第四章 人工授精,應用最廣泛的繁殖技術,目錄,第一節(jié) 概述第二節(jié) 采精第三節(jié) 精液品質檢查第四節(jié) 精液的稀釋與保存第五節(jié) 輸精第六節(jié) 冷凍精液,第四章 人工授精,第一節(jié) 概述,概念,人工授精是利用器械采集雄性動物的精液。經檢查和處理后，再用器械將精液輸入到發(fā)情雌性動物的生殖道內，以代替自然交配而繁殖后代的一種技術。,第四章 人工授精 第一節(jié) 概述,一、人工授精的發(fā)展概況,人工授精的發(fā)展經歷下列三個階段 ：1.試驗階段：1780年，意大利生理學家Spallanzani，第一次成功地用狗進行了人工授精試驗。 2.實用階段：上世紀40-60年代，人工授精的應用蓬勃發(fā)展成為繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，發(fā)展最快，技術水平較高。 3冷凍精液階段：50年代英國的Smith和Polge研究牛精液的冷凍保存方法，人工授精技術進入了一個新的發(fā)展階段。,第四章 人工授精 第一節(jié) 概述,二、人工授精的優(yōu)越性,1.提高了優(yōu)良種公畜的配種效能和種用價值 2.加速家畜品種改良，促進育種工作 3.降低了飼養(yǎng)管理費用 4.防止各種疾病，特別是生殖道傳染病的傳播 5.有利于提高母畜的受胎率 6.可以進行精液的長期保存 7.這開展科學研究提供了有效手段,第四章 人工授精 第一節(jié) 概述,三、人工授精的限制,1、通過人工授精可能使不良的公畜影響范圍更大2、必須投入一定資金，進行房舍建設和設備購置3、必須進行人員的技術培訓，不良的操作會造成更嚴重的問題,第四章 人工授精 第一節(jié) 概述,采精的基本要求,安全：對種公畜、對人員必須確保安全潔凈：采集的精液不能受到任何生物和化學污染全部：能夠采集到種公畜全部的精液,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,一、采精前的準備,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,（一）采精場地,采精要有一定的采精環(huán)境，以便雄性動物建立起鞏固的條件反射，同時防止精液污染。采精場地應該寬敞、平坦、安靜、清潔，場內設有采精架以保定臺畜，或設立假臺畜，供公畜爬跨進行采精，采精場應與人工授精操作室和公畜舍相連。室內采精場的面積一般為1010平方米，并附設噴灑消毒和紫外線照射殺菌設備。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,（二）臺畜的準備,臺畜有真假臺畜之分真臺畜是指使用與公畜同種的母畜、閹畜或另一頭種公畜作臺畜。真臺畜應健康、體壯、大小適中、性情溫順。選發(fā)情的母畜比較理想，經過訓練的公、母畜也可作臺畜。假臺畜即采精臺，是模仿母畜體型高低大小，選用金屬材料或木料做成的一個具有一定支撐力的支架。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,（三）調教種公畜爬跨假臺畜,利用假臺畜采精，要事先對種公畜進行調教，使其建立條件反射。調教的方法有如下幾種：1.在假臺畜的后軀涂抹發(fā)情母畜的陰道粘液或尿液，公畜則會受到剌激而引起性興奮并爬跨假臺畜，經過幾次采精后即可調教成功；2.在假臺畜旁邊牽一發(fā)情母畜，誘使公畜進行爬跨，但不讓交配而把其拉下，反復多次，待公畜性沖動達到高峰時，迅速牽走母畜，令其爬跨假臺畜采精； 3.將待調教的公畜拴系在假臺畜附近，讓其目睹另一頭已調教好的公畜爬跨假臺畜，然后再誘其爬跨；,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,公畜調教時應注意的事項,1.調教過程中，要反復進行訓練，耐心誘導，切勿施用強迫、恐嚇、抽打等不良剌激，以防止性抑制而給調教造成困難；2.調教時應注意公畜外生殖器的清潔衛(wèi)生；3.最好選擇在早上調教，早上精力充沛，性欲盛；4.調教時間、地點要固定，每次調教時間不宜長；,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,(三)器械準備,采精所需要的器械要事先準備好，力求清潔無菌，在使用之前要嚴格消毒， 每次使用后必須洗刷干凈。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采精,目錄,(四)種公畜的準備,種公畜采精前的準備，包括體表的清潔消毒和誘情（性準備）兩個方面。 這和精液的質量和數量都有密切的關系。 采精前應擦拭公畜下腹部，用0.1%高錳酸鉀溶液等洗凈其包皮外并抹干， 擠出包皮腔內積尿和其他殘留物并抹干。在采精前，需以不同誘情方法使公畜有充分的性興奮和性欲，一般采取讓公畜在臺畜附近停留片刻，進行幾次假爬跨。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,二、采精技術,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,采精方法,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,雄性動物的采精方法很多，主要有假陰道法、手握法、電剌激法、按摩法、海綿法等。 假陰道法適用于各種家畜和部分小動物，手握法是當前公豬采精普遍應用的方法，按摩法主要用于禽類和犬類，電剌激法主要用于野生動物的采精。,（一）假陰道法,原理：它是模擬母畜陰道環(huán)境條件的人工陰道，誘導公畜射精而采集精液的方法。1.假陰道的結構 假陰道是一筒狀結構，主要由外殼、內胎、集精杯及附件組成。外殼為一圓筒，由輕質鐵皮或硬塑料制成，內胎為彈性強、薄而柔軟無毒的橡膠筒，裝在外殼內，構成假陰道內壁；集精杯由暗色玻璃或塑料制成，裝在假陰道的一端。此外，還有固定內胎的膠圈，保定集精杯用的三角保定帶，充氣用的活塞和雙聯(lián)球等一些附件。各種家畜的假陰道結構基本相同，但形狀和大小不一。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,2.假陰道的準備假陰道應具備五個條件：1)適宜溫度：采精時假陰道內腔溫度應保持在38-40，集精杯也應保持34-35。2)適當壓力：借助注入水和空氣來調節(jié)假陰道的壓力。3)適當潤滑度：涂抹潤滑劑的部位是假陰道前段1/3-1/2處到外口周圍，但涂布不可過長過多。4)無菌：凡接觸精液的部分均須經消毒。5)無破損漏洞：假陰道不得漏水或漏氣。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,牛羊假陰道安裝充氣后理想的狀態(tài),不太理想的狀態(tài)（但可以用）,牛的假陰道法采精,(二)手握法,適用于豬的采精。是目前廣泛使用的采集的一種方法。操作時，采精員要戴上滅菌膠手套，蹲在假臺畜左側，待公豬爬跨臺畜后，當陰莖從包皮內開始伸出時，立即緊握龜頭，待其抽送片刻后，鎖定公豬的龜頭。待陰莖充分勃起時，順勢牽引向前，就能導致公豬射精。另一只手持帶有一次過濾網的的集精杯收集精子濃厚部分的精液，其它稀薄精液及顆粒狀膠凍分泌物排出時可隨時棄掉。分段采精：棄掉含副性腺分泌物多、精子較少、精液清亮白色的第一段和精液較稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液濃、精子多、呈乳白色的第二段。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,豬的拳握法采精,(三)電剌激法,本法是通過電流剌激公畜引起射精而采集精液的一種方法。適用于各種動物。電剌激采精器由電子控制器和電極探棒兩部分組成。電剌激采精應將公畜以站立或側臥姿勢保定。保定后，剪去包皮及其周圍的被毛，并用生理鹽水沖洗拭干，然后將電極探棒經肛門緩慢插入直腸，達到靠近輸精管壺腹部的直腸底壁，大家畜插入深度約20-25厘米，羊10厘米，犬10-15厘米，兔5厘米。然后調節(jié)控制器，選擇好頻率，開通電源。調節(jié)電壓時，由低開始，按一定時間通電及間歇，逐步增高剌激強度和電壓，直至公畜伸出陰莖，勃起射精，將精液收集于附有保溫裝置的集精瓶內。,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,三、采精頻率,采精頻率是指第周對雄性動物的采精次數。為了既能最大限度地采集精液，又能維持其健康體況和正常生殖機能，必須合理安排采精頻率。牛：每周2天采精，當日采2次豬：隔日一次，最好3天一次羊：每周3天，當日采2次。犬：隔日一次,第四章 人工授精 第二節(jié) 采 精,目錄,第三節(jié) 精液品質檢查,目 錄,一、目 的二、項 目三、方 法,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,一、檢查的目 的,1.檢查種公畜的配種能力 2.公畜的繁殖問題 3.確定精液可稀釋的倍數 4.檢查精液的處理方法是否正確 5.檢查精液產品的質量,返回目錄,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,二、檢查的項目,（一）直觀項目 （二）微觀項目,返回目錄,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(一)直觀檢查項目,射精量色澤氣味云霧狀PH值美蘭退色試驗,返回項目,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(二)微觀檢查項目,精子活力估測精子活力計數密度測定:計數板計數、比色計測定畸形率：形態(tài)畸形率、頂體畸形率,返回目錄,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,三、主要項目檢查方法,（一）直觀項目檢查（二）微觀項目檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,（一）直觀項目檢查,1.射精量2.色澤3.氣味4.云霧狀,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(1)射精量的測定方法(2)公畜的正常射精量(3)采精量不正常的原因,1. 射精量,返回（一）,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(1)射精量的測定方法,概念: 射精量是指每次射精的體積測定: 以連續(xù)3次以上正常采集到的精液的平均值代表測定方法: 可用體積測量容器如刻度試管或量筒,也可用電子秤稱重近似代表體積,返回1.,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(2)公畜的正常射精量,影響射精量的因素:種類、睪丸大小質地、季節(jié)、健康狀況不同畜種的正常射精量：,柱形圖,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,不同畜種的射精量比較,原因,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,（3）射精量不正常的原因,返回1.,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,2. 色 澤,色澤：是指精液的顏色及其濃厚程度，它某種程度反應精液是否正常，精子的濃度高低正常的精液： 豬：淺灰白至白色 牛羊：乳白色或乳黃色,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,不正常精液原因分析,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,3. 氣 味,正常的精液：應沒有很濃的氣味，或略帶動物特有的腥膻味腥味：有膿液臊味：有尿液或包皮液,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,4. 云霧狀,是指新鮮精液在33-35 溫度下，精子成群運動所產生的上下翻卷的現象。云霧狀的明顯程度代表高濃度的精液中精子活力的高低。,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,云霧狀分級標準,+ 翻明顯而且較快+ 翻明顯但較慢+ 仔細看才能看到精液的移動- 無精液移動,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,（二）微觀項目檢查,1.活力估測2.密度測定3.畸形率測定,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,1.活力的估測,(1)概念:37下,精液中前進運動精子占總精子數的百分率(2)主要測定方法:估測法,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,活力測定時精液的稀釋用品,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,例：牛精子活力檢查的程序,載玻片預溫,精液稀釋,取樣檢查,鏡檢,活力估測,活力記錄,將恒溫加熱板放在載物臺上，打開電源并調整控制溫度至37，然后放在載玻片,將生理鹽水與精液等溫后，按1:10稀釋,取10ul放在預溫后載玻片中間，蓋上蓋玻片,用100倍和400倍觀察,判斷視野中前進運動精子占的百分率,按10級制評分和記錄,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,2.精子的密度檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(1)密度的概念及表示方法,單位體積精液中所含的精子數表示方法:個/ml 或億/ml,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(2)各種家畜精液的精子密度,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(3)各種家畜精子密度比較,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,(4)精子密度的測定方法,精子密度計數板(器)簡介精液的稀釋精液注入計數室精子計數精子密度計算,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,精子密度計數板(器)簡介,精子計數室長寬各1mm,面積1mm2高度0.1mm,體積0.1mm3由雙線或三線組成25個(5X5)中方格每個中方格內有16個小方格(4X4)共計400個小方格,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,精子計數室及一個中方格,返回,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,精液的稀釋,將精液注入計數室前必須對精液進行稀釋,以便于計數稀釋的比例根據動物精液的密度范圍確定稀釋方法:用5-25ul移液器和100-1000移液器,在小試管中進行組合不同的稀釋.如牛精液稀釋100倍,為5ul原精+500ul稀釋液稀釋液:3%氯化鈉溶液,用以殺死精子,便于計數,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,注入計數室前各種家畜精液建議稀釋比例,返回,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,精液注入計數室,將潔凈的計數板放在載物臺上固定好,蓋上干凈的蓋玻片取25ul稀釋后的精液,將吸咀放于蓋玻片與計數板的接縫處緩慢注入精液,使精液依靠毛細作用吸入計數室,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,注意：讓稀釋后的精液通過毛細作用自行吸入！,用吸管稀釋后精液注入計數室,共有兩個對稱的計數室,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,用移液器注入精液,返回,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,精子計數,將計數板固定在顯微鏡的推進器內，用100倍放大找到計數室，再用400倍找到計數室的第一個中方格。計數左上角至右下角五個中方格的總精子數，以精子的頭部為準，依數上不數下，數左右不數右的原則進行計數格線上的精子。,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,進行精子計數的中方格數可以是四角一中心共5個中方格,也可以是從左角到右下角五個中方格,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,以圖示次序計數，精子的頭部為準，依數上不數下，數左右不數右的原則進行計數格線上的精子。白色精子不計數,返回,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,計算精子密度,精子密度= 5個中方格總精子數5101000 稀釋倍數,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,例：牛精子密度測定程序,放計數板于載物臺上,取樣稀釋精液,精液注入計數室,鏡檢,精子計數,密度計算,計數板和蓋玻片一定要清潔,取500ul 3%氯化鈉于小試管中,加入5ul原精液,混合均勻,取25ul小心地從計數板與蓋玻片的接縫中加入,使其自行吸入計數室中,用100倍和400倍觀察,計數五個中方格的總精子數,計數以頭部為準,在格線上的數上不數下,數左不數右,精子密度= 5個中方格總精子數5101000 100,結束,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,（四）畸形率檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,1、染色劑,0.5克龍膽紫用20ml酒精助溶，加水至100ml，過濾至試劑瓶中備用。美蘭、純蘭或紅墨水,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,2、稀釋,稀釋液0.9%NaCl牛：1:10 羊:1:20豬: 1:2,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,3、抹片,左手食指和拇指向上捏住載玻片兩端，使載玻片處于水平狀態(tài)，取10ul稀釋后的精液滴至載玻片右側。右手拿一載玻片或蓋玻片，使其與左手拿的載玻片呈向右的45度角，并使其接觸面在精液滴的左側。將載玻片向右拉至精液剛好進入兩載（蓋）玻片形成的角縫中，然后平穩(wěn)地向左推至左邊。抹片后，使其自然風干。,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,4、固定,在抹片上滴95%的酒精數滴，固定4分鐘，甩去多余的酒精,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,5、染色,將載玻片放在用玻璃棒制的片架上，滴上0.5%的龍膽紫或其它染色劑5-10滴，5分鐘后，用洗瓶或自來水輕輕沖去染色劑，甩去水分涼干。,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,6、檢查畸形率,將載玻片放在400或640倍的顯微鏡下進行觀察，共記錄若干個視野100-200個左右的精子。,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,7、畸形率種類,頭部膨大、頭部小于正常、雙頭、頭部不完整尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、雙尾、斷尾有近端原生質小滴,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,畸形精子,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,視野中的畸形精子,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,雙頭和雙尾精子,第四章 人工授精 第三節(jié) 精液品質檢查,第四節(jié) 精液的稀釋,一、精液稀釋的目的,精液稀釋是向精淮中加入適宜于精子存活的稀釋液。其目的有兩個：1.擴大精液容量，從而增加輸精頭數，提高公畜利用率；2.延長精子的保存時間及受精能力，便于精液的運輸，使精液得以充分利用。,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,二、精液稀釋液的成分及作用,1營養(yǎng)物質 2保護性物質 1)緩沖劑 2)防冷抗凍物質 3)抗菌物質 4)稀釋劑 5)其它添加劑 6)酶類 7)激素類 8)維生素類,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,三、稀釋液配制,1.所用用品必須徹底洗滌干凈，嚴格消毒2.所用蒸餾水要新鮮，藥品要求用分析純，配制的稀釋液要嚴格消毒 3.使用的鮮奶需經過濾后在水浴（92-95）中滅菌10分鐘，卵黃要取自新鮮雞蛋，攪拌要充分 4.藥物稱量要準確，要用分析天平 5.抗生素、酶類、激素類、維生素等添加劑必須在稀釋液冷卻至室溫時，方可加入。6稀釋要求現配現用，保持新鮮,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,四、稀釋倍數和稀釋方法,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,1稀釋倍數確定,精液適宜稀釋倍數與家畜種類和稀釋液種類有關。確定稀釋倍數應根據原精液的質量，尤其是精子的活率和密度、每次輸精所需的精子數、稀釋液的種類和保存方法。一般牛4-6倍，豬1-3倍，免3-5倍。,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,2稀釋方法,1）精液經檢查合格后應立即進行稀釋，越快越好；2）稀釋時，稀釋液的溫度和精液的溫度必須調整一致，以30-35為宜；3）稀釋時，將稀釋液沿精液瓶或插入的滅菌玻璃棒緩慢倒入，防止劇烈震蕩；4）若作高倍稀釋，應先低倍后高倍，分次進行稀釋；5）稀釋后立即鏡檢，活力應和稀釋前一樣；6）稀釋后精液立即進行分裝（一般按一頭母畜的輸精量）保存。,第四章 人工授精 第四節(jié) 精液的稀釋,目錄,第五節(jié) 精液保存,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的保存,目錄,精液的保存方法,現行精液保存的方法按保存的溫度分：常溫保存（15-25）低溫保存（0-5）冷凍保存（-79- -196）三種。按精液的狀態(tài)分：液態(tài)保存：常溫保存和低溫保存溫度都在0以上，故稱液態(tài)精液保存冷凍保存：超低溫保存精液以凍結形式作長期保存，故稱冷凍精液保存。,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的保存,目錄,一、低溫保存,原理：低溫能抑制精子的代謝和微生物的繁殖，但迅速降溫會使精子遭受冷休克，加低溫保護劑和緩慢降溫并保持較低溫度，可使精液保存數天。稀釋液主要成分：抗生素、15-25%的卵黃、基礎液保存方法：用紗布包數層于裝冰塊的保溫瓶中或冰箱中保存。保存溫度： 2-5,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的保存,目錄,二、常溫保存,原理：精子自身所產生的酸性物質和稀釋液中的酸性物質使精液的PH降低到一定的水平，能夠抑制精子的代謝，從而延長精子的存活時間?？股啬軌蛞种莆⑸锏姆敝?。稀釋液成分：抗生素、單糖、緩沖劑保存溫度： 15-25,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的保存,目錄,第六節(jié) 精液的冷凍保存,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,精液冷凍概述,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,1950年英國科學家Polge和Smith采用卵黃和甘油作保護劑，用干冰作冷源進行精液的冷凍，解凍后授精成功，開創(chuàng)了世界人工授精的新世代。到90年代，發(fā)達國家的全部奶牛和絕大多數肉牛采用凍精輸精。精液冷凍保存成為最可靠的保存方法。,精液冷凍的原理（一）,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,超低溫使精子處于零代謝狀態(tài)，升溫后能使精子復蘇并且不失去受精能力。但精子冷凍過程會由于形成冰晶使精子受到損害，這些損害包括： 精子外的水分先形成冰晶，而形成精子內外的滲透壓差，導致精子水分外滲，精子內滲透壓增高，電解質濃度提高，酸堿失去平衡。 冰晶的形成造成： 產生機械壓力，導致細胞表層破壞 冰晶滲透入精子內部，破壞精子結構 如果在冷凍過程只形成微小冰晶，即玻璃化狀態(tài)，則精子就不容易受到損傷，解凍后能恢復活力。,精液冷凍的原理（二）,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,形成玻璃化狀態(tài)的條件：防凍劑干擾晶格的排列形成“過冷溶液”快速降溫，使水分子來不及移動和排列，就失去了能量，形成更“過冷溶液”快速降溫使液體只能形成極微小的“微晶” 保存和解凍過程的變化： 冰晶很微小，所以表面能很高，微晶總是力圖合并成大冰晶 一旦吸收一定的能量，冰晶就會合并成大冰晶，從而使精子受到破壞。 保存過程中，即使凍精溫度只升高到-60 ，也可能使精子死亡 凍精在解凍時也需要快速升溫，才能保證防止微晶在解凍過程中形成大冰晶,精液冷凍的稀釋液,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,低溫保護劑：糖類：蔗糖、乳糖、葡萄糖、果糖卵黃、奶類 冷凍保護劑 甘油 二甲基亞砜 乙二醇 抗生素類：慶大霉素、青霉素、鏈霉素等,冷凍精液稀釋液的組成,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,基礎液：由糖類和鹽類、水配制的等滲液第一液：由基礎液和卵黃（20%）組成的低溫保存稀釋液。用于在30下稀釋和逐步降溫。第二液：由第一液和甘油或其它防凍劑組成。甘油含量通常比稀釋后濃度高一倍。,解凍液的配制,第四章 人工授精 第六節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,一般采用2.9%的檸檬酸鈉作解凍液豬的凍精解凍液用常溫保存稀釋液BTS也可用VB12注射液作解凍液如果解凍液中加入2mmol的咖啡因有利于提高受胎率,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,冷凍精液的程序,1、精液的采集：牛羊采精可采用一次采精兩個射精量的方法2、品質檢查：精液的密度和活力都必須符合要求3、稀釋前處理：羊、豬的精液在稀釋前進行離心或清洗（羊）有利于提高解凍后活力4、稀釋：可采用一次稀釋也可采用二次或三次稀釋。最常用的是二次稀釋,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,冷凍精液的程序,稀釋第一次稀釋：在30溫度下，根據計算的稀釋倍數進行第一次稀釋，放在500毫升的燒杯中與第二液一起緩慢降溫至2-5 。第二次稀釋：在2-5 下進行平衡：是精液與防凍劑（甘油）相互的時間。一般2-4小時。分裝：凍精的劑型有細管（0.25ml、0.5ml），安瓿（2.5ml、5ml)、顆粒（0.1ml）、袋裝等。,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,冷凍精液的程序,冷凍： 冷源：干冰（-79 ）、液氮（-196 ） 冷凍用品： 冷凍面：銅網、氟板（聚四氟乙烯）、鋁板 冷凍槽：廣口液氮罐、液氮槽 鋼匙、鑷子、低溫溫度計 冷凍方法： 干冰埋藏法 液氮熏蒸法 不同劑型冷凍方法： 顆粒凍精 細管凍精 活力檢查：活力0.3 以上,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,凍精的解凍,解凍溫度：有冰水解凍，30-40 解凍，高溫（50-75 ）解凍，以第二種方法最常用解凍方法：濕解凍法：在試管中加入0.5-1ml解凍液，升溫到30-40 ，投入一粒凍精，搖動并取出干解凍法：先將試管預熱至30-40 ，投入凍精顆粒后，至融化一半時，取出加入20-30 的解凍液細管凍精解凍：將細管從液氮罐或液氮槽中取出，投入30-40 的水中至融化一半時取出用手搓至完全融化或用體溫解凍解凍后溫度：5-8解凍后保存：在2-5下或冰瓶中可保存12小時以上。,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,冷凍精液的保存,凍精（顆粒）應進行標記：公畜名（號）、采精日期、容量保持液氮罐中液氮面高度接觸冷凍精液的用品都要進行預冷在凍精進行轉移時，應盡可能減少在空氣中暴露的時間。如果是顆粒凍精應先移入液氮槽中再解凍。液氮罐應放在涼爽通風處，避免放在高溫或通風不暢的地方液氮罐在運輸中應防止暴曬和碰撞。,一、輸精前的準備,第四章 人工授精 第七節(jié) 輸 精,目錄,使用過的器械應用清水沖洗后，用蒸餾水沖洗三遍，再放入滅菌鍋或干燥箱中消毒。橡膠輸精器不能使用洗滌劑或去污劑洗滌?？捎贸赫翦佅净蛴镁凭珱_洗后，用蒸餾水沖洗一遍，再放入干燥箱中消毒。開膣器用前可放在新潔爾滅消毒劑中，使用前用生理鹽水沖洗。,輸精器械準備,第四章 人工授精 第七節(jié) 輸 精,目錄,精液準備,精液的劑量及有效精子數應用符合該種家畜的相關要求。冷凍精液使用前應在40水浴中升溫3-5秒，至一半解凍后，取出。解凍后的精液溫度應為5-8。豬馬的精液輸精前應升溫到17-35。,第四章 人工授精 第七節(jié) 輸 精,目錄,各種家畜輸精要求,第四章 人工授精 第七節(jié) 輸 精,目錄,母畜的準備,牛:可在獸醫(yī)保定架、采精架、輸精架或奶牛頸夾內保定，尾部拉向一側馬（驢）：可在獸醫(yī)保定架或用扁繩腳絆保定。尾根部用繃帶或布包扎。羊：可在升高的配種架內保定，或降低配種員站立的位置，或兩人將母羊后肢提起。豬：在圈舍或定位欄內保定各種家畜在輸精前可用高錳酸鉀水擦拭外陰及周圍并用紙巾擦干。豬只有干紙巾擦拭。,第四章 人工授精 第七節(jié) 輸 精,目錄,人員準備,輸精員應將指甲剪短磨光，將手洗凈擦干，必要時用75%酒精棉消毒。如果手臂伸入直腸或陰道內，應戴上長臂手套，并涂以石蠟油或稀釋液。冬季應穿上棉坎保暖和方便操作。,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,二、輸精操作,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,（一）牛的輸精,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,牛的輸精方法,開膣器法直腸把握子宮頸深部輸精法,子宮頸口,尿道口,膀胱,卵巢,子宮頸,子宮體,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,牛的輸精,對母牛進行發(fā)情鑒定，母牛發(fā)情結束，不再爬跨其它母牛，精神趨于穩(wěn)定時輸精。將母牛保定，尾部拉向一側，外陰用高錳酸鉀水棉球擦拭，并擦干。將冷凍精液解凍，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，輸精器通針向后拉出15厘米。將外套管套在輸精器上。分開外陰，將套管連同外塑料膜向前上方伸入陰道10厘米，將輸精器捅透外膜。,第四章 人工授精 第五節(jié) 精液的冷凍保存,目錄,牛的輸精,左手（或右手）戴上長臂手套涂少量石蠟油伸入直腸，排出宿糞。手伸至直腸狹窄部后，將直腸向后移，向骨盆腔底下壓，找到子宮頸（棒狀，質地較硬有肉質感，長約10-20厘米。手移至子宮頸后端（子宮頸陰道部），使子宮頸呈水平方向，并用力將子宮頸向前推，使陰道壁拉直，方便輸精器向前推進。右手將輸精器前端伸到子宮頸外口附近，左手配合，使前端對準子宮頸外口。左右