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文檔簡介

1、慢病毒載體構(gòu)建及包裝流程慢病毒載體構(gòu)建及包裝流程（一）實(shí)驗(yàn)流程（1和2為并列步驟）1.慢病毒過表達(dá)質(zhì)粒載體的構(gòu)建 設(shè)計(jì)上下游特異性擴(kuò)增引物，同時(shí)引 入酶切位點(diǎn)，PCR采用高保真KOD酶，3K內(nèi)突變率為0%從模板中（CDNA質(zhì)?；蛘呶膸欤┱{(diào)取目的基因CDSE（ coding sequenee）連入T載體。將CDS區(qū)從T載體上切下，裝入慢病毒過表達(dá)質(zhì)粒載體。2.慢病毒干擾質(zhì)粒載體的構(gòu)建合成siRNA對應(yīng)的DNA頸環(huán)結(jié)構(gòu)，退火后連入慢病毒干擾質(zhì)粒載 體3. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化 制備慢病毒穿梭質(zhì)粒及其輔助包裝 原件載體質(zhì)粒，三種質(zhì)粒載體分別進(jìn)行高純度無內(nèi)毒素抽提，共轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后6

2、 h更換 為完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)48和72h后，分別收集富含慢病毒顆粒的細(xì)胞 上清液，病毒上清液通過超離心濃縮病毒。想要了解更多詳細(xì)信息，可進(jìn)入 ，獲取更多技術(shù) 文檔。漢恒生物公司地址：上海市徐匯區(qū)斜土路1175號(hào)15樓實(shí)驗(yàn)室地址512上海市張江高科技園區(qū)蔡倫路1E-mail:serviceha nbio. net http:/www.ha nbio. net781號(hào)張江藥谷503慢病毒載體構(gòu)建及包裝流程2漢恒生物公司地址：上海市徐匯區(qū)斜土路1175號(hào)15樓實(shí)驗(yàn)室地址512上海市張江高科技園區(qū)蔡倫路E-mail:serviceha nbio. net http:/www.ha nbio. net 781號(hào)張江藥谷503（二）流程圖摘毒星粒構(gòu)建21厲4強(qiáng)ft命尙0天.骷疑

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