1、胡蔣寧胡蔣寧重重現現1903年年俄羅斯植物學家俄羅斯植物學家Tsweet茨維特茨維特植物提取液植物提取液CaCO3玻璃柱玻璃柱石油醚淋洗石油醚淋洗色色譜譜色色：顏色顏色譜譜：圖譜圖譜1906年茨維特年茨維特論文發(fā)表論文發(fā)表創(chuàng)建創(chuàng)建石石油油醚醚流動相流動相石油醚石油醚固定相固定相 CaCO3兩相兩相本本質：質：混混合合物物分分離離遷移遷移固定液固定液載氣載氣ts1941 Martin和Synge提出液-液色譜理論；1952 James和Martin發(fā)展了氣相色譜；1956 Van Deemter提出速率理論；1967 Kirkland等研制高效液相色譜法；2. 分類按流動相分氣相色譜（GC）液相

2、色譜（LC）超臨界流體色譜（SFC）按機理分吸附色譜分配色譜離子交換色譜排阻色譜按固定相在支持體中的形狀分柱層析色譜平板色譜紙色譜薄層色譜按分離效率分經典液相色譜高效液相色譜最新進展微柱色譜毛細管電動色譜色譜流出曲線示意圖WbW1/21/2h0.607h 3. 基本概念與術語1、色譜流出曲線 （chromatogram）指樣品注入色譜柱后，信號隨時間變化的曲線。2、常用術語（1）基線無組分通過色譜柱時，檢測器的噪音隨時間變化的曲線。（2）峰寬峰底寬Wb 峰半寬W1/2標準偏差4bW2ln2221W色譜參數示意圖1/2h0.607hW1/2 WbtRt0（3）保留值保留時間tR進樣到出現色譜峰的

3、時間保留體積VR進樣到出現色譜峰時消耗的流動相體積死時間t0流動相流過色譜柱的時間死體積V0色譜柱的空隙體積校正保留時間Rt校正保留體積RV0tttRR0VVVRRFtVRRF流動相流動線速度（4）相對保留值1 . 21212RRVVttrRR（5）分配系數和分配比（容量因子）分配系數：一定溫度與壓力下兩相達平衡后，組分在固定相和流動相濃度的比值mSCCK 分配比（容量因子）： 一定溫度與壓力下兩相達平衡后，組分在固定相和流動相量的比值qpk 固定相重量流動相重量ssmSVVkVqVpCCK00/K與k的關系：（6）容量因子k與保留值的關系000tttttkRR)1 (0kttR4. 分離效能

4、指標1、選擇性（相對保留值）12121 . 212KKkkttrRR相對保留值由兩組分的熱力學性質決定，與色譜柱的長短粗細無關。2、峰寬度3、分離度21212bbRRWWttR分離度考慮了保留時間和峰寬度，是一個綜合指標：R 1.0兩峰明顯重疊兩峰明顯重疊R = 1.0兩峰達兩峰達97.7%分離分離R 1.5兩峰完全分開兩峰完全分開第二節(jié)第二節(jié)色譜理論色譜理論一、塔板理論 (馬丁， 1904)目的從理論上得到描述色譜流出曲線的方程，并通過這一方程各參數來研究影響分離的因素。假設 （1）色譜柱存在多級塔板;（2）組分通過時在每級塔板兩相間達到一次平衡;effeffnLH/22122)(54. 5

5、)(16)(WtWttnRbRReff22122)(54.5)(16)(WtWttnRbRRr0r1r2。rnneff 與 n 的關系：2)(Refftn2)(Rtn 2002) 1()(ktktttnnRReff2)1(kknneff二、速率理論1、塔板理論的不足塔板理論雖然指出了理論板數n或理論板高度H對色譜柱效率的影響，但是沒有指出影響塔板高度的因素，因此無法在理論指導下從實驗上提高色譜柱的效率。2、Van Deemter方程1956年Van Deemter提出速率方程，指出了提高柱效率的途徑：Van Deemter方程CuuBAH式中 u流動相流動的線速度（1）A渦流擴散項：指固定相填

6、充不均勻引起的擴散dpA2為填充的不規(guī)則因子dp固定相顆粒粒徑渦流擴散示意圖（2）B/u 縱向分子擴散項指分子沿色譜柱軸向擴散引起的色譜譜帶展寬B = 2 r Dm式中： r彎曲因子，填充柱 r )()()(nRXRnR 1 )()()()1(lglg100lglg100) 1(100 nxRxnRnRRttnIttnn)()1()()(lglglglg100nRnRnRxRxttttnI11lgCnAtR3n22lgCTAtbRSampleSampleGas Chromatograph (GC) Mass Spectrometer (MS)SeparationIdentificationii

7、iiihfmAfm或i 近似將色譜峰當作等腰三角形。此法算出的面積是實際峰面積的近似將色譜峰當作等腰三角形。此法算出的面積是實際峰面積的0.94倍：倍： A = 1.065 hW1/2 當峰形不對稱時，可在峰高當峰形不對稱時，可在峰高0.15和和0.85處分別測定峰寬，由下式計算峰面處分別測定峰寬，由下式計算峰面積：積：（3）峰高表示峰面積：）峰高表示峰面積：（4）自動積分和微機處理法）自動積分和微機處理法)(2185.015.0WWhA ississiisiiAAmmAmAmfff / 特點及要求：特點及要求： %100)(%100%100121niiiiiniiiiAfAfmmmmmmmw

8、 外標法不使用校正因子，準確性較高外標法不使用校正因子，準確性較高； 操作條件變化對結果準確性影響較大；操作條件變化對結果準確性影響較大； 對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。SsiisiSsiisiAfAfmmAfAfmm; %100%100%100SsiisSsiisiiAfAfmmmAfAfmmmw環(huán)境水樣中芳香烴，殺蟲劑，除草劑，水中銻形態(tài)石油原油成分、汽油中各種烷烴和芳香烴化工噴氣發(fā)動機燃料中烴類，石蠟中高分子烴食品、水果、蔬菜植物精煉油中各種烯烴、醇和酯，亞硝胺，香料中香味成分，人造黃油中的不飽和十八酸，牛奶中飽和和不飽和脂肪酸生物植物中萜類，微生物中胺類、脂肪酸類、脂肪酸酯類醫(yī)藥血液中汞形