學科分類號0818本科生畢業(yè)論文設計題目（中文）藤茶對食品的防腐抑菌研究（英文）THEPRESERVATIVERESEARCHOFRATTANINFOOD學生姓名彭璐璐學號0512402025系別生命科學系專業(yè)生物工程指導教師劉勝貴起止日期20081200952009年5月16日懷化學院本科畢業(yè)論文（設計）誠信聲明作者鄭重聲明所呈交的本科畢業(yè)論文（設計），是在指導老師的指導下，獨立進行研究所取得的成果，成果不存在知識產(chǎn)權爭議。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，論文不含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的成果。對論文的研究做出重要貢獻的個人和集體均已在文中以明確的方式標明。本聲明的法律結果由作者承擔。本科畢業(yè)論文（設計）作者簽名彭璐璐2009年5月16日目錄摘要1關鍵詞1ABSTRACT2KEYWORDS2前言31材料與方法411材料4111試驗樣品4112生化試劑4113供試菌種4114供試食品4115實驗儀器5116培養(yǎng)基512方法5121水提取物制備5122菌懸液制備5123抗微生物活性試驗6124最低抑菌濃度（MIC）測定6125食品溶液制備7126抑菌食品溶液制備7127食品防腐測驗82結果921不同月份顯齒蛇葡萄葉抗微生物活性。10227月份顯齒蛇葡萄葉最低抑菌濃度（MIC）1023抑菌食品溶液防腐實驗結果11231牛奶抑菌食品液11232豆?jié){抑菌食品液12233西瓜抑菌食品液13234肉湯抑菌食品液143討論15參考文獻16致謝17藤茶對食品的防腐抑菌研究摘要為研究藤茶類植物對食品的防腐抑菌效果，采摘顯齒蛇葡萄葉作為試驗材料，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、枯草芽孢桿菌、腐生葡萄球菌6種微生物為試驗菌株，用藥敏紙片擴散法測定不同月份的顯齒蛇葡萄葉抑菌圈直徑，通過二倍稀釋法測定MIC值，以平板菌落計數(shù)法進行食品防腐測驗。結果表明葉提取物對腐生葡萄球菌抑菌作用最強，不同月份的抑菌圈直徑分別為91、182、123MM；抑菌效果最強的7月份葉MIC為00078G/ML；1/2MIC、1MIC濃度抑菌食品溶液對細菌生長有一定的抑制作用，但防腐作用都不太明顯，而2MIC、和4MIC濃度抑菌食品溶液都可相對的延長食品溶液保質時間，相比較對肉湯和牛奶防腐作用更強，對西瓜和豆?jié){防腐作用較弱。結論說明藤茶植物有抑菌作用，而且對肉類、奶制品、水果和豆制品都有防腐作用。關鍵詞顯齒蛇葡萄；水提取物；藥敏紙片擴散法；二倍稀釋法；菌落計數(shù)法THEPRESERVATIVERESEARCHOFRATTANINFOODABSTRACTFORTHESTUDYOFTHERATTANPLANTSPRESERVATIVEEFFECTINFOOD,PICKEDSOMELEAVESOFAMPELOPSISGROSSEDENTATAASMATERIALS,ADOPTEDECOLI,STAPHYLOCOCCUSAUREUS,PROTEUSVULGARIS,SALMONELLATYPHIMURIUM,BACILLUSSUBTILIS,STAPHYLOCOCCUSSAPROPHYTICASASMICROBIALSTRAINS,USEDDRUGDIFFUSIONSTUDYTHEAMPELOPSISLEAVESBACTERIOSTASISZONEDIAMETERFORDIFFERENTMONTHS,MADEDOUBLEDILUTIONMETHODSTUDYTHEIRMIC,COUNTEDTHENUMBEROFCOLONIESSTUDYITSANTISEPTICEFFECTINFOODTHERESULTSSHOWEDTHATTHEREISTHESTRONGESTINHIBITORYEFFECTFORSTAPHYLOCOCCUSSAPROPHYTICASANDTHEBIGGESTBACTERIOSTASISZONEDIAMETEROF91,182,123MILLIMETER,ANDTHEAMPELOPSISLEAVESFORJULYHADTHESTRONGESTINHIBITORYEFFECTANDITSMINIMUMBACTERIOSTASISCONCENTRATIONISTHE00078G/ML,ANDTHEFOODSBACTERIOSTASISSOLUTIONOF1/2MIC,1MICCONCENTRATIONHADINHIBITORYEFFECTFORBACTERIALGROWTH,BUTLESSOBVIOUSROLEINANTICORROSION,ANDTHEFOODSBACTERIOSTASISSOLUTIONOF2MIC,4MICCONCENTRATIONCOULDRELATIVELYEXTENDTIMEWHICHISTHESHELFLIFEOFFOODSOLUTION,COMPAREDEACHOTHER,THEMEATANDMILKHADBETTEREFFECTTHANFRUITANDSOYTHERESULTSHOWEDTHATRATTANLEAVESHADPRESERVATIVEEFFECTFORMEAT,MILK,FRUITANDSOYKEYWORDSAMPELOPSISGROSSEDENTATAWATEREXTRACTDRUGDIFFUSIONINDISKDOUBLEDILUTIONCOUNTTHENUMBEROFCOLONIES前言藤茶即顯齒蛇葡萄AMPELOPSISGROSSEDENTATA系葡萄科蛇葡萄屬中的一種野生藤本植物，為粵蛇葡萄的變種。顯齒蛇葡萄的嫩葉經(jīng)過殺青、揉捻、烘干而成的“保健茶”制品稱為藤茶，既可用于治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、黃疸型肝炎、皰疔等癥，又可日常沖泡飲用，清涼解渴，是典型的藥食兩用植物。藤茶的形態(tài)特征為小枝圓柱形，有顯著的縱棱紋，無毛，卷須2叉分枝；相隔2節(jié)間斷與葉對生、葉為12回羽狀復葉，2回羽狀復葉者，基部一對為3小葉，小葉卵圓形、卵橢圓形、長橢圓形，長25厘米，寬125厘米，頂端急尖或間尖、基部近圓形，邊緣每側有25個鋸齒，葉面綠色，背面淺綠色，兩面均無毛；聚傘花序，5月現(xiàn)蕾，6月開花，花小，黃綠色，非常袖珍點綴于藤蔓上燦若繁星；漿果紫黑色，可食用，像葡萄一樣開胃。藤茶的適應性很強，喜溫暖濕潤山坡的環(huán)境，一般生長在海拔2001300米的溝谷林中或灌木叢里，廣泛分布于長江以南的廣東、廣西、湖南、湖北西部、江西、福建、云南、貴州等省，喜濕潤而略偏酸性的紅黃壤或肥沃砂質壤土，在砂地或鹽堿地上生長發(fā)育嚴重受阻或不能生存。由于生長環(huán)境遠離工礦區(qū)、城鎮(zhèn)、交通線、人類活動場所及醫(yī)院、避開了三廢污染及病原生物污染。顯齒蛇葡萄以茶葉的形式在食品中的應用有著數(shù)百年的歷史,把顯齒蛇葡萄加工成具有高品質的茶葉在顯齒蛇葡萄應用于食品行業(yè)過程中顯得相當?shù)闹匾?。為得到一條能很好的把顯齒蛇葡萄加工成茶葉的工藝,易誠根據(jù)傳統(tǒng)的民間藤茶加工工藝設計出三條加工工藝,對藤茶成品和成品的茶水以感官評定,選取了一條最佳的工藝原料分級清洗攤放殺青揉捻燜青曬干冷卻回潤密封保存,并通過實驗設定了關鍵工藝參數(shù)將藤茶進行分級后在150160的溫度下殺青,經(jīng)手工揉捻20MIN25MIN,4050下燜青6H12H,太陽光下曬或烘至產(chǎn)品表面呈白霜狀物質出現(xiàn)。目前不少學者對顯齒蛇葡萄的藥理功能已進行了一系列的研究。劉勝貴等人使用藥敏紙片法、試管二倍稀釋法測定了顯齒蛇葡萄對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、雞沙門氏桿菌、糞腸球菌、陰溝腸桿菌等5種細菌的抑菌效果，結果表明顯齒蛇葡萄的根、莖、幼葉提取物對5種細菌均有抑菌作用,以幼葉提取物抑菌效果最強,說明顯齒蛇葡萄具有廣譜高效的抑菌作用,但不同器官的抑菌作用有較大的差別。曾春暉等對藤茶中APS體外抗菌實驗表明APS對標準金黃色葡萄球菌、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌有直接抑制作用,且與藥物劑量呈正相關。廣西中醫(yī)學院覃驪蘭全面分析了藤茶的化學成分及藥理作用研究進展，說明了藤茶有效成分為黃酮類物質,如蛇葡萄素、雙氫楊梅樹皮素、楊梅樹皮素、福建茶素、龍涎香醇、谷甾醇、楊梅黃素、楊梅甙等顯齒蛇葡萄總黃酮為其主要化學成分,含量高達4552，雙氫楊梅樹皮素APS是含量最高的黃酮類化合物,又名雙氫楊梅素、二氫楊梅素、福建茶素、白敬素、蛇葡萄素。張友勝等從顯齒蛇葡萄中分離出4種化合物,分別是蘆丁、沒食子酰D葡萄糖、沒食子酸乙酯和沒食子酸。王華夫等用GC和MS系統(tǒng)測定顯齒蛇葡萄中的香氣組成,鑒定出28種香氣成分,占香精油總量的64,主要成分為反2己烯醛、乙酸順3己烯酯、三甲基吡嗪、苯乙醛、萜品醇、水楊酸甲酯、香葉醇、紫羅酮、順茉莉酮、雪松醇、6,10,14三甲基地十五烷酮等。中國預防醫(yī)學科學院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生研究所對藤茶的營養(yǎng)成分進行了分析,結果如下每100G藤茶產(chǎn)品含水分94G、熱量291KCAL、蛋白質204G、脂肪08G、胡蘿卜素523MG、維生素E632MG、鐵101MG、鋅158MG、鈣411MG、銅067MG、鎂1216MG、錳689MG、鉀4689MG、磷3441MG、膳食纖維146G、硒1062G。與茶葉類相比,其營養(yǎng)成分較齊全,優(yōu)于一般茶葉,可與我國名茶相媲美,而硒的含量高于綠茶和花茶。唐瑛的實驗證明,AGTF能極顯著抑制H2O2誘導的小鼠紅細胞溶血,有較強的抗H2O2誘導氧化的活性小鼠血清體外抗氧化實驗顯示,AGTF可明顯增加小鼠血清抗活性氧能力,從而表明AGTF可增加小鼠血清和紅細胞的抗氧化損傷能力。伍楊等實驗證明鳳鳴藤茶能有效降低小鼠體內(nèi)脂質過氧化水平,防止體內(nèi)抗氧化酶受自由基誘導的氧化損傷,顯著增強機體抗氧化能力。中國醫(yī)學科學院藥物研究所將京湘牌中國藤茶用水醇提取其有效成分,并進行抗菌、抗病毒篩選,結果表明,提取物對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌有抗菌活性,因此具有廣普抗菌作用,其中對5株金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和肺炎桿菌抗菌活性最強對流感甲型及乙型病毒均有抑制作用，根據(jù)實驗結果,京湘牌中國藤茶對流感、肺炎、咽喉炎、結膜炎等病毒與細菌性感染疾病有預防及治療作用。這些研究全面、系統(tǒng)地分析了顯齒蛇葡萄的主要生化成分的含量及組成；探明顯齒蛇葡萄的抗菌效果及藥理。結果表明顯齒蛇葡萄及其提取物具有多種保健作用,包括抗炎鎮(zhèn)痛、止咳、祛痰,保肝護肝、減輕乙醇中毒,抗高血壓、消脂、抗腫瘤。因此藤茶是一種非常寶貴的植物資源，我們要合理的開發(fā)利用。為發(fā)展藤茶資源，許多學者通過選擇顯齒蛇葡萄嫩莖，采用不同培養(yǎng)基質、不同濃度、類型的生長調(diào)節(jié)劑處理，對顯齒蛇葡萄綠枝扦插繁殖技術進行了研究，同時選擇不同的培養(yǎng)基，不同濃度、類型的激素在不同條件下進行顯齒蛇葡萄組織培養(yǎng)育苗試驗的研究。在此基礎上，以顯齒蛇葡萄葉為原料進行藤茶手工加工和藤茶機械加工工藝的研究；以加工的藤茶為原料，進行藤茶袋泡茶及藤茶飲料生產(chǎn)工藝的研究。使之在不影響顯齒蛇葡萄生態(tài)資源的情況下，能盡可能得滿足人們對它在茶飲用和作為藥物原材料上的需求。1材料與方法11材料111試驗樣品顯齒蛇葡萄葉，于2008年4月、7月、11月采自湖南通道侗族自治縣。112生化試劑蛋白胨（生化試劑，上海東海制藥廠出品），酵母浸粉（生化試劑，北京奧博星生物技術責任有限公司），瓊脂粉（生化試劑，北京奧博星生物技術責任有限公司），NACL（分析純，成都市金山化工試劑廠），NAOH（分析純，天津市化學試劑批發(fā)部經(jīng)銷）。113供試菌種大腸桿菌ESCHERICHIACOLI，金黃色葡萄球菌STAPHYLOCOCCUSAUREUSCCTCCAB91053，普通變形桿菌PROTETEUSVULGARISCCTCCAB91103，鼠傷寒沙門氏菌（SALMONELLATYPHI），枯草芽孢桿菌BACILLUSSUBTILIS，腐生葡萄桿菌STAPHYLOCOCCUSSAPROPHYTIC，以上菌種均由懷化學院微生物學實驗室提供。114供試食品牛奶，豆?jié){，鮮豬肉，新鮮西瓜均為市售。115試驗儀器立式壓力蒸汽滅菌器（YXQLS50S1，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠），電熱恒溫培養(yǎng)箱（DHP2000型，天津市華北實驗有限公司），CJ型水平層流凈化工作臺（蘇州潔凈技術研究所制造），SIGMA3K18型離心機德國SIGMA公司生產(chǎn)，QYQ1000UL/QYQ200UL移液槍（北京青云航空儀表有限公司生產(chǎn)）。116培養(yǎng)基LBLURIABERTANI液體培養(yǎng)基蛋白胨10G，NACL10G，酵母粉5G，用1MOL/LNAOH調(diào)節(jié)PH70，蒸餾水定容至1000ML。LB固體培養(yǎng)基在LB液體培養(yǎng)基中加16的瓊脂粉。于01MPA、121下滅菌1520MIN，置于潔凈環(huán)境備用。12方法121水提取物制備顯齒蛇葡萄提取物制備方法按照文獻6進行改進。將顯齒蛇葡萄葉洗凈，于60恒溫箱中烘干至恒重，用組織粉碎機粉碎后，稱取4月、7月、11月葉粉末每種30G，分別加入100ML蒸餾水，待煮沸后再用文火煎30MIN，濾出煎液，在濾渣中加100ML蒸餾水再用文火煎30MIN，把兩次煎液混合，于8000R/MIN離心10MIN，去除沉淀，并將煎液濃縮至30ML，制備成的提取物濃度為1G/ML，4冰箱保存?zhèn)溆谩?22菌懸液制備菌懸液制備方法按文獻進行。將供試菌種分別接種在LB固體培養(yǎng)基上，37活化培養(yǎng)24H，挑取活化后的菌落與無菌生理鹽水中混合，并用生理鹽水調(diào)至05MCFARLAND單位的標準接種物，即為11082108CFU/ML的菌懸液濃度。再用無菌生理鹽水按10倍稀釋法將標準接種物配成106CFU/ML的菌懸液。123抗微生物活性試驗將濾紙打成直徑為6MM的圓形濾紙片，滅菌、烘干后放入顯齒蛇葡萄提取物中充分浸泡，取出后低溫烘干，制成藥敏紙片。按照固體培養(yǎng)基的制備方法準備數(shù)量充足的固體平板，用200UL移液槍吸取01ML濃度為106CFU/ML的菌懸液于含LB固體培養(yǎng)基的平板中央，用玻璃涂棒在超凈工作臺上的酒精燈火焰周圍利用無菌操作將菌液均勻涂布于平板上。含菌平板倒置干燥約30MIN后，用鑷子取藥敏紙片均勻貼在平板上，每個平板貼3個藥敏紙片，相對應地貼好標簽。20MIN后，放入37恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24H。測量抑菌圈直徑，以上實驗重復三次。124最低抑菌濃度（MIC）測定在無菌條件下，將無菌試管分成5大組，每組10支。第1支試管中加入1ML2倍濃度的LB液體培養(yǎng)基，其余各支試管加入1MLLB液體培養(yǎng)基，再向第1支試管中加入1ML提取液后混勻，然后從第一支試管中取1ML溶液到第二支試管中混勻，以此類推，一直到加入第十支試管混勻后，從第十支試管中取出1ML溶液棄取。結果使各管中的提取液濃度呈二倍稀釋變化。然后向各管中加入01ML的含1106CFU/ML的細菌懸液，將培養(yǎng)物置于37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24H。觀察培養(yǎng)物生長情況，測定MIC值。125食品溶液制備牛奶和豆?jié){加熱煮沸4冰箱保存?zhèn)溆?。鮮豬肉用搗碎機搗碎成泥后，加100ML蒸餾水用文火煮50MIN后取湯汁4冰箱保存?zhèn)溆?。新鮮西瓜在無菌條件下打開取汁4冰箱保存?zhèn)溆谩?26不同提取物濃度的食品溶液制備按7月份顯齒蛇葡萄最低抑菌濃度配制不同提取物濃度的食品溶液。如下表11所示數(shù)據(jù)配制后將制備液裝入容器中4冰箱保存?zhèn)溆?。提取液體積（ML）食品液體積（ML）總體積（ML）提取物最終濃度（G/ML）00101001/2MIC0625937510000391MIC12587510000782MIC257510001564MIC55100031311表127食品防腐實驗將配制好的不同濃度的抑菌食品液分裝入大試管中，每支試管10ML共20支試管。將其放入37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間以不同的時間4小時、8小時、10小時、12小時、16小時、20小時為間隔每次取01ML的樣品溶液于含LB固體培養(yǎng)基的平板中央，用玻璃涂棒在超凈工作臺上的酒精燈火焰周圍利用無菌操作將菌液均勻涂布于平板上。放入37恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)24H。第二天觀察細菌生長情況，并通過菌落計數(shù)法來記錄細菌的生長情況。2結果21不同生長時期顯齒蛇葡萄抑菌效果通過三次重復的藥敏紙片試驗，得到顯齒蛇葡萄提取物抑菌圈直徑的平均值（包含藥敏紙片部分），結果如表21提取物抑菌圈直徑（MM）實驗菌種4月份7月份11月份ESCHERICHIACOLI80170113STAPHYLOCOCCUSAUREUS78176121STAPHYLOCOCCUSSAPROPHYTIC91182123BACILLUSSUBTILIS75168108PROTETEUSVULGARIS7016110021表顯齒蛇葡萄提取物對所有供試菌都顯示了抗菌活性。其中對腐生葡萄球菌抑菌作用最強，其7月份的顯齒蛇葡萄提取物的抑菌圈直徑達到182MM；其次是大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，對枯草芽孢桿菌和普通變形桿菌抑菌活性相對較弱，變形桿菌4月份的抑菌圈直徑只有70MM。三個不同生長時期的顯齒蛇葡萄提取物抑菌效果最強的是7月份的顯齒蛇葡萄，抑菌效果最弱的是4月份的顯齒蛇葡萄。227月份顯齒蛇葡萄葉最低抑菌濃度（MIC）7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對7供試菌種的最低抑菌濃度如下表22所示供試菌種MIC（G/ML）ESCHERICHIACOLI00078STAPHYLOCOCCUSAUREUS00078STAPHYLOCOCCUSSAPROPHYTIC00039SALMONELLATYPHI00078PROTETEUSVULGARIS0015622表7月份顯齒蛇葡萄提取物對腐生葡萄球菌抑菌效果最強，MIC為00039G/ML；對普通變形桿菌抑菌效果最弱，MIC為00156G/ML。但對于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌大部分供試菌種來說其最低抑菌濃度為00078G/ML。23不同提取物濃度的食品溶液防腐實驗結果231牛奶食品溶液不同提取物濃度的牛奶食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表231所示時間0（對照）1/2MIC1MIC2MIC4MIC4H43103751038H581044351047110212H22710512910412410416H2291057781052610520H1610612281064410524H16106481065710532H4810610610624510440H10610684310548H8810556H2410664H2410672H80H2310290H58103106H146104120H20105124H186106136H186106231表“”表示不長菌，“”表示細菌成片生長趨于穩(wěn)定。對以上數(shù)據(jù)做細菌生長對數(shù)圖所示X表示時間，Y表示細菌生長對數(shù)；BF分別代表0、1/2、1、2、4MIC的濃度2020460810201411234567BCDEFYAXISTTLEXAXISTLE不同提取物濃度的牛奶食品溶液防腐效果有很大差別。1/2MIC濃度牛奶食品溶液無防腐作用，不能延長牛奶的抑菌時間，并且與0MIC一樣在020H細菌呈對數(shù)生長；1MIC濃度牛奶食品溶液防腐效果不明顯，延長抑菌時間4小時，在432H呈對數(shù)生長；2MIC可以延長抑菌時間24H，在2456H呈對數(shù)生長；4MIC牛奶食品溶液防腐效果最明顯，可延長食品溶液抑菌時間72H，在72124H細菌也呈對數(shù)生長。232豆?jié){食品液不同提取物濃度的豆?jié){食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表232所示時間0MIC（對照）1/2MIC1MIC2MIC4MIC4H105106151053491038H3510693510552810412H731066510645910616H731073651073210720H73107365107321076910324H2610532H5310620810240H2281074610448H22810718610556H22710664H34910772H349107232表“”表示不長菌，“”表示細菌生長趨于穩(wěn)定對以上數(shù)據(jù)做細菌生長對數(shù)圖X表示時間，Y表示細菌生長對數(shù)；BF分別代表0、1/2、1、2、4MIC的濃度501520354056057802468BCDEFYAXISTTLEXAXISTLE不同提取物濃度的豆?jié){食品溶液防腐效果不同。其中1/2MIC、1MIC豆?jié){抑菌食品溶液無防腐作用，不能延長食品抑菌時間；2MIC豆?jié){食品溶液防腐效果較強，可延長食品溶液抑菌時間16H，在1640H細菌生長的對數(shù)圖成拋物線；而4MIC豆?jié){食品溶液可延長食品溶液抑菌時間24H，在2464H細菌呈對數(shù)生長。233西瓜食品溶液不同MIC濃度西瓜抑菌食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表233所示時間0MIC（對照）1/2MIC1MIC2MIC4MIC4H6010220102521028H4961061810514610412H385107201074110616H385107201074910720H491078110424H1310632H241071810240H2410733710348H83910456H1010664H4810772H48107233表“”表示不長菌，“”表示細菌生長趨于穩(wěn)定不同MIC濃度西瓜抑菌食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表生長曲線對數(shù)圖所示X表示時間，Y表示細菌生長對數(shù)；BF分別代表0、1/2、1、2、4MIC的濃度501520354056057802468BCDEFYAXISTTLEXAXISTLE不同MIC濃度西瓜抑菌食品溶液防腐效果不一樣。其中1/2MIC、1MIC西瓜抑菌食品溶液防腐作用很弱。2MIC和4MIC西瓜抑菌食品溶液防腐效果較強，分別延長食品溶液保質時間約20H、52H。234肉湯抑菌食品液不同MIC濃度肉湯抑菌食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表234所示時間0MIC（對照）1/2MIC1MIC2MIC4MIC4H1081048H3310613810512H8131066010516H22710713410710310620H2271071341072681076010224H2681079310432H22710640H3610656H3610764H3610772H92H116H140H472103148H835104156H233105164H227106172H683107180H683107234表“”表示不長菌，“”表示細菌成片生長無法記數(shù)不同MIC濃度肉湯抑菌食品溶液防腐實驗細菌生長情況如下表生長曲線對數(shù)圖所示X表示時間，Y表示細菌生長對數(shù)；BF分別代表0、1/2、1、2、4MIC的濃度050101502002468BCDEFYAXISTTLEXAXISTLE不同MIC濃度肉湯抑菌食品溶液防腐效果有很大差別。其中1/2MIC肉湯抑菌食品溶液防腐作用很弱。1MIC肉湯抑菌食品溶液與1/2MIC相比防腐作用要強，但延長食品溶液保質時間并不長。2MIC肉湯抑菌食品溶液防腐效果較強，可延長食品溶液保質時間約40H。4MIC肉湯抑菌食品溶液防腐效果很強，可延長食品溶液保質時間約156H。7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對四種食品的防腐作用相互比較，其中1/2MIC、1MIC濃度抑菌食品溶液對細菌生長有一定的抑制作用，但防腐作用都不太明顯。而2MIC、和4MIC濃度抑菌食品溶液都可相對的延長食品溶液保質時間，其中7月份顯齒蛇葡萄葉提取液對肉湯和牛奶防腐作用更強，對西瓜和豆?jié){防腐作用相對較弱。3討論由于目前化學食品防腐劑的泛濫，對人類的身體健康造成了十分嚴重的危害，尋找新的天然抗菌防腐劑已成為食品防腐研究的熱點。從民族本土傳統(tǒng)抗菌植物中篩選新的抗菌防腐植物是食品防腐研究與開發(fā)的有效途徑，并已取得了進展。本實驗使用的顯齒蛇葡萄葉是湖南通道侗族人們?nèi)粘Ｉ钪酗嬘玫牟枞~中的最為常見的一種，并且指導老師劉勝貴老師早前已通過實驗證明其有很強的抑菌作用。通過進一步實驗研究，證實了顯齒蛇葡萄葉對肉類、奶制品、水果和豆制品都有防腐作用，為開發(fā)新的天然抗菌防腐劑奠定了科學基礎。顯齒蛇葡萄葉提取物良好的抗微生物作用，也可以用于治療感染性疾病的研究。其中的抗微生物活性物質成分有待更進一步研究。本試驗使用藥敏紙片擴散法和試管二倍稀釋法分別測定了微生物抗菌活性，顯示了兩種實驗結果相關性。并通過以上兩個實驗的結果利用菌落計數(shù)法測定微生物的生長情況以反映食品防腐抑菌效果。藥敏紙片擴散法結果取決于抗菌有效成分的溶解性和在瓊指培養(yǎng)基內(nèi)的擴散性，是一種半定量的研究方法，是初步篩選抗菌植物有效途徑。試管二倍稀釋法則是一種精確測定抗菌活性的方法。菌落計數(shù)法是通過數(shù)菌落的方式直觀的反映出細菌的生長狀況。研究結果表明，顯齒蛇葡萄葉對肉類、奶制品防腐抑菌作用較強，但對水果和豆制品的防腐抑菌效果稍弱。但由于顯齒蛇葡萄葉提取液有很深的顏色，添入食品中會對其外觀造成很大影響，進而影響食品的銷售。因此將顯齒蛇葡萄葉開發(fā)成新的天然抗菌防腐劑并投入食品工廠大批量添加生產(chǎn)目前還不適宜。需要更進一步的研究。參考文獻1RABET,VANJANTIBACTERIALACTIVITYOFSOUTHAFRICANPLANTSUSEDFORMEDICINALPURPOSESJETHNOPHARMACOL1997,5681872OLUKOYA,DK,IDIAKA,N,ODUGBEMI,AANTIBACTERIALACTIVITIESOFSOMEPLANTSINNIGERIAJETHONOPHARM,2003,415223J