1、制定日期：XX(廣州)有限公司三層文件編號：修定日期：修改版本號：實施日期：題目：檢驗方法粗蛋白含量的檢測-凱氏定氮法本份頁他：共4頁制定部門：品控部貞他：411、原理蛋白質為含氮有機物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質分解，分解的氨與硫酸結合成硫酸鏤，然后堿化蒸儲使氨游離，用硼酸吸收后，再以硫酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質的含量。2、試劑所有試劑均用不含氮的蒸儲水配制。(1) 消化片或消化藥包(每包含0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀)；(2) 硫酸；(3) 混合指示液：1份1g/L甲基紅乙醇溶液與5份1g/L澳甲酚綠乙醇溶液臨用時混合。也可用2份1g/L甲基紅乙醇溶

2、液與1份1g/L次甲基藍乙醇溶液，臨用時混合。(4) 氫氧化鈉溶液(400g/L);(5) 硼酸溶液(20g/L);(6) 硫酸標準溶液C(1/2H2SO4)=0.05mol/L;(7) 無氮紙片。(8) 器(1) 消化系統(tǒng)：GerhardtKJELDATHERMKB消化系統(tǒng)。(2) 蒸儲系統(tǒng)：TecatorKjeltecSystem1002DistillingUnit。(3) 250ml錐形接收瓶。(4) 電動植物粉碎機。(5) 品預處理大豆樣品經(jīng)電動植物粉碎機充分磨碎后，收集所有粉碎后的豆粉(包括粉碎機腔內(nèi)壁附著的豆粉)，混和均勻后備用。(6) 作方法(1) 用無氮紙準確稱取0.20000

3、.4000g豆粉(相當于氮3040mg),或用5ml單標移液管吸取5ml20ml(相當于氮3040mg)液體樣品，置于消化管中，力口入一包消化藥包(或消化片)，緩緩加入10ml硫酸，稍搖勻后架在消化器中鐵架上，接好廢氣吸收連通管，開啟廢氣吸收裝置。同時做試劑空白及氮回收率試驗。(2) 將消化器溫度設置在200£,待溫度升到200OC左右，將消化管放入消化孔中，慢慢地升溫到420(C,至液體呈藍綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱60分鐘。關閉消化器電源，讓消化管冷卻后往消化管中加入蒸儲水至約1/3體積。制士 7E核 準審 核制定日期：XX (廣州)有限公司 三層文件編號：修定日期：修改版本號：

4、(3) 向接收瓶內(nèi)加入50ml硼酸溶液(20g/L)及23滴混合指示劑，將接收實施日期：題目：檢驗方法本份頁他：共4頁制定部門：品控部粗蛋白含量的檢測-凱氏定氮法貞他：42瓶放入蒸儲系統(tǒng)托盤上，并使冷凝管下端插入液面下。將已加入蒸儲水的樣品消化管放于正確位置，關上安全門，輕輕拉下堿泵手柄，往消化管內(nèi)加入50ml堿液。(4) 拉下蒸氣手柄，通入蒸氣，蒸儲于接收瓶內(nèi)。當儲出液體積為150200ml,移動接收瓶，使冷凝管下端離開液面，關閉蒸氣，打開安全門，然后用少量蒸儲水沖洗冷凝管下端外部，取下接收瓶。(5) 以硫酸標準溶液(0.0500mol/L)滴定至灰色為終點。同時做試劑空白試驗及氮回收率試驗

5、。6、計算(V1-V2)XCX0.014X-XFX100m式中：X-上品中蛋白質的含量(液體樣品：g/100ml,固體樣品：g/100g);Vi-樣品消耗硫酸的體積，ml;V2-試劑空白消耗硫酸的體積，ml;C-硫酸標準溶液的濃度，mol/L;0.014-1.00ml硫酸C(I/2H2SO4)=1.000mol/L標準溶液中相當?shù)牡馁|量，g;F-氮換算為蛋白質的系數(shù)；m-液體樣品體積，ml(固體樣品重量g)。7、說明(1) 本法參照GB5009.585食品中蛋白質的測定。(2) 凱氏定氮法測定氮的含量，依據(jù)蛋白質中含氮的多少，換算為蛋白質的含量。各種食品中蛋白質的系數(shù)見附錄Co(3) 消化過

6、程中，加入硫酸鉀可以提高反應溫度，加入硫酸銅作為催化劑，提高反應速度。(4) 蒸儲過程中，不能使系統(tǒng)漏氣，放入堿液時應小心、緩慢?？筛鶕?jù)附錄A方法檢查蒸儲系統(tǒng)回收率。(5) 食品中還有非蛋白質物質含氮，故用此法測定蛋白質稱為粗蛋白。(6) 蒸儲時，蒸汽發(fā)生要充足、均勻，加堿要夠量，冷凝管出口應浸入吸收液中，防止氨損失。(7) 本法為直接蒸儲法，蒸儲終點的確定對測定樣品的準確程度影響很大，一般樣品儲出液超過150ml，氮可完全蒸出。(8)在消化過程的開始階段，由于劇烈的反應速度，將形成大量的帶有硫制士7E核準審核制定日期：XX(廣州)有限公司三層文件編號：修定日期：修改版本號：實施日期：題目：檢

7、驗方法本份貞他：共4頁制定部門：品控部粗蛋白含量的檢測-凱氏定氮法貞他：43酸的煙霧。此時排氣系統(tǒng)應滿負荷的工作510分鐘。然后排氣系統(tǒng)的效率應降低，以便煙霧能在消化管中回流，這個狀態(tài)將維持整個消化過程。為了使排入大氣環(huán)境的硫酸降低至最小，將排氣系統(tǒng)的效率降低到一個合適的水平上將是非常重要的。（9） 為了控制消化期間產(chǎn)生的泡沫，可在消化爐達到200OC左右時將消化管放入，然后溫度緩慢的升到420OC。（10） 根據(jù)附錄B可計算整個凱氏定氮系統(tǒng)的回收率。（11） 蒸儲前應選預熱蒸儲系統(tǒng)，方法是用一支空消化管及空接收瓶來進行蒸儲。（12） 大豆粉碎后要收集所有豆粉（包括粉碎機內(nèi)壁附著的豆粉），并攪

8、拌均勻，以免由于取樣不均勻而產(chǎn)生誤差。附錄A蒸儲系統(tǒng)的檢驗為了檢驗消化過程的準確性，得到一個可接受的回收率是很重要的。對于蒸儲滴定系統(tǒng)回收率一般要高于99.5%。1、使用純度）99.5%的硫酸鏤摩爾質量=132.14g/mol硫酸鏤（99.5%）中氮含量=21.09%稱重0.15g硫酸鏤放入消化管中，加入蒸儲水至1/3容積，加入50m140%的氫氧化鈉，進行蒸儲滴定：（滴定毫升空白）XCX1.401%氮=樣品體積mlC-1/2H2SO4標準溶液濃度，mol/L。實際氮含量回收率%=X10021.092、使用帶六水的硫酸亞鐵鏤摩爾質量=392.14g/mo1氮含量=7.145%稱重0.5g六水硫

9、酸亞鐵鏤放入消化管，加入蒸儲水于1/3容積，加入50m140%NaOH,進行蒸儲滴定：（滴定毫升一空白）XCX1.401%M樣品體積（ml）制核審士7E準核制定日期：,XX（廣州）有限公司編號：修定日期：三層文件修改版本號:實施日期：題目：檢驗方法本份貞他：共4頁制定部門：品控部粗蛋白含量的檢測-凱氏定氮法貞他：4-4C-1/2H2SO4標準溶液濃度，mol/L實際氮含量回收率跖=x1007.145附錄B消化系統(tǒng)的檢驗在日常工作中，為了確保高質量的分析結果，有必要在所有批次的消化和分析中都要包括一個監(jiān)測樣品。監(jiān)測這個樣品的檢驗結果，可以知道檢驗結果是否發(fā)生變化。1、消化一個已知含氮量的標準物質。氨基乙酸（甘氨酸）H2NCH2COOH分子量75.0714.01理論屬X10075.07Xp%p%-多基乙酸的純度。稱重500mg氨基乙酸（用無氮紙），加入所有試劑與檢驗樣品同時消化、蒸儲滴定。（滴定毫升一空白）xCX1.401實際氮=樣品重量（g）C-1/2H2SO4標準溶液濃度，mol/L。實際氮含量回收率%=X100理論氮含量包括消化在內(nèi)的回收率誤差應在士1%以內(nèi)。2、在實驗室內(nèi)制作一種參照樣品。與其他實驗室相比較檢驗其含量。在日常工作中作為監(jiān)測樣品，計算回收率，包括消化在內(nèi)的回收率誤差應在士