1、黃芪甲甙對(duì)大鼠離體腸系膜動(dòng)脈血管舒縮功能的影響    【摘要】  目的:觀察黃芪甲甙對(duì)大鼠離體腸系膜動(dòng)脈舒縮功能的影響,并探討其可能機(jī)制。方法:分離腸系膜動(dòng)脈12級(jí)分支制備離體腸系膜血管環(huán)固定于微血管張力測(cè)定儀，觀察黃芪甲甙對(duì)血管環(huán)舒縮功能的影響。結(jié)果:不同濃度的黃芪甲甙(30 mg/L和100 mg/L)孵育后，苯腎上腺素引起的血管收縮較對(duì)照組明顯下降（P0.05或P0.01）。累積濃度的黃芪甲甙對(duì)苯腎上腺素（2×10-6 mol/L）預(yù)收縮的內(nèi)皮完整或去內(nèi)皮腸系膜動(dòng)脈血管環(huán)均產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，中高濃度的黃芪甲甙（10 mg

2、/L、30 mg/L和100 mg/L）對(duì)內(nèi)皮完整組的舒張作用明顯強(qiáng)于去內(nèi)皮組 (P0.05或 P0.01)。累積濃度的黃芪甲甙對(duì)KCl預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈血管環(huán)張力無(wú)明顯影響（P0.05）。L-NAME(10-4 mol/L)預(yù)處理能顯著減弱黃芪甲甙的舒血管作用（P0.05或P0.01）。結(jié)論:黃芪甲甙具有一定的內(nèi)皮依賴性舒張血管作用,且主要通過(guò)NO途徑發(fā)揮作用。 【關(guān)鍵詞】  黃芪甲甙 腸系膜動(dòng)脈    Abstract:  Objective: To observe the effect of astragaloside on contra

3、ction and relaxation on  isolated mesenteric arteries, and to study its underlying mechanisms. Methods: The isolated mesenteric arteries segments were mounted in the Danish Myo Technology Multi Wire Myograph System (DMT). The effect of astragaloside on contraction and relaxation on the arteries

4、 was observed. Results: After incubation in the solution of Astragaloside of different concentrations (30 mg/L and 100 mg/L), vasoconstriction induced by ethyl phenyllphrine obviously declined compared with control group（P0.05 or P0.01）. Astragaloside relaxed mesenteric artery rings (both with and w

5、ithout endothelium) in concentration-dependent manner, which had been precontracted with ethyl phenyllphrine（2×10-6 mol/L）, while the relaxation of the rings with endothelium was significantly stronger than that of rings without endothelium （P0.05 or P0.01）. Astragaloside had no significant eff

6、ect on those which had been precontracted by KCl（P0.05）. Pre-treatment with L-NAME (10-4 mol/L) significantly decreased the effect of vasodilatation of Astragaloside （P0.05 or P.01）. Conclusion: Astragaloside IV can endothelium-dependently dilate vessels to some extent, and it plays this function ma

7、inly through the NO pathway.    Key words:   astragaloside IV; mesenteric artery; vasorelaxation; vasoconstriction; endothelium    黃芪是傳統(tǒng)活血化瘀中藥，祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為黃芪有補(bǔ)氣升陽(yáng)，利水消腫，益氣固表之功效，而將其歸屬“補(bǔ)氣”之藥。黃芪廣泛用于心血管疾病的治療1。有研究表明,黃芪及其有效成分對(duì)冠脈、胸主動(dòng)脈等有直接擴(kuò)張作用2,3，但對(duì)機(jī)體主要的阻力血管腸系膜動(dòng)脈的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究

8、采用大鼠離體腸系膜動(dòng)脈血管環(huán)灌流模型，觀察黃芪主要有效成分黃芪甲甙（astragaloside ）對(duì)大鼠離體腸系膜動(dòng)脈血管收縮與舒張功能的影響，并探討其可能的機(jī)制。    1  材料和方法    1.1  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物  Sprague-Dawley雄性大鼠（體重200250 g），由溫州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供SYXK(浙)2005-0061。    1.2  主要試劑及儀器  黃芪甲甙（購(gòu)自成都思科華生物技術(shù)有限公司，純度98%），L-硝基-精氨酸甲酯(N-

9、Nitro-L-arginine-methyl-ester， L-NAME)、苯腎上腺素(Phenylephrine，PE)、乙酰膽堿(Acetylcholine，ACh)、二甲基亞砜(Demethyl sulfoxide，DMSO)購(gòu)自Sigma公司。PSS營(yíng)養(yǎng)液成分(mmol/L)：NaCl 118.99，KCl 4.69，MgSO4?7H20 1.17，KH2P04 1.1，CaCl2?2H20 2.50，NaHCO3 25.00，EDTA 0.03，Glucose 5.50。KPSS營(yíng)養(yǎng)液成分(mmol/L)：KCl 123.70，MgSO4?7H20 1.17，KH2P04 1.18

10、，CaCl2?2H20 2.50，NaHCO3 25.00，EDTA 0.03，Glucose 5.50。二者pH值均為7.4，采用丹麥DMT微血管張力測(cè)定儀（DMT）和澳大利亞Powerlab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)記錄張力的變化。    1.3  腸系膜動(dòng)脈環(huán)的制備4  大鼠用鈍器擊昏，頸椎脫位處死后，迅速取出帶系膜的腸管。顯微鏡下分離腸系膜血管12級(jí)動(dòng)脈分支， 剪取1.52 mm的動(dòng)脈環(huán)。部分用0.1% Triton X-100灌注腸系膜動(dòng)脈5 s左右,以制備去內(nèi)皮動(dòng)脈環(huán)。將腸系膜動(dòng)脈環(huán)固定于DMT浴槽內(nèi)傳感器的鉗夾上，浴槽中恒速通以95%

11、O2和5% CO2混合氣體，溫度維持在37 。血管環(huán)在PSS溶液中平衡30 min后作標(biāo)準(zhǔn)化，以KPSS檢驗(yàn)動(dòng)脈環(huán)收縮性,兩次收縮幅度相差小于<10%。以Ach（10-5 mol/L）檢驗(yàn)內(nèi)皮功能（舒張率大于80%認(rèn)為內(nèi)皮完整，舒張率小于10%則認(rèn)為內(nèi)皮去除）。    1.4  實(shí)驗(yàn)過(guò)程    1.4.1  黃芪甲甙對(duì)內(nèi)皮完整離體腸系膜動(dòng)脈環(huán)收縮功能的影響：血管平衡后，加入累積濃度的PE (10-7 mol/L5×10-6 mol/L)觀察血管環(huán)收縮情況，以此作為自身對(duì)照。用不同濃度黃芪甲甙(30

12、mg/L和100 mg/L)孵育20 min后，觀察黃芪甲甙對(duì)PE收縮曲線的影響。數(shù)據(jù)均以PE收縮占同一標(biāo)本KPSS最大收縮張力的百分比表示。    1.4.2  累積濃度黃芪甲甙對(duì)PE預(yù)收縮的動(dòng)脈環(huán)的舒張作用：用2×10-6 mol/L的PE預(yù)收縮動(dòng)脈環(huán)達(dá)到穩(wěn)定后，向浴槽中以累積法依次加入黃芪甲甙，使浴液中黃芪甲甙終濃度分別達(dá)1、3、10、30和100 mg/L，觀察黃芪甲甙對(duì)內(nèi)皮完整腸系膜動(dòng)脈環(huán)（內(nèi)皮完整黃芪甲甙組）和去內(nèi)皮腸系膜動(dòng)脈環(huán)（去內(nèi)皮黃芪甲甙組）的舒張作用。對(duì)照組以DMSO代替黃芪甲甙累積加入。以2×10-6 mol/L

13、 PE預(yù)收縮產(chǎn)生的最大收縮幅度為100%，計(jì)算黃芪甲甙的舒張率。    1.4.3  累積濃度黃芪甲甙對(duì)KCl預(yù)收縮的動(dòng)脈環(huán)的舒張作用：用6×10-2 mol/L的KCl預(yù)收縮動(dòng)脈環(huán)達(dá)到穩(wěn)定后，以累積法依次加入黃芪甲甙，使灌流液中黃芪甲甙終濃度分別達(dá)1、3、10、30和100 mg/L，觀察黃芪甲甙對(duì)內(nèi)皮完整腸系膜動(dòng)脈環(huán)的舒張作用。對(duì)照組以DMSO代替黃芪甲甙累積加入。     1.4.4  L-NAME對(duì)黃芪甲甙誘導(dǎo)的動(dòng)脈環(huán)舒張作用的影響：以L-NAME(10-4 mol/L)預(yù)處理血管環(huán)20 min后

14、，用2×10-6 mol/L PE預(yù)收縮血管環(huán)達(dá)到穩(wěn)定，再加入黃芪甲甙，使灌流液中黃芪甲甙終濃度分別達(dá)1、3、10、30和100 mg/L，觀察L-NAME預(yù)處理前后累積濃度的黃芪甲甙對(duì)PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整腸系膜動(dòng)脈環(huán)舒張作用的差異。    1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法  采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊者采用t檢驗(yàn)。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。    2  結(jié)果    2.1  黃芪甲甙對(duì)內(nèi)皮

15、完整腸系膜動(dòng)脈環(huán)收縮功能的影響  不同濃度黃芪甲甙孵育后，累積濃度PE引起的血管收縮幅度較對(duì)照組明顯下降。30 mg/L黃芪甲甙組與100 mg/L黃芪甲甙組間比較，差異亦有顯著性(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表1。    2.2  累積濃度黃芪甲甙對(duì)PE預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈環(huán)的舒張作用  黃芪甲甙能使PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮腸系膜動(dòng)脈環(huán)呈濃度依賴性舒張，隨黃芪甲甙濃度的增大而舒張程度增大，差異均有顯著性(均P<0.01)。中高濃度的黃芪甲甙（10、30和100 mg/L）對(duì)內(nèi)皮完整腸系膜動(dòng)脈環(huán)的舒張作用比去內(nèi)

16、皮腸系膜動(dòng)脈環(huán)的作用明顯增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表2。    2.3  累積濃度黃芪甲甙對(duì)KCl預(yù)收縮的腸系膜動(dòng)脈環(huán)的舒張作用  實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各濃度黃芪甲甙不能使KCl誘導(dǎo)收縮的動(dòng)脈環(huán)顯著舒張（均P>0.05），見(jiàn)表3。    2.4  L-NAME對(duì)黃芪甲甙誘導(dǎo)的動(dòng)脈環(huán)舒張作用的影響  L-NAME預(yù)處理內(nèi)皮完整動(dòng)脈環(huán)，可明顯地抑制累積濃度黃芪甲甙誘導(dǎo)的血管舒張作用(P<0.05或P<0.01)，見(jiàn)表4。    3

17、60; 討論    PE是一種腎上腺素能受體激動(dòng)劑，能通過(guò)開(kāi)放受體操作性鈣通道(receptor-operated calcium channel，ROCC)而導(dǎo)致血管收縮。PE與受體結(jié)合后，通過(guò)改變膜受體耦聯(lián)G蛋白構(gòu)型，激活磷脂酶C，產(chǎn)生三磷酸肌醇（IP3），通過(guò)IP3途徑引起肌漿網(wǎng)或者內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫(kù)內(nèi)鈣釋放，胞內(nèi)鈣離子濃度升高，同時(shí)影響L型鈣離子通道，外鈣內(nèi)流增加，通過(guò)興奮-收縮耦聯(lián)機(jī)制，血管平滑肌收縮，血管張力增加5,6。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的黃芪甲甙對(duì)PE引起的血管收縮具有明顯的抑制作用，提示黃芪甲甙抑制血管環(huán)的收縮可能與其抑制血管平滑肌胞內(nèi)鈣釋放有關(guān)。&

18、#160;   高鉀可誘導(dǎo)細(xì)胞膜電位去極化，激活電壓依賴性鈣通道(voltage-dependent calcium channel，VDCC)，引起胞外鈣內(nèi)流而誘發(fā)血管收縮6。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，黃芪甲甙對(duì)KCl預(yù)收縮的腸系膜血管環(huán)無(wú)舒張作用，提示黃芪甲甙可能不是通過(guò)抑制VDCC介導(dǎo)的細(xì)胞外鈣內(nèi)流而發(fā)揮其對(duì)腸系膜血管環(huán)的舒張作用。    本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，黃芪甲甙對(duì)PE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮血管環(huán)都具有舒張作用，但對(duì)去內(nèi)皮組的作用明顯降低，提示在黃芪甲甙舒張血管的作用中血管內(nèi)皮起了重要作用。一般認(rèn)為內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)是由內(nèi)皮源性舒張因子（即NO或含有NO

19、的復(fù)合物）、內(nèi)皮依賴性超極化因子（EDHF）和前列腺素類物質(zhì)（如PGI2）作用完成的。NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的舒血管物質(zhì)，對(duì)血管張力有調(diào)節(jié)作用7。NO在內(nèi)皮一氧化氮合酶的作用下由左旋精氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái),通過(guò)激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，增加環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)含量，抑制細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流和抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放而使平滑肌舒張8,9。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，一氧化氮合酶抑制劑L-NAME預(yù)處理血管環(huán)，可明顯地抑制黃芪甲甙誘導(dǎo)的血管舒張作用。表明黃芪甲甙舒張血管的作用與內(nèi)皮細(xì)胞的NO系統(tǒng)有重要關(guān)系。推測(cè)，黃芪甲甙作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞后促進(jìn)了內(nèi)皮依賴性舒血管物質(zhì)NO的合成與釋放，而后者介導(dǎo)了黃芪甲甙的舒血管效應(yīng)。【參考文獻(xiàn)】&

20、#160; 1 陳治奎.黃芪對(duì)心血管疾病作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展J.心血管病學(xué)進(jìn)展,2003,24(2):113-116.2 石剛剛,陳錦香,李長(zhǎng)潮,等.黃芪注射液對(duì)冠狀動(dòng)脈直接作用的研究J .中藥新藥與臨床藥理,1999,10(1):38-39.3 張必祺,胡申江,單綺嫻,等. 黃芪舒張血管平滑肌的作用及機(jī)制J. 浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2005,34 (1):66-68.4 Musha Y, Itoh S, Hanson MA, et al. Does estrangen affect the development of abnormal vascular function in offspring of rats fed a low-protein diet in pregnancyJ.Pediatr Res,2006, 59(6