1、編號：STP-YZ-HY-004-00檢測儀器驗證報告Agilent 1200高效液相色譜儀浙江花園藥業(yè)有限公司1 概述：高效液相色譜法（High Performance LiquidChromatography，HPLC ）是一種現(xiàn)代液相色譜法，其基本方法是用高壓輸液泵將流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內(nèi)進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進行數(shù)據(jù)處理，得到測定結(jié)果。由于應(yīng)用了各種特性的微粒填料和加壓的液體流動相，本法具有分離性能高、分析速度快的特點。1.1 設(shè)備的描述本公司所用的高效液相色譜儀是由在線脫泡機、四元泵、自動進樣器、柱溫

2、箱、紫外檢測器以及相關(guān)管路等組成，主要是針對本公司所有適用高效液相色譜法分析的各種產(chǎn)品而購入的，該設(shè)備現(xiàn)安裝于QC 三樓儀器室（三）。設(shè)備名稱：高效液相色譜儀 型號：Agilent -1200 生產(chǎn)廠商：USA Agilent Technologies 1.2 設(shè)備檔案 1.3 儀器備件 1.4 維修服務(wù) 1.5 設(shè)備選擇標準依據(jù)來源與驗證標準 1.5.1 JJG705-2002液相色譜儀檢定規(guī)程 1.5.2中國藥典2005年版1.5.3 Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護保養(yǎng)規(guī)程（SOP-QC-GY-032-00） 2 驗證目的：為了確保Agilent-1200高效液相色譜儀的

3、設(shè)計符合要求，為了確保使用該儀器的所檢測數(shù)據(jù)真實可靠，為了確保該儀器的各項指標能達到該儀器所設(shè)計的性能指標。3 參與驗證的相關(guān)部門及其職責 3.1驗證小組3.1.1負責驗證方案的審批； 3.1.2負責驗證數(shù)據(jù)及結(jié)果的審核； 3.1.3負責驗證報告的審核； 3.1.4負責驗證周期的確認； 3.1.5負責發(fā)放驗證證書； 3.2工程部3.2.1負責設(shè)備的安裝、調(diào)試，并做好相應(yīng)的記錄； 3.2.2負責建立設(shè)備檔案； 3.2.3負責擬定驗證周期；3.2.4負責收集預(yù)、安裝確認的試驗記錄； 3.3質(zhì)量管理部3.3.1負責對驗證參數(shù)要求進行確認； 3.3.2負責根據(jù)檢驗結(jié)果出具檢驗報告單； 3.3.3負責儀

4、器、儀表的校驗；3.3.4負責起草設(shè)備操作、清潔和維護保養(yǎng)等方面的標準操作規(guī)程； 3.3.5負責設(shè)備日常的維護保養(yǎng)工作；4 驗證內(nèi)容 4.1 四元泵 4.1.1 泵的耐壓性將儀器各部分連接好，以100%甲醇為流動相，流量為1ml/min，按Agilent-1200高效液相色譜儀操作和維護保養(yǎng)規(guī)程啟動儀器，壓力平穩(wěn)后保持10min ，用濾紙檢查各管路接口處應(yīng)無濕跡，卸下色譜柱，堵住泵出口端（壓力傳感器以下），使壓力達到最大允許值的90%，保持5min 應(yīng)不漏液； 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 4.1.2 泵流量設(shè)定值誤差S S 、流量穩(wěn)定性誤差S R 啟動儀器，按上表的要求設(shè)定流量，壓力穩(wěn)定后

5、，在流動相出口處用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，收集上表規(guī)定時間流出的流動相，在分析天平上稱重，按式（1）、（2）計算S S 和S R ，結(jié)果記錄在下表中； 注：S s =(100% 式（1） F m -F s /Fs ×100% 式（2） S R =(Fmax -F min / F m ×式中：F m F m =(W2-W 1/(t ，流量實測值，ml/min； W 2 容量瓶+流動相的質(zhì)量，g ；W 1 容量瓶的質(zhì)量，g ； 試驗溫度下流動相的密度，g/mL；t 收集流動相的時間，min ； 同一組測量的算術(shù)平均值，mL/min；F S 流量設(shè)定值，

6、mL/min；F mF max 同一組測量中流量最大值，mL/min；F min 同一組測量中流量最小值，ml/min。檢查人/ 日期： 復(fù)核人/日期： 4.1.3 梯度誤差由梯度控制裝置設(shè)置階梯式的梯度洗脫程序，A 溶劑為純水，C 溶劑為甲醇，C 經(jīng)由5個階梯從0變到100%，如下圖所示，將輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱），開機以后以A 溶劑沖洗系統(tǒng)，基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行梯度程序，畫出梯度變化曲線，求出A 、C 溶劑不同比例時的記錄儀讀數(shù)，重復(fù)測量2次，計算平均值。從C 溶劑的含量及對應(yīng)的記錄儀讀數(shù)，按式（3）計算梯度誤差G ci ，取G ci 最大者作為儀器梯度誤差，應(yīng)不超過±3%

7、，結(jié)果記錄在下表中； 100% 式（3） 注：G ci =（L i -L m ）/L m × 式中：G ci 第i 段梯度誤差(%；L i 第i 段記錄儀讀數(shù)平均值；L m 各段記錄儀讀數(shù)平均值的平均值。檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 4.1.4 泵控制流動相比例的精密度開啟儀器，按照下表中的流動相比例設(shè)定流動相，用兩量筒（已校驗）接收流動相，經(jīng)10分鐘，比較在設(shè)定流動相比例的理論流出量與實際流出量，誤差允許范圍：F(1-F10%，F(xiàn) 為所測流動相組分所占的體積比： 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 4.2 柱溫箱溫度設(shè)定值誤差T S 和控溫穩(wěn)定性T C 的檢定將溫度計（已校驗，分度值

8、為0.1）放置在柱溫箱內(nèi)，選擇35和45進行檢定，按儀器說明書操作，通電升溫，待溫度穩(wěn)定后，記下溫度計讀數(shù)并開始計時，以后每隔10min 記錄一次讀數(shù)，共計7次，求出平均值，平均值與設(shè)定值之差為T S ，7次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性T C ，結(jié)果記錄在下表，柱溫箱溫度設(shè)定值誤差T S ±3，T C ±1； 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 4.3 紫外-可見檢測器 4.3.1 基線噪音和基線漂移選用C 18色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，紫外檢測器的波長設(shè)定為254nm ，待儀器穩(wěn)定后，記錄基線30min ，由檢測器的衰減倍數(shù)和測得的基線

9、峰峰高對應(yīng)的記錄儀標度，計算基線噪音，用檢測器自身的物理量（AU ）作單位表示，基線噪音應(yīng)不超過5×10-4； 注：N d =KB式中：K ：衰減倍數(shù)；B ：測得的基線峰峰高對應(yīng)的記錄儀標度 基線漂移在1h 內(nèi)偏離原點的值為 （AU/h），應(yīng)不超過5×10-3AU/h。檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 4.3.2 最小檢測濃度在4.3.1的色譜條件下，進樣量20µl ；取適量的萘，用甲醇稀釋制成1×10-7g/ml的溶液，連續(xù)進樣6次，記錄萘/甲醇溶液的色譜圖，由色譜峰高和基線噪聲峰峰高，按下式來計算最小檢測濃度（C L ），應(yīng)不超過1×10-7

10、g/ml，結(jié)果記錄在下表； 注：C L =2N d ×c×V H×20式中：N d ：基線噪聲峰峰高；c ：標準溶液濃度；H ：標準溶液的色譜峰高；V ：進樣體積檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 5 整機性能在4.3.2所記錄的色譜圖中，按下式計算Rsd 值，Rsd 2.0%，并將結(jié)果記錄在下表中； 12n 2(A -M 1Rsd=n -1M式中：M ：峰面積平均數(shù)；A ：峰面積；n ：測量次數(shù) 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 6 偏差說明及措施：7 驗證小組人員簽字/日期：8 偏差處理及驗證總結(jié)報告在整個驗證工作全部結(jié)束后，起草驗證方案的部門負責對驗證工作進行總結(jié)，并做出科學(xué)的評價，對驗證結(jié)果評價的內(nèi)容包括： 8.1. 驗證活動是否有遺漏；8.2 驗證實施過程中對驗證方案有無修改；修改的原因、依據(jù)及是否經(jīng)過批準； 8.3 驗證記錄是否完整；8.4 驗證試驗結(jié)果是否符合規(guī)定；偏差及對偏差的說明是否合理；是否需要進一步補充試驗；驗證結(jié)果由驗證小組審核，驗證報告經(jīng)驗證小組組長批準后生效。 9 再驗證要求： 9.1 再驗證周期：9.1.1 設(shè)備大修后需再校驗；9.1.2 由于檢修、調(diào)整、遷移或其它原因，可能對設(shè)備的安裝情況、主要技術(shù)參數(shù)和功能有影響時，