1、第一章 緒論1.分子生物學(xué)要研究的主要內(nèi)容是（）（）（） 參考答案是：基因工程；基因表達(dá)調(diào)控研究；結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)第二章 DNA結(jié)構(gòu)一、填空題(6分)1.天然存在的DNA分子形式為右手（）型螺旋 參考答案是：B2.Cot曲線方程為：（） 參考答案是：C/C0=1/（1+K2C0t）3.DNA復(fù)性必須滿足兩個(gè)條件：（）（） 參考答案是：鹽濃度必須高；溫度必須適當(dāng)高4.DNA 攜帶有兩類不同的遺傳信息，即（）信息和（）信息。 參考答案是：基因編碼；基因選擇性表達(dá)二、判斷題(12分)1.拓?fù)洚悩?gòu)酶I解旋需要ATP酶。 參考答案是：不正確2.假基因通常與它們相似的基因位于相同的染色體上。 參考答案是：不

2、正確3.水蜥的基因組比人的基因組大。 參考答案是：正確4.一段長度100bp的DNA，具有4100種可能的序列組合形式。 參考答案是：正確5.單個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵連接到DNA骨架上。 參考答案是：正確6.在高鹽和低溫條件下由DNA單鏈雜交形成的雙螺旋表現(xiàn)出幾乎完全的互補(bǔ)性，這一過程可看作是一個(gè)復(fù)性（退火）反應(yīng)。 參考答案是：不正確7.生物的遺傳密碼只存在于細(xì)胞核中 參考答案是：不正確8.Top I解旋需要ATP 參考答案是：不正確9.瓊脂糖凝膠電泳EBr電泳法分離純化超螺旋DNA原理是根據(jù)EBr可以較多地插入到超螺旋DNA中，因而遷移速度較快 參考答案是：不正確10.高等真核生物的大部分D

3、NA是不編碼蛋白質(zhì)的 參考答案是：正確11.Cot1/2與基因組復(fù)雜性有關(guān) 參考答案是：正確12.Cot1/2與基因組大小有關(guān) 參考答案是：正確三、單選題(4分)1.DNA變性是由于（ D） A 磷酸二酯鍵斷裂； B 多核苷酸解離； C 堿基的甲基化修飾； D 互補(bǔ)堿基之間氫鍵斷裂； E 糖苷鍵斷裂；2.1953年，Watson 和Crick提出（ A） A 多核苷酸DNA鏈通過氫鍵連接成一個(gè)雙螺旋； B DNA的復(fù)制是半保留的，常常形成親本-子代雙螺旋雜合鏈； C 三個(gè)連續(xù)的核苷酸代表一個(gè)遺傳密碼； D 遺傳物質(zhì)通常是DNA而非RNA。四、名詞解釋(3分)1.GT-AG law：(3分) G

4、T-AG法則，內(nèi)含子兩側(cè)的序列具有一定的保守性，上有為GT，下游一般為AG.第三章 基因和基因組一、填空題(9分)1.列舉一個(gè)受發(fā)育調(diào)控的復(fù)雜多基因家族的例子：（） 參考答案是：珠蛋白基因家族2.內(nèi)含子和外顯子聯(lián)結(jié)處的序列遵守（）法則 參考答案是：GT-AG3.基因重疊現(xiàn)象是英國分子生物學(xué)家（）在測(cè)定噬菌體X174的DNA序列時(shí)發(fā)現(xiàn)的。 參考答案是：Sanger4.人類基因組計(jì)劃完成后要獲得四張圖，即（）圖 參考答案是：物理圖；遺傳圖；轉(zhuǎn)錄圖；序列圖5.人類基因組計(jì)劃中中國完成了的比例是（）。 參考答案是：1%6.人類基因組的大小是（）。 參考答案是：3X109bp二、判斷題(1分)1.假基因

5、通常與它們相似的基因位于相同的染色體上 參考答案是：不正確三、單選題(6分)1.下面敘述哪些是正確的？( C) A C值與生物的形態(tài)復(fù)雜性呈正相關(guān) B C值與生物的形態(tài)復(fù)雜性呈負(fù)相關(guān) C 每個(gè)門的最小C值與生物的形態(tài)復(fù)雜性是大致相關(guān)的2.關(guān)于外顯子和內(nèi)含子的敘述正確的是（C ） A 外顯子在DNA模板上有相應(yīng)的互補(bǔ)序列，內(nèi)含子沒有 B hnRNA上只有外顯子而無內(nèi)含子序列 C 除去內(nèi)含子的過程稱為拼接 D 除去外顯子的過程稱為拼接3.基因組是（ D） A 一個(gè)生物體內(nèi)所有基因的分子總量； B 一個(gè)二倍體細(xì)胞中的染色體數(shù)； C 遺傳單位； D 生物體的一個(gè)特定細(xì)胞內(nèi)所有基因的分子的總量四、名詞解

6、釋(21分)1.transcriptomics：(3分) 轉(zhuǎn)錄組學(xué)，是一門在整體水平上研究細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄的情況及轉(zhuǎn)錄調(diào)控規(guī)律的學(xué)科。簡而言之，轉(zhuǎn)錄組學(xué)是從RNA水平研究基因表達(dá)的情況。轉(zhuǎn)錄組即一個(gè)活細(xì)胞所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，是研究細(xì)胞表型和功能的一個(gè)重要手段。2.C值矛盾：(3分) 一般而言，隨著生物的進(jìn)化，生物體的結(jié)構(gòu)與功能越復(fù)雜，其C值也越大。但真核生物中DNA含量并不與生物的復(fù)雜性相一致，這種反常現(xiàn)象稱為C值矛盾3.衛(wèi)星DNA：(3分) DNA的浮力密度決定于它的GC含量， GC含量越高，浮力密度越大。 = 1.660 + 0.00098(G + C)% g/cm3，在高度重復(fù)

7、序列中，常有一些AT含量很高的簡單重復(fù)序列，AT含量有時(shí)高達(dá)97%（如螃蟹DNA中的衛(wèi)星DNA）。在CsCl密度梯度離心時(shí)，易與其它DNA分開，形成兩個(gè)以上的峰，即含量較多的主峰和高度重復(fù)序列的小峰。小峰在主峰旁似衛(wèi)星，稱為衛(wèi)星DNA。4.基因組：(3分) 對(duì)真核生物而言，是指能維持二倍體生物的配子或配子體正常功能的最低數(shù)目的一整套染色體上包含的一整套基因。對(duì)原核生物而言，是指它的單個(gè)染色體所包含的全部基因5.多順反子mRNA：(3分) 含有一種以上多肽結(jié)構(gòu)基因的遺傳信息，可翻譯一種以上多肽產(chǎn)物的mRNA。如絕大多數(shù)原核生物、真核生物細(xì)胞器，某些動(dòng)植物病毒和噬菌體的mRNA。6.假基因：(3分

8、) 是基因組中因突變而失活的基因，它和同一家族的活躍基因在結(jié)構(gòu)上和DNA序列上有相似性，但它不具有功能，不能轉(zhuǎn)錄或翻譯成成熟的mRNA或Pr，或產(chǎn)生過早終止的無活性肽鏈，或由于錯(cuò)誤的閱讀框架形成無活性的Pr，這種序列成為假基因。7.基因家族：(3分) 真核生物基因組中有許多來源相同、結(jié)構(gòu)相似、功能相關(guān)的一系列基因，成串地排列在一起。這樣一組基因稱為基因家族。五、簡答題(70分)1.非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)與轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)分別位于rRNA重復(fù)的什么位置？轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)與內(nèi)含子有何區(qū)別？(10分) rRNA的非轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)位于串聯(lián)轉(zhuǎn)錄單位之間，而轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)位于轉(zhuǎn)錄單位的18S RNA基因與28S RNA基因之間。2.如

9、何確定一個(gè)基因所含有的內(nèi)含子的數(shù)目和大??？(10分) 3.在真核生物中有哪幾種RNA聚合酶？簡述他們的特點(diǎn)？(10分)真核生物有三種DNA pol（DNA pol）：RNA聚合酶I：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是28、18、5.8SrRNA RNA聚合酶II：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是mRNA RNA聚合酶III：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是tRNA、5SrRNA。4.基因家族有哪些類型？并各舉一個(gè)例子。(10分)1）、簡單多基因家族：rRNA基因。2）、復(fù)雜多基因家族：組蛋白基因及果蠅tRNA基因。3）、發(fā)育調(diào)控的復(fù)雜多基因家族：珠蛋白基因5.什么是蛋白質(zhì)組學(xué)？設(shè)計(jì)一蛋白質(zhì)組學(xué)方面的實(shí)驗(yàn)，并說明蛋白質(zhì)組學(xué)的基本技術(shù)流程？(10分) 蛋白質(zhì)組學(xué)是

10、以蛋白質(zhì)組為研究對(duì)象，研究細(xì)胞內(nèi)所有蛋白質(zhì)及其動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的科學(xué)。蛋白質(zhì)組學(xué)研究能闡明某一群體蛋白質(zhì)的功能，也能豐富蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫，是從生物大分子到細(xì)胞水平研究的重要橋梁。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 流程：樣品制備、雙向電泳、質(zhì)譜、生物信息學(xué)分析、免疫雜交等6.什么是C值矛盾，C值矛盾具體表現(xiàn)在哪些方面。(10分) 一般而言，隨著生物的進(jìn)化，生物體的結(jié)構(gòu)與功能越復(fù)雜，其C值也越大。但真核生物中DNA含量并不與生物的復(fù)雜性相一致，這種反?，F(xiàn)象稱為C值矛盾。 C值矛盾表現(xiàn)在：1）、結(jié)構(gòu)、功能相似的同一類生物中，甚至親緣關(guān)系十分接近的物種之間，它們的C值可相差10倍乃至上千倍。2）、較低等生物的C值大于較高等生物的C

11、值3）、真核生物的C值之大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其基因編碼所需人的單倍體基因組由3×109bp組成，如將內(nèi)含子算上，哺乳動(dòng)物的一個(gè)基因長約58Kb，少數(shù)可達(dá)10Kb，若按此計(jì)算，哺乳動(dòng)物應(yīng)有4060萬個(gè)基因。目前研究表明，實(shí)際基因數(shù)估計(jì)不會(huì)超過這個(gè)數(shù)值的10%（34萬）。有些基因的序列不編碼蛋白質(zhì)，則基因組中只含有2%3%的DNA序列用于編碼蛋白質(zhì)。7.試比較原核生物基因組和真核生物基因組的特點(diǎn)。(10分)原核生物基因組的特點(diǎn)：不具備明顯的核結(jié)構(gòu)，只有核類，即DNA相對(duì)集中的區(qū)域。基因組小，一般只有一個(gè)染色體，大多為雙鏈環(huán)狀，少數(shù)為單鏈或線形。染色體DNA并不于Pr固定地結(jié)合，不具核小體結(jié)構(gòu)。結(jié)

12、構(gòu)簡練，重復(fù)序列和非編碼序列很少，體現(xiàn)經(jīng)濟(jì)原則。功能密切相關(guān)的基因構(gòu)成轉(zhuǎn)錄單元，并常轉(zhuǎn)錄成含多基因信息的mRMA分子，稱為多順子反子mRMA。有重疊基因：同一段DNA片段可以編碼2-3中Pr分子。真核生物基因的特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因極龐大。有若干個(gè)染色體，一般不呈環(huán)狀，DNA與Pr緊密結(jié)合形成染色體，具多個(gè)復(fù)制起始點(diǎn)。存在核膜，DNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯存在時(shí)空差別。有很多不編碼序列（內(nèi)含子，內(nèi)元，intron）或介入序列。有大量的重復(fù)序列功能上密切相關(guān)的基因集中程度中程度不如原核生物高，大多分散在不同的染色體上，但有許多基因家族和假基因存在。有細(xì)胞器基因，chl-DNA mit-DNA，其密碼子有特異

13、性。第四章 DNA復(fù)制一、填空題(9分)1.復(fù)制叉上DNA雙螺旋的解旋作用由（）催化的，它利用來源于ATP水解產(chǎn)生的能量沿DNA鏈單向移動(dòng)。 參考答案是：DNA解旋酶2.DNA pol的生物學(xué)功能是（） 參考答案是：前導(dǎo)鏈合成3.DNA pol的生物學(xué)功能是（） 參考答案是：前導(dǎo)鏈起始和后續(xù)鏈合成4.在DNA復(fù)制過程中，另一條非連續(xù)合成的子鏈稱為（）。 參考答案是：后續(xù)鏈5.在DNA復(fù)制過程中，連續(xù)合成的鏈稱為（）。 參考答案是：前導(dǎo)鏈6.在DNA復(fù)制過程中，另一條非連續(xù)合成的子鏈稱為（）。 參考答案是：后續(xù)鏈7.在DNA復(fù)制過程中，連續(xù)合成的鏈稱為（） 參考答案是：前導(dǎo)鏈8.X174環(huán)狀DN

14、A的復(fù)制方式為（）型復(fù)制。 參考答案是：滾環(huán)9.Ecoli DNA的復(fù)制方式是（）型復(fù)制； 參考答案是：二、判斷題(4分)1.DNA的復(fù)制需要DNA聚合酶和RNA聚合酶。 參考答案是：正確2.所謂半保留復(fù)制就是以DNA親本鏈作為合成新子鏈DNA的模板，這樣產(chǎn)生的新的雙鏈DNA分子由一條舊鏈和一條新鏈組成。 參考答案是：正確3.在原核細(xì)胞內(nèi)DNA引物酶是同解旋酶緊密地耦聯(lián)在一起的，而真核細(xì)胞的DNA引物酶是同DNA pol緊密地耦聯(lián)在一起的 參考答案是：正確4.在DNA復(fù)制中，先導(dǎo)鏈上DNA沿53方向合成，而在后續(xù)鏈上則沿35方向合成。 參考答案是：不正確三、單選題(8分)1.使DNA超螺旋結(jié)構(gòu)

15、松馳的酶是（C） A 引發(fā)酶 B 解旋酶 C 拓?fù)洚悩?gòu)酶 D 端粒酶 E 連接酶2.真核生物復(fù)制子有下列特征，它們（C ） A 比原核生物復(fù)制子短得多，因?yàn)橛心┒诵蛄械拇嬖?B 比原核生物復(fù)制子長得多，因?yàn)橛休^大的基因組 C 通常是雙向復(fù)制且能融合 D 全部立即啟動(dòng)，以確保染色體的S期完成復(fù)制 E 不是全部立即啟動(dòng)，在任何給定的時(shí)間只有大約15%具有活性3.一個(gè)復(fù)制子是（C） A 細(xì)胞分裂期間復(fù)制產(chǎn)物被分離之后的DNA片段 B 復(fù)制的DNA片段和在此過程中所需的酶和蛋白質(zhì) C 任何自發(fā)復(fù)制的DNA序列（它與復(fù)制起點(diǎn)相連） D 任何給定的復(fù)制機(jī)制的產(chǎn)物（如單環(huán)） E 復(fù)制起點(diǎn)和復(fù)制叉之間的DNA

16、片段4.原核生物DNA復(fù)制中， DNA Pol III；解鏈酶；DNA Pol I；DNA指導(dǎo)的RNA Pol；DNA連接酶；SSB；它們的作用順序是（E ） A ； B ； C ； D ； E 四、名詞解釋(19分)1.semi-conservation replication：(3分) 半保留復(fù)制，DNA復(fù)制時(shí)新合成的DNA的一條鏈?zhǔn)切潞铣傻模粭l鏈由原DNA保留，故稱DNA的復(fù)制為半保留復(fù)制。2.復(fù)制體：(3分) DNA復(fù)制時(shí)由許多酶和蛋白質(zhì)聚集在一起構(gòu)成復(fù)制體。3.試闡述原核生物DNA復(fù)制與真核生物DNA復(fù)制的異同點(diǎn)：(10分)相同點(diǎn)：都都是保留和半不連續(xù)復(fù)制，復(fù)制過程都有起始，延長和

17、終止三階段，都必須有相應(yīng)功能的Pr（如SSB）和DNA pol參加。不同點(diǎn)：DNA pol，其中DNA pol是主要的DNA pol。真核生物有DNA pol、，其中DNA pol、DNA pol是主要的DNA pol；復(fù)制起點(diǎn)和速度不同：原核生物只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，而真核生物有多個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。原核生物復(fù)制速度大于真核生物；真核生物在完成復(fù)制之前，各個(gè)起始點(diǎn)上的DNA的復(fù)制不能再開始，而在快速生長的原核生物中，復(fù)制起始點(diǎn)上可以連續(xù)開始新的DNA復(fù)制。引物酶：原核細(xì)胞中引物酶同解族酶偶聯(lián)，而真核細(xì)胞內(nèi)引物酶同后滯鏈的復(fù)制酶DNA pol偶聯(lián)。鏈的延伸：原核生物中DNA pol同時(shí)負(fù)責(zé)前導(dǎo)鏈和后續(xù)鏈合

18、成，而真核生物由pol合成后滯鏈，pol負(fù)責(zé)合成前導(dǎo)鏈。4.回環(huán)模型：(3分) DNA雙螺旋是同時(shí)進(jìn)行復(fù)制的，在復(fù)制叉處后滯鏈模板形成一個(gè)環(huán)，以適應(yīng)雙鏈同時(shí)進(jìn)行復(fù)制。這種復(fù)制模型稱為回環(huán)模型?；丨h(huán)模型認(rèn)為，DNA聚合酶不對(duì)稱二聚體復(fù)合物能同時(shí)完成前導(dǎo)鏈和后滯鏈的合成，但前導(dǎo)鏈總比后滯鏈先形成一個(gè)片段，后滯鏈總遲緩一個(gè)片段，所以同時(shí)進(jìn)入合成反應(yīng)的兩條親代模板鏈片段不互補(bǔ)。在復(fù)制體結(jié)構(gòu)中，后滯鏈模板繞聚合酶形成180º折返環(huán)，穿過聚合酶的裂縫，從而使這兩條模板鏈在此呈相同的35走向。隨著后滯鏈模板在聚合酶中穿行，聚合酶便從RNA引物合成岡崎片段。當(dāng)合成子鏈達(dá)到前一段岡崎片段的5-P端時(shí)，

19、后滯鏈模板即脫離開DNA聚合酶，回環(huán)解開。與此同時(shí)，前移的復(fù)制體內(nèi)引物酶又起始轉(zhuǎn)錄一段新的RNA引物。復(fù)制體中的DNA聚合酶而聚體總是同時(shí)合成出兩條子鏈，只是與前導(dǎo)鏈相比，后滯鏈總是推移了一個(gè)岡崎片段。五、簡答題(30分)1.簡述DNA復(fù)制的過程。(10分)2.以大腸桿菌為例，說明DNA復(fù)制的起始過程。(10分)1、DnaA結(jié)合到OriC右側(cè)的4個(gè)9bp共同序列上，直到達(dá)20-40個(gè)DnaA單體蛋白結(jié)合成一個(gè)核心。然后DnaA蛋白作用于OriC左側(cè)的3個(gè)13bp重復(fù)序列上，這幾個(gè)位點(diǎn)的DNA融化解鏈，形成開放復(fù)合物。2、DnaB和DnaC以聚集體的形式與開放復(fù)合物偶聯(lián)，形成一個(gè)復(fù)合物。3、每個(gè)

20、DnaB六聚體結(jié)合6個(gè)DnaC單體，產(chǎn)生的蛋白聚集體為480KD，直徑6nm球狀體。4、DnaA旋轉(zhuǎn)酶使解旋產(chǎn)生的正超恢復(fù)為負(fù)超，SSB使產(chǎn)生的單鏈保持單鏈狀態(tài)。5、DNA pol從Ori區(qū)閱讀，并在Ori區(qū)終止，產(chǎn)生一段RNA引物，其3'-OH引導(dǎo)DNA pol的合成反應(yīng)。3.試述DNA復(fù)制過程中需要哪些酶和蛋白質(zhì)參與，各有何功能？(10分)DNA聚合酶：DNA合成引物酶和RNA聚合酶：合成引物解螺旋酶：解開螺旋SSB：使解開的螺旋保持單鏈狀態(tài)DNA連接酶：岡崎片段的連接旋轉(zhuǎn)酶：超螺旋變?yōu)樨?fù)超螺旋第五章 基因的轉(zhuǎn)錄一、填空題(13分)1.發(fā)現(xiàn)乳糖操縱子而獲得諾貝爾獎(jiǎng)的兩位科學(xué)家是（）

21、和（） 參考答案是：Jacob，Monod2.E.coli RNA pol全酶中亞基的功能是（）。 參考答案是：識(shí)別起始位點(diǎn)3.E.coli RNA pol全酶中沒有（）亞基的酶稱為核心酶。 參考答案是：4.E.coli RNA pol全酶的亞基組成為（） 參考答案是：225.真核生物的mRNA加工過程中，在3端加上（）結(jié)構(gòu) 參考答案是：polyA6.識(shí)別轉(zhuǎn)錄終止部位的是（）因子 參考答案是：7.RNA轉(zhuǎn)錄過程中識(shí)別轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的是（）因子 參考答案是：8.在3端加上的polyA尾巴由（）酶催化 參考答案是：PolyA聚合酶9.真核生物的mRNA加工過程中，5端加上（） 參考答案是：帽子結(jié)構(gòu)10

22、.基因轉(zhuǎn)錄時(shí)，產(chǎn)物RNA鏈有（）bp個(gè)核苷酸與模板形成RNA-DNA雜合雙鏈。 參考答案是：1211.在RNA pol結(jié)合和轉(zhuǎn)錄的DNA模板區(qū)域，有（）bp DNA 形成解鏈區(qū)， 參考答案是：1712.真核生物中已發(fā)現(xiàn)三種RNA Pol，其中（）催化的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是mRNA。 參考答案是：RNA Pol II二、判斷題(1分)1.所有高等真核生物的啟動(dòng)子中都有TATA盒結(jié)構(gòu) 參考答案是：不正確三、單選題(10分)1.下列關(guān)于mRNA的描述錯(cuò)誤的是（A ） A 原核細(xì)胞的mRNA在翻譯開始前需加Poly（A）尾巴 B 在原核細(xì)胞的許多mRNA攜帶著幾個(gè)多肽鏈的結(jié)構(gòu)信息 C 真核細(xì)胞mRNA在5端有特

23、殊的帽子結(jié)構(gòu) D 真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄生成的mRNA經(jīng)常被加工 E 真核細(xì)胞mRNA是由RNA Pol II催化合成的2.無論是在原核生物還是在真核生物中，初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物都需經(jīng)過一定程度的修飾和加工，才能表現(xiàn)其功能。在真核生物，mRNA有多種修飾方式但不包括（ C） A 5端加帽子結(jié)構(gòu)； B 經(jīng)剪接移除內(nèi)含子； C 3端加CCA結(jié)構(gòu)； D 3端加Poly（A）尾巴；3.真核生物中tRNA和5S rRNA的轉(zhuǎn)錄由哪種酶催化（D ） A RNA Pol I； B 逆轉(zhuǎn)錄酶； C RNA Pol II； D RNA Pol III； E RNA Pol全酶；4.關(guān)于啟動(dòng)子的敘述哪項(xiàng)是正確的（ C） A mRN

24、A開始被翻譯的序列； B 開始轉(zhuǎn)錄生成mRNA的DNA序列； C RNA Pol開始結(jié)合的DNA序列； D 產(chǎn)生阻遏物的基因； E 阻遏蛋白結(jié)合DNA的部位；5.下列哪一項(xiàng)是對(duì)三元轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的正確描述（C ） A 因子、核心酶和雙鏈DNA在啟動(dòng)子形成的復(fù)合物； B 全酶、TFI和解鏈DNA雙鏈形成的復(fù)合物； C 全酶、模板DNA和新生RNA形成的復(fù)合物； D 因子、核心酶和促旋酶形成的復(fù)合物四、名詞解釋(25分)1.CAP蛋白如何作為乳糖操縱子的正調(diào)節(jié)物起作用？：(10分) CAP即cCAM活化蛋白，結(jié)合cCAM的CAP可與乳糖操縱子的調(diào)節(jié)區(qū)結(jié)合，使RNA聚合酶對(duì)該DNA的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)。2.pro

25、moter：(3分)啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是位于結(jié)構(gòu)基因5端上游的一段DNA序列，能夠指導(dǎo)全酶(holoenzyme)同模板正確結(jié)合，活化RNA聚合酶，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。3.housekeeping gene：(3分) 看家基因，某些基因產(chǎn)物對(duì)生命全過程都是必須的，這類基因在一個(gè)生物個(gè)體的幾乎所有細(xì)胞中均表達(dá)。4.RNA interference：(3分) NA干擾, RNAi是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。5.RNA編輯：(3分) RNA編輯，基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA分子中，由于核苷酸的缺失，插入或置換

26、，基因轉(zhuǎn)錄物的序列不與基因編碼序列互補(bǔ)，使翻譯生成的蛋白質(zhì)的氨基酸組成，不同于基因序列中的編碼信息，這種現(xiàn)象稱為RNA編輯。6.暫停信號(hào)：(3分) DNA模板中4種堿基對(duì)RNA pol都是同等的，但當(dāng)RNA pol遇到特殊序列時(shí)，轉(zhuǎn)錄的速度會(huì)突然出現(xiàn)變化，可少于0.1bp/s，這段序列稱為暫停信號(hào)。暫停狀態(tài)的模板鏈多為GC富集區(qū)或反向重復(fù)序列五、簡答題(30分)1.mRNA前體加工中加尾和加帽的生物學(xué)功能有哪些？(10分)加尾的功能：有利于mRNA穿過核孔；穩(wěn)定mRNA；增強(qiáng)翻譯效率。加帽的功能：mRNA穩(wěn)定；增加蛋白質(zhì)合成效率；帽子結(jié)構(gòu)對(duì)mRNA前體剪接是必需的。2.試比較原核生物和真核生物

27、啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的差別(10分)Pribnow box（-10序列）、Sexfama box（-35序列）TATA box（Hogness box）、CAAT box、GC box3.試比較原核生物和真核生物基因轉(zhuǎn)錄的差異(10分)DNA pol的差別：原核生物只有一種DNA pol負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)錄所有類型的RNA；而真核生物有三種DNA pol（DNA pol），負(fù)責(zé)不同類型基因的轉(zhuǎn)錄，合成不同類型的RNA。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的差別：真核生物的初始產(chǎn)物包含內(nèi)含子序列，因此轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需經(jīng)過剪切，連接等過程除去內(nèi)含子；原核生物的初始產(chǎn)物與Pr序列成線性關(guān)系。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加工：真核生物轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物要經(jīng)過修飾作用，即與5端帽化和3

28、端聚合化。與基因結(jié)構(gòu)相吻合，原核生物mRNA是多順子反子，而真核生物mRNA是單順反子。時(shí)空差異：真核生物成熟的mRNA轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)參與Pr的生物合成，轉(zhuǎn)錄和翻譯相對(duì)獨(dú)立；而原核生物的轉(zhuǎn)錄和翻譯在細(xì)胞的同一部位進(jìn)行。六、論述題(10分)1.(10分)試比較真核生物RNA聚合酶II識(shí)別的啟動(dòng)子與原核生物RNA聚合酶所識(shí)別的啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，各結(jié)構(gòu)單元的功能是什么？第六章 蛋白質(zhì)的生物合成一、填空題(5分)1.DNA后隨鏈合成的起始要一段短的（），它是由（）以核糖核苷酸為底物合成的。 參考答案是：RNA引物；DNA引發(fā)酶2.在DNA復(fù)制和修復(fù)過程中，修補(bǔ)DNA螺旋上缺口的酶稱為（）。 參考答案是

29、：DNA連接酶3.真核生物蛋白質(zhì)生物合成的終止因子是（） 參考答案是：eRF4.原核生物多肽合成的起始氨基酸為（） 參考答案是：Met5.真核生物多肽合成的起始氨基酸為（） 參考答案是：fMet二、判斷題(5分)1.無義密碼子同等于終止密碼子。 參考答案是：正確2.核糖體小亞基最基本的功能是連接mRNA與tRNA，大亞基則催化肽鍵的形成。 參考答案是：正確3.密碼的偏愛性是指不同種屬的生物對(duì)簡并密碼具有不同的使用頻率 參考答案是：正確4.因?yàn)锳UG是蛋白質(zhì)合成的起始密碼子，所以甲硫氨酸只存在于蛋白質(zhì)的N末端。 參考答案是：不正確5.搖擺堿基位于密碼子的第三位和反密碼子的第一位 參考答案是：正確

30、三、單選題(20分)1.細(xì)菌核糖體由（ ）及（ ）亞基組成。( B) A 20S，40S B 30S，50S C 40S，60S D 50S，70S2.以下哪些不是遺傳密碼的特征？（A） A 密碼子與氨基酸的數(shù)量相同 B 密碼子幾乎在任一物種中都通用 C 一些氨基酸由多個(gè)密碼子編碼 D 密碼子是簡并的3.“同工tRNA”是（C） A 識(shí)別同義mRNA密碼子（具有第三堿基簡并性）的多個(gè)tRNA B 識(shí)別相同密碼子的多個(gè)tRNA C 代表相同氨基酸的多個(gè)tRNA D 由相同的氨酰tRNA合成酶識(shí)別的多個(gè) tRNA E 多種識(shí)別終止密碼子并導(dǎo)致讀的tRNA4.反密碼子中哪個(gè)堿基對(duì)參與了密碼子的簡并性

31、（搖擺性）？（A） A 第一個(gè) B 第二個(gè) C 第三個(gè) D 第一個(gè)與第二個(gè) E 第二個(gè)與第三個(gè)5.核糖體的E位點(diǎn)是（B） A 真核mRNA加工位點(diǎn) B tRNA離開原核生物核糖體的位點(diǎn) C 核糖體中受EcoR I限制的位點(diǎn) D 電化學(xué)電勢(shì)驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的位點(diǎn)6.起始因子IF-3的功能是（B） A 如果同40S亞基結(jié)合，將促進(jìn)40S與60S亞基的結(jié)合 B 如果同30S亞基結(jié)合，將促進(jìn)30S與50S亞基的結(jié)合 C 如果同30S亞基結(jié)合，促進(jìn)30S亞基的16S rRNA與mRNA的SD序列相互作用 D 指導(dǎo)起始tRNA進(jìn)入30S亞基中與mRNA結(jié)合的P位點(diǎn) E 激活核糖體的GTP酶，以催化與亞基相連的GT

32、P的水解7.下列敘述不正確的是（A） A 共有20個(gè)不同的密碼子代表遺傳密碼 B 色氨酸和甲硫氨酸都只有一個(gè)密碼子 C 每個(gè)核苷酸三聯(lián)體編碼一個(gè)氨基酸 D 不同的密碼子可能編碼同一個(gè)氨基酸 E 密碼子的第三位具有可變性8.下列關(guān)于蛋白質(zhì)的生物合成的描述錯(cuò)誤的是（ A） A 活化氨基酸的羧基與相應(yīng)tRNA 5端核苷酸中核糖上的3羥基以酯鍵連接 B 完成多肽鏈合成以前，甲酰甲硫氨酸殘基就從N端切掉 C mRNA上密碼子的閱讀方向是由53端 D 多肽鏈從N端C端延伸 E 新合成的多肽鏈需經(jīng)加工修飾才具有生物活性9.反密碼子是UGA，它可識(shí)別下列哪個(gè)密碼子（ C） A ACU B CUA C UCA

33、D UAC10.稀有核苷酸存在于下列哪一類核酸中（C ） A rRNA； B mRNA； C tRNA； D 核仁DNA； E mitDNA；四、名詞解釋(38分)1.密碼偏愛性：(10分) 2.簡述真核細(xì)胞中翻譯終止的過程：(10分) 由于氨酰tRNA上沒有反密碼子能夠與三個(gè)終止密碼子互補(bǔ)配對(duì)，因此翻譯終止。終止并需要tRNA的協(xié)助，此時(shí)沒有氨基酸能夠連接到位于P位點(diǎn)的肽酰tRNA上。釋放因子（eRF）有助于終止的發(fā)生，可能使tRNA上的氨基酸C端不需要轉(zhuǎn)肽基和脫?；l(fā)生轉(zhuǎn)位。新生肽直接從P位點(diǎn)離開核糖體并進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)（細(xì)胞質(zhì)核糖體）或進(jìn)入轉(zhuǎn)位酶通道（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核糖體）。3.ORF：(3分) 開

34、放閱讀框，從起始密碼子ATG開始到終止密碼子為止的編碼AA的核苷酸序列。4.trans-acting factor：(3分) 反式作用因子，是直接或間接識(shí)別和結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄的蛋白質(zhì)。5.反SD序列：(3分) 與mRNA上的SD序列相對(duì)應(yīng)，在核糖體小亞基16SrRNA上含有一段UCCUCC序列，成為反SD序列6.延伸因子EF：(3分) 原核生物蛋白質(zhì)合成過程中負(fù)責(zé)氨酰-tRNA進(jìn)入核糖體的A位的延伸因子為EF-Tu和EF-Ts，負(fù)責(zé)移位的是EF-G。7.SD序列：(3分) AUG上游的913個(gè)核苷酸有一段可與核糖體結(jié)合的共同序列，一般為AGGAGG，稱為SD

35、序列。與核糖體16S rRNA的3端的CCUCCU互補(bǔ)，使結(jié)合于30S亞基上的起始tRNA正確定位于mRNA的起始密碼子AUG。8.擺動(dòng)假說：(3分) 1966年，Crick提出了擺動(dòng)假說(wobble)，認(rèn)為密碼子與反密碼子的配對(duì)中，前兩對(duì)嚴(yán)格遵守堿基配對(duì)原則，第三對(duì)堿基有一定自由度可以擺動(dòng)，因而使某些tRNA可以識(shí)別1個(gè)以上的密碼子。擺動(dòng)假說也稱為三中讀二（2 out of 3 reading）。五、簡答題(40分)1.簡述啟動(dòng)子、帽子結(jié)構(gòu)、AUG的區(qū)別？(10分)2.原核生物的蛋白質(zhì)合成分為哪些階段？簡述各階段的主要事件。(10分) 3.簡述真核與原核細(xì)胞中翻譯起始的主要區(qū)別(10分)1

36、、起始因子不同：原核生物翻譯起始因子為IF1，IF2，IF3。真核生物起始因子為eIF、eIF2、eIF3等。2、模板不同：真核生物有帽子、尾巴，原核無。3、真核生物40S復(fù)合物形成需要帽子結(jié)合蛋白，原核30S起始復(fù)合物形成不需要。4、核糖體不同：真核翻譯起始有關(guān)核糖體為40S，原核為30S。5、起始氨基酸：真核生物為fMet，原核為Met。4.論述原核生物蛋白質(zhì)生物合成過程(10分)蛋白質(zhì)合成起始：IF1、IF2、IF3、GTP等（2分）蛋白質(zhì)合成延伸：進(jìn)位（EF-Tu、EF-Ts），肽鍵的形成，移位（EF-G）（6分）蛋白質(zhì)合成終止：RF-1、RF-2、RF-3（2分）第七章 PCR技術(shù)一

37、、填空題(4分)1.采用 PCR技術(shù)可擴(kuò)增兩個(gè)引物之外的未知序列。 參考答案是：反向PCR2.設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)引物時(shí)，引物3末端的末位堿基最好不用（） 參考答案是：A3.PCR的英文全稱是（） 參考答案是：polymerase chain reaction4.PCR是由美國科學(xué)家（）等人在1983年發(fā)明的 參考答案是：Mullis二、判斷題(1分)1.所謂引物就是同DNA互補(bǔ)的一小段RNA分子 參考答案是：不正確三、名詞解釋(12分)1.multiple cloning site：(3分) 多克隆位點(diǎn), MCS，是包含多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)的一段很短的DNA序列。也稱為多位點(diǎn)接頭。多克隆位點(diǎn)廣泛應(yīng)用

38、于分子克隆和亞克隆工程中。2.RT-PCR：(3分) 反轉(zhuǎn)錄PCR，先反轉(zhuǎn)成CDNA，再用cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，一般用于基因表達(dá)分析。3.nested-PCR：(3分) 巢式PCR，先用一對(duì)外引物擴(kuò)增，然后以第一次PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，再用內(nèi)引物進(jìn)行擴(kuò)增。4.“中途進(jìn)退式”PCR：(3分) Drop-in Drop-out PCR，外引物設(shè)計(jì)得比內(nèi)引物長一些，且用量較少，同時(shí)在第一次PCR時(shí)采用較高的退火溫度，而第二次PCR采用較低的退火溫度，這樣在第一次PCR時(shí)，由于較高的退火溫度內(nèi)引物不能與模板結(jié)合，故只有外引物擴(kuò)增產(chǎn)物。經(jīng)過若干循環(huán),待外引物基本消耗完畢后,無須取出第一次PCR產(chǎn)

39、物,只需降低退火溫度,即可直接進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增.四、簡答題(50分)1.inverse PCR(10分) 反向PCR，用于擴(kuò)增靶DNA區(qū)段之外的兩側(cè)未知DNA序列的方法。2.已知A基因的cDNA序列如下，起始密碼和終止密碼均用框標(biāo)出，試設(shè)計(jì)一對(duì)引物擴(kuò)增該基因的ORF。(10分)上游引物：5-ATGTCCGAAGTAATCGAAGAACATC-3（20-25bp均正確）下游引物：5-TTAATATCGTCTCGTCGTCCTTCCTC-3 (反向互補(bǔ)，終止密碼子包括在內(nèi))3.PCR引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)該注意哪些問題？(10分)1）引物長度以16-30為宜；2）、引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為

40、宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段；3）引物堿基：G+C含量以40-60%為宜；4）堿基分布的隨機(jī)性：ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的相同堿基成串排列。尤其是引物的3端，不應(yīng)有連續(xù)3個(gè)G或C；5）避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。6）兩引物之間不互補(bǔ)，一對(duì)引物之間不應(yīng)多于4個(gè)連續(xù)堿基有互補(bǔ)性，以免產(chǎn)生引物二聚體；7）引物3端是引發(fā)延伸的點(diǎn)，不應(yīng)錯(cuò)配：由于ATGC引起錯(cuò)配有一定規(guī)律，以引物3端A影響最大，因此，3端的末位堿基最好選TCG，而不選A。8）引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性

41、。同源性不要超過70%或有連續(xù)8個(gè)互補(bǔ)堿基同源；9）引物5端可以修飾4.寫出一PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件(10分)PCR反應(yīng)體系（4分）10XPCR Buffer 2.5ulMgCl2 1.5uldNTPs 3ulP1 1ulP2 1ul模板 1ulTaqase 0.5ulQQH2O 14.5ulPCR反應(yīng)條件（3分）94 3min，34cycles （94 50s，55 50s，72 1min），72 8min，4 hold5.試述PCR技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用(10分)依據(jù)體內(nèi)DNA的半保留復(fù)制機(jī)理及DNA分子在不同溫度下雙鏈和單鏈可以相互轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，使雙鏈DNA

42、變成兩條單鏈DNA，單鏈DNA用4種dNTPs在引物和DNA pol的作用下合成新生的DNA互補(bǔ)鏈。包括高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個(gè)階段。PCR的應(yīng)用：在分子生物學(xué)中的應(yīng)用；在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用；在法醫(yī)鑒定方面的應(yīng)用。第八章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)一、填空題(1分)1.RNA提取時(shí)，由于RNA易降解，需要對(duì)離心管、槍頭等用（）水處理 參考答案是：DEPC二、名詞解釋(38分)1.Southern blotting：(3分) Southern雜交是分子生物學(xué)的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是將待檢測(cè)的DNA樣品固定在固相載體上,與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交,在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)。

43、通過Southern雜交可以判斷被檢測(cè)的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。2.BLAST：(3分) BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫或DNA數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行相似性比較的分析工具。3.NCBI網(wǎng)站包含哪些信息和功能？：(10分) NCBI網(wǎng)站包括PubMed數(shù)據(jù)庫、核酸數(shù)據(jù)庫、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫、EST數(shù)據(jù)庫等。可以查找序列、序列比對(duì)等功能。4.gene chip：(3分) 基因芯片，該技術(shù)系指將大量探針分子固定于支持物上后與標(biāo)記的樣品分子進(jìn)行雜交，通過檢測(cè)每個(gè)探針分子的雜交信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)而獲取樣品分子的

44、數(shù)量和序列信息。通俗地說，就是通過微加工技術(shù)，將數(shù)以萬計(jì)、乃至百萬計(jì)的特定序列的DNA片段（基因探針），有規(guī)律地排列固定于2cm2 的硅片、玻片等支持物上，構(gòu)成的一個(gè)二維DNA探針陣列，與計(jì)算機(jī)的電子芯片十分相似，所以被稱為基因芯片。5.Blastn：(10分) BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在DNA數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行相似性比較的分析工具，用DNA序列在DNA序列數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對(duì)的方法。6.Blastp：(3分) BLAST (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行相似性比較的分析工具，

45、用蛋白質(zhì)序列在蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行比對(duì)的方法。7.NCBI：(3分) 美國國家生物技術(shù)信息中心，是三大核酸序列數(shù)據(jù)庫之一，其網(wǎng)址是。8.RACE：(3分) rapid amplification of cDNA end。包括5RACE技術(shù)和3RACE技術(shù)。三、簡答題(180分)1.如何設(shè)計(jì)簡并引物？(10分) 2.列舉2-3個(gè)常用的分子標(biāo)記。(10分) 3.如何查找一個(gè)基因的序列？(10分) 4.列舉2-3個(gè)你知道的生物信息學(xué)常用軟件。(10分) 5.RNA提取過程中要注意哪些問題？(10分) 6.如何確定RNA提取的質(zhì)量？(10分) 7.引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)該注意什

46、么？(10分) 8.重組載體構(gòu)建中，限制性內(nèi)切酶如何確定？(10分) 9.簡述如何將一個(gè)基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中？(10分)10.簡述DNA提取的步驟(10分) 11.什么是RT-PCR？可應(yīng)用在分子生物學(xué)的哪些方面？(10分) 12.簡述核酸分子雜交的種類及其作用原理(10分)Southern雜交和Northern雜交。Southern雜交原理：研究基因拷貝數(shù)的一個(gè)方法。將電源分離的待測(cè)DNA片段轉(zhuǎn)印并結(jié)合到膜上，然后用標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)待測(cè)DNA的一種方法。Northern雜交原理：研究基因表達(dá)的一個(gè)方法。雜交受體是RNA，探針是DNA或RNA片段。原理是將待測(cè)的RNA樣品經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)印并結(jié)

47、合到膜上，然后用標(biāo)記的DNA探針檢測(cè)待測(cè)RNA的一種方法。13.據(jù)你所知，分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中所涉及的引物有哪幾種，各有何用途和特點(diǎn)(10分) 1、PCR引物：一對(duì)，擴(kuò)增引物之間的序列。2、簡并引物：一個(gè)氨基酸可能有多個(gè)遺傳密碼，包含所有氨基酸可能的密碼的一組引物。簡并引物可以通過氨基酸序列或核苷酸序列比對(duì)后設(shè)計(jì)。3、隨機(jī)引物：一定數(shù)量的核苷酸隨機(jī)排列，可用作反轉(zhuǎn)錄。4、ologo（dT）17引物：用于RT-PCR或反轉(zhuǎn)錄。14.什么是RACE技術(shù)? 如何采用RACE技術(shù)克隆得到基因的cDNA全長序列？(10分)RACE是一項(xiàng)基于已知cDNA序列快速克隆5和3末端序列的技術(shù)。常用的方法是：先獲取m

48、RNA，去掉mRNA 5端帽子，加上寡聚接頭，逆轉(zhuǎn)錄后，以寡聚接頭部分序列和3端反向引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得5端序列。3RACE以5基因特異引物和3端寡聚dT下游部分序列為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增獲得3端序列。5RACE、3RACE和核心片段通過拼接得到基因cDNA全長15.通過Northern雜交我們可以獲取什么信息？(10分) 可以表明探針?biāo)淼幕蛟谔囟〞r(shí)段、特定條件下或某一發(fā)育階段的mRNA水平的表達(dá)情況。由Northern雜交信號(hào)的強(qiáng)弱可比較同一基因在不同組織、不同發(fā)育階段或不同條件下的表達(dá)差異。16.敘述微生物（大腸桿菌）、植物和動(dòng)物轉(zhuǎn)基因最常用的方法及原理(10分)微生物轉(zhuǎn)化方法：C

49、aCl2轉(zhuǎn)化法，微生物用CaCl2制作感受態(tài)細(xì)胞，用熱擊方法將重組載體導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，通過含相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)基平板篩選，挑選抗性單菌落，PCR鑒定。 植物轉(zhuǎn)化方法：農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，將重組載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中獲得重組農(nóng)桿菌，用農(nóng)桿菌浸染植物傷口，共培養(yǎng)后農(nóng)桿菌中T-DNA片段可與植物核DNA發(fā)生重組，通過組織培養(yǎng)方法再生出完整植株，抗生素篩選抗性植株，PCR鑒定。動(dòng)物轉(zhuǎn)基因方法：顯微注射法。用極細(xì)的注射針將外源基因片段直接注射到胚胎細(xì)胞，通過胚胎培養(yǎng)獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。17.如何將一個(gè)基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，簡單寫出實(shí)驗(yàn)流程(10分)RNA提取、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA、基因PCR擴(kuò)增、回收、重組載體構(gòu)建、大腸桿菌

50、感受態(tài)的制備、轉(zhuǎn)化、挑單斑、PCR檢測(cè)18.什么是藍(lán)白斑篩選法？長出的白斑一定是轉(zhuǎn)基因的嗎？為什么？(10分)很多載體都攜帶有一段來自大腸桿菌的Lac操縱子DNA區(qū)段，其中含有LacZ基因，它編碼-半乳糖苷酶N端的116個(gè)氨基酸，載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞為LacZ基因型，它表達(dá)-半乳糖苷酶的C端肽鏈，當(dāng)載體與宿主細(xì)胞同時(shí)表達(dá)兩個(gè)片段時(shí)，宿主細(xì)胞才有-半乳糖苷酶活性，使特異的底物X-Gal變?yōu)樗{(lán)色化合物，而重組子由于基因插入使基因失活，不能形成互補(bǔ)，在含有X-Gal的平板上，含陽性重組子的細(xì)菌為無色菌落。白色菌落并不一定是轉(zhuǎn)基因菌株。因?yàn)橐韵虑闆r也會(huì)出現(xiàn)白斑：載體自連；Amp、IPTG、Xgal沒涂均

51、勻；有時(shí)插入片段也出現(xiàn)藍(lán)斑，只要編碼框沒有被破壞。四、論述題(20分)1.(20分)將Bt基因轉(zhuǎn)入煙草，從載體的選擇到外源基因的表達(dá)，列舉你用的步驟Bt基因首先克隆入合適的克隆載體，再轉(zhuǎn)入植物雙元表達(dá)載體，使Bt基因轉(zhuǎn)入雙元表達(dá)載體的MCS中，上游是CaMV啟動(dòng)子，利用雙元載體的T-DNA進(jìn)行基因的轉(zhuǎn)移、整合。重組的雙元表達(dá)載體以根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)，轉(zhuǎn)入煙草愈傷組織，利用葉盤法進(jìn)行轉(zhuǎn)化，外源Bt基因整合到煙草基因組中，伴隨宿主基因的表達(dá)而表達(dá)。轉(zhuǎn)基因植株的篩選可以利用T-DNA左右邊界間的抗性標(biāo)記進(jìn)行，如卡拉抗性標(biāo)記?？剐灾仓甑腟outhern雜交證實(shí)DNA水平上Bt基因的整合；Northern雜

52、交，確證Bt基因的轉(zhuǎn)錄；Western雜交確證表達(dá)的蛋白質(zhì)。分子生物學(xué)綜合測(cè)試卷1一、填空題(31分)1.真核生物蛋白質(zhì)生物合成的終止因子是（ ）。 參考答案是：eRF2.真核生物mRNA的5'末端有一個(gè)帽子結(jié)構(gòu)是（ ），3'末端有一個(gè)尾巴是（）。 參考答案是：m7GpppAp；polyA3.內(nèi)含子和外顯子聯(lián)結(jié)處的序列遵守（）法則。 參考答案是：GT-AG4.基因重疊現(xiàn)象是英國分子生物學(xué)家（） 在測(cè)定噬菌體X174的DNA序列時(shí)發(fā)現(xiàn)的。 參考答案是：Sanger5.在RNA pol結(jié)合和轉(zhuǎn)錄的DNA模板區(qū)域，有（）bpDNA 形成解鏈區(qū)，產(chǎn)物RNA鏈有（）個(gè)核苷酸與模板形成RN

53、A-DNA雜合雙鏈。 參考答案是：17；126.DNA pol的生物學(xué)功能是（），DNA pol的生物學(xué)功能是（）。 參考答案是：前導(dǎo)鏈起始和后續(xù)鏈合成；前導(dǎo)鏈合成7.設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)引物時(shí)，引物3末端的末位堿基最好不用（）。 參考答案是：A8.PCR是由美國科學(xué)家（）等人在1983年發(fā)明的，PCR的英文全稱是（）。 參考答案是：KB Mullis；polymerase chain reaction9.在個(gè)體發(fā)育中，位于人類第（）號(hào)染色體上的型珠蛋白亞基的表達(dá)時(shí)間順序是（） ，位于人類第（）號(hào)染色體上的型珠蛋白亞基的表達(dá)時(shí)間順序是（） 。 參考答案是：16； - ；11； - - -10.Ecoli DNA的復(fù)制方式是（）型復(fù)制；X174環(huán)狀DNA的復(fù)制方式為（）型復(fù)制。 參考答案是：，滾環(huán)11.人類基因組的大小是（），人類基因組計(jì)劃中中國占的比例是（）。 參考答案是：3X109；1%12.識(shí)別轉(zhuǎn)錄終止部位的是（ ） 因子 參考答案是：13.RNA轉(zhuǎn)錄過程中識(shí)別轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)