取方法，為開發(fā)利用金銀花中綠原酸資源奠定了基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)1孫健,吳國娟綠原酸的研究進(jìn)展J北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2009,2754562邢俊波,李萍,劉云綠原酸的研究進(jìn)展J時珍國醫(yī)國藥,2002,1343463聶凌鴻,岳淼金銀花中綠原酸提取工藝的優(yōu)化J食品研究與開發(fā),2008,2951544梁玉敏,王進(jìn)美,李懷斌金銀花中綠原酸提取工藝比較與優(yōu)化探討J遼寧中醫(yī)雜志,2008,352622645史克莉,孔一凡正交法優(yōu)選金銀花微波提取工藝的研究J湖北中醫(yī)學(xué)院雜志,2007,2954556劉志平,韓偉,李想金銀花中綠原酸的微波輔助提取J華東理工大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版,2008,345435467余建平,林