1、紅色三葉草提取物的控油效果及測試方法研究冒詩楠'，程黨黨'，莫雋穎2,王飛飛2（1.上海際研生物醫(yī)藥開發(fā)有限公司，上海201702；2.云南貝泰妮生物科技集團(tuán)股份有限公司，云南昆明650106）摘要：探討提取自紅色三葉草中活性物的控油功效。通過自我評估和油脂測試篩選受試人員，最終選取7名受試者進(jìn)行為期4周的半臉測試。采集使用前后的皮膚油脂、水分?jǐn)?shù)據(jù)及面部糞咋咻、原咋哧圖像，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，使用4周后，受試者皮膚油脂分泌顯著下降，面部糞葉咻和原口卜噂的個數(shù)及面積也明顯減少，同時皮膚表面含水量數(shù)值有所增加，說明該活性物質(zhì)具有良好的控油效果和調(diào)節(jié)水汕平衡的作用。關(guān)鍵詞：控油：

2、油性肌膚；油脂測試；水分測試：VisiaCR中圖分類號：TQ658文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1006-7264（2021）11-030-04DOI：10.3969/j.issn.1006-7264.2021.11.007收稿日期:2021-08-09作者簡介：日詩楠（1992-）.女.江蘇人.碩上研究生。打究表明，油性肌膚見于男性及部分油脂旺盛的女打升性面部，致使該類人群備受困擾。人類皮脂腺I中的氨肽購N（APN）能夠影響細(xì)胞的基本代謝反應(yīng)和細(xì)胞分化過程回，AnjaThielitz等利用皮脂腺細(xì)胞SZ95驗(yàn)證了抑制APN的活性能夠影響細(xì)胞分化，最終抑制皮脂分泌過多向。類黃酮廣泛存在于自然界植物中

3、，主要包括黃酮、異黃酮、黃酮醇等，Parellada等研先發(fā)現(xiàn)其能夠抑制皮脂腺細(xì)胞中APN的活性。紅色三葉草，又稱為紅車軸草，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)含有蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類和維生素、黃陽類物質(zhì)等，其中黃酮類物質(zhì)包括異黃酮、黃酮醇、黃酮。因此，紅色三葉草提取物有望成為新一代的控油活性物。為研究紅色三葉草中活性提取物的控油效果，對受試者進(jìn)行為期4周的雙盲半臉測試，測量使用前后面部皮膚表面油脂、皮膚含水量以及皮膚口卜1琳圖像，結(jié)合受試者自我評價進(jìn)行控油功效分析，期望能夠?yàn)榭赜凸πy試提供新的思路。1實(shí)驗(yàn)部分1.1產(chǎn)品與儀器對照組產(chǎn)品：內(nèi)部自制乳液，除基礎(chǔ)配方框架外，未添加任何功效成分。測試組產(chǎn)品：在對照組乳液基

4、礎(chǔ)匕添加控油活性成分,添加比例為2%。該活性成分提取于紅色三葉草花部，主要作用為促進(jìn)角化細(xì)胞新生、抑制皮脂腺細(xì)胞皮脂生成和促進(jìn)皮膚緊致。所有受試者早晚各使用1次，用量參照各自FI常護(hù)膚產(chǎn)品用量。根據(jù)要求，產(chǎn)品將統(tǒng)一進(jìn)行白包處理，不添加任何明顯標(biāo)識，以排除測試者的主觀意識干擾。測試過程中配合使用無任何功效成分的潔而乳及柔膚水（市售，批號為181005S1J和181123S1J）°CutometerMPA580、皮膚油脂測試探頭SebumeterSM8I5、皮膚水分測試探頭ComeometerCM825»Courage+Khazaka.德國：VisiaCR,Canfield,美

5、國，Image-Pro圖像分析軟件，MediaCybcmciicso1.2受試者選擇入選標(biāo)準(zhǔn)：2035周歲，自我評估為油性肌膚，且油脂分泌量符合要求。測試階段，無任何皮膚疾病或皮膚敏感現(xiàn)象、未服用任何能夠影響實(shí)驗(yàn)的藥物；測試前1個月內(nèi)未使用任何控油類產(chǎn)品（防曬類、彩妝類除外）、未參加任何同類型測試。能嚴(yán)格避守試驗(yàn)方法的要求，簽署知情同意Ih剔除標(biāo)準(zhǔn)：測試過程中出現(xiàn)不良反應(yīng)或未遵守試驗(yàn)要求者。油脂分泌量認(rèn)定：規(guī)定入選范圍為：皮膚油脂測試顯示前額汕脂量>200,兩頰油脂量N150。最終篩選受試者人數(shù)為7人，其中男性為5人，女性2人。1.3實(shí)驗(yàn)方法測試基于面部控油測試前、后的對比實(shí)驗(yàn)，采用雙盲

6、對比測試。受試者使用產(chǎn)品4周，每日早晚使用，期間僅配合使用無功效成分的潔面及柔膚水。因面部肌膚中，前額、鼻子、腮部油脂較多，本次測試選取受試者前額、兩頰部位作為測試區(qū)域。受試者第0、1、2、4周進(jìn)行回訪?；卦L須在同時段進(jìn)行，且回訪前1日及測試當(dāng)日忌劇烈運(yùn)動、熬夜、食用油炸等高熱量食物?；卦L當(dāng)日，清晨按要求使用產(chǎn)品后，不得使用任何物品或身體部位觸碰面部肌膚。測試當(dāng)日，提前進(jìn)入恒溫恒濕環(huán)境中（溫度（22±1）'C,相對濕度55%±5%,靜坐30min左右，通過皮膚油脂測試探頭ScbumctcrSM815測試受試者皮膚表面油脂分泌變化清況；通過皮膚水分測試探頭Corneo

7、meterCM825測黃皮膚水分?jǐn)?shù)值：通過Visia-CR采集面部照片，得到受試者面部葉哧圖像，運(yùn)用IPP軟件進(jìn)行分析處理。1.4分析方法皮膚油脂和皮膚含水量變化率按公式（1）計(jì)算：7測試值一丁測試值變化率堿試音XI00%其中，幾和7；分別為首次使用前和使用第n周的測試數(shù)據(jù)平均值。受試者自我評價：使用4周后，受試者對該控油乳液使用前后的面部油脂分泌情況進(jìn)行打分。分值為17分，分值越大，說明面部油脂分泌較少。數(shù)據(jù)分析采用Excel表格進(jìn)行平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差驗(yàn)證：采用SPSS22.0對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)分析。當(dāng)PV0.05時，認(rèn)為測試結(jié)果存在顯著性差異。2結(jié)果與討論2.1皮膚表面油脂及含水量變化油脂測

8、試采用世界公認(rèn)的Sebumeter方法。該測試探頭基于光度計(jì)原理，采用特定的消光膠帶吸收面部肌膚上油脂從而使膠帶呈現(xiàn)半透明狀，此時膠帶的透光量增大，通過光學(xué)轉(zhuǎn)換能夠得出油脂含量數(shù)值圖I為受試者使用控油乳液4周內(nèi)的皮膚表面油脂變化情況。由于測試在夏季進(jìn)行，氣候炎熱，故對照組在測試期間皮膚油脂分泌略有增加。而測試組由于活性物的調(diào)節(jié)作能夠顯著降低皮膚油脂分泌。ATIAT2AT4對照組測試組圖1皮膚表而油脂變化圖（PV0.05）Fig.lVariationofsk.ngrease5.000.00-5.00-10.00-15.00-20.00皮膚水分測試探頭采用電容法原理，能夠快速方便的刪試皮膚表皮含水

9、量。通常來設(shè)，數(shù)值越大，皮膚含水量越副。圖2為測試4周后的皮膚水分變化圖。從圖中數(shù)值來看，測試組皮膚含水量較對照組有明顯升高，這說明該活性物不僅具有明顯的控油效果，還能提高皮膚表層含水量。但因?yàn)镻>0.05,統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異，此結(jié)果不排除存在實(shí)驗(yàn)誤差的可能性。對瞭組測試組圖2皮膚水分變化圖（P>0.05）F:g.2Variationofskinmoisture22座瘡丙酸桿曲抑制實(shí)驗(yàn)2.2.1抑菌MIC實(shí)驗(yàn)選取并復(fù)蘇與瘞瘡相關(guān)的病原菌瘞瘡丙酸桿菌（ATCC11827）,通過計(jì)數(shù)、稀釋等操作，配制特定濃度的通懸液（Aeo=O.25左右），配制完成后的菌懸液置于4C環(huán)境下貯存?zhèn)溆谩?/p>

10、在厭氧條件下，將紅色三葉草提取物通過倍半稀樣方法加入1%PBS溶液配制成特定濃度（1%、2%、4%、8%、16%）的測試樣，試管中加入2n】L測試樣及2mL腦心浸液培養(yǎng)基（BHI）,并加入（）.2mL菌懸液，確保每一管中瘞瘡內(nèi)酸桿菌的濃度在IXKXKrCFU/mLo設(shè)立陽性及陰性對照組，在37C條件下培養(yǎng)96h,通過濁度對比，在加入為澄清條件下的測試液最低濃度即為紅色三葉草提取物的抑菌MICo通過濁度對比可以清楚的看到，在加入測試液最高濃度為16%以及最低濃度為1%時，試管仍是渾濁狀態(tài)。由此可知，在配方添加量2%時，紅色三葉草提取物不具備抑制座瘡丙酸桿菌生長的能力。2.2.2產(chǎn)品抑菌實(shí)驗(yàn)在厭氧

11、條件下，設(shè)立2組測試料體：對照組（自制乳液）、測試組（自制乳液+2%紅色三葉草提取物）。取對照組、測試組各50g,加入0.5mL菌懸液，混合均勻，并保證每組測試料體中瘞瘡丙酸桿菌的濃度在IX6XICTCFU/mL,混合培養(yǎng)96h后，保證瘞瘡丙酸桿菌全部復(fù)蘇傳代完成。上述兩組測試料體各取0.1g,均勻涂布于BHI固體培養(yǎng)基上，觀察2組料體中瘞瘡丙酸桿曲的生長情況。從圖3能夠清晰的看到測試組并沒有因?yàn)轭~外加入2%的紅色三葉草提取物而導(dǎo)致菌落數(shù)有數(shù)量級的差別。由此可以證明，添加有2%紅色三葉草提取物的測試樣品不具備抑制瘞瘡丙酸桿菌生長的能力。圖3菌落生長對比圖I'g3Comparativec

12、hartofbacterialcoonies23皮膚葉I琳前后變化油性肌膚因?yàn)槠ぶ置谳^多，毛囊口附近往往伴隨較多的細(xì)菌，如瘞瘡丙酸桿菌。瘞瘡丙酸桿菌為厭氧菌，可以產(chǎn)生內(nèi)源性葉R林（主要為糞蜂噂III）聚集于細(xì)胞膜內(nèi)。糞n卜咻原經(jīng)過脫梭脫氫等一系列人體細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)，最終生成原口卜I琳IX叫窄帶藍(lán)光是波長在407420nm可見光，能夠滿足內(nèi)源性仆。林所敏感的415nm波長光譜，可用于檢測面部糞葉【琳III和原口卜噂IX的前后變化狀態(tài)"虬使用窄帶藍(lán)光拍攝面部葉咻圖像，口卜噂在窄帶藍(lán)光作用下呈現(xiàn)近圓的白點(diǎn)，在未服用或使用影響皮膚n卜嗽分泌的藥物或化妝品的前提下，考察其分布狀態(tài)可以側(cè)而反

13、應(yīng)皮膚的油脂分泌情況。運(yùn)用口卜咻個數(shù)來反饋面部皮膚油脂粒的數(shù)量，而葉噂面積則能夠側(cè)面反應(yīng)皮膚油脂分泌的多少，在無其他影響因素的情況下，2個指標(biāo)都能夠體現(xiàn)皮膚油脂分泌的情況。圖4、圖5分別為受試者面部測試區(qū)域的糞卜噂Ill和原仆噂IX的前后變化圖。從圖中可以看出，對照組的2種葉咻在測試周期內(nèi)均無明顯變化，而測試組2種葉噂的個數(shù)和面積隨著時間的推移有較為明顯的降低，且具有顯著差異性。結(jié)合瘞瘡丙酸桿菌的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以認(rèn)為，添加了紅色三葉草提取物的乳液能夠降低油脂分泌，從而達(dá)到控油效果。£-.亦海。卷£一»三品尾£-.亦海。卷£一»三品尾

14、對照組測試組320.00-20.00-40.0020.000.00-20.00-10.00M2圖4皮膚糞葉啾的個數(shù)面積變化圖（PC0.05）F:g.4Variationincountandareaofsk：ncoproporphyr.n圖5l'&5對照組測試組皮膚原葉嗽的個數(shù)面枳變化圖（PV0.05）Variationincountandareaofsk:nprotoporphyrin*花M荊氧右香告剝X一誰尾安蚯玉嫗還S香-1=.irxl是S2.4受試者自我評價分析測試前和測試4周后，受試者對自身面部肌膚出油狀況進(jìn)行自我評價，總分17分，規(guī)定分值越大面部出油越少，4分為“既不

15、油膩也不干燥”。與對照組相比，測試組皮膚出油狀況有明顯改善。其中85.71%的受試者認(rèn)為測試組樣品有較為顯著的控油效果（改善率為自我評價5分的受試者占全部受試者的百分比）。3結(jié)論通過采集皮膚表面油脂、糞叫噂和原口卜噂的前后改變數(shù)值，結(jié)合瘞瘡丙酸桿菌抑制實(shí)驗(yàn)有效驗(yàn)證了紅色三葉草提取物中的活性物質(zhì)具有較為顯著的控油效果，且能有效降低皮膚口卜R林的含量。而皮膚水分?jǐn)?shù)值的變化說明，該活性物還能夠增加皮膚含水量，發(fā)揮調(diào)節(jié)水油平衡的作用。但因其不具有顯著性差異，在之后的工作中，還應(yīng)開展進(jìn)一步的研究和探討。因?yàn)槿藛T安排等限制，本次試驗(yàn)僅從3個維度對測試產(chǎn)品的控油效果進(jìn)行r分析。而相關(guān)研究表明，皮膚油脂含量與

16、pH值成反比關(guān)系，當(dāng)皮膚油脂含量升高時，皮膚pH值會降低仇。所以，在接卜來的研究中，可贈加皮膚pH的測試維度，從而更為全面的評價產(chǎn)品的控汕功效。參考文獻(xiàn)：111CATHERINN,VALERIEH.DevelopmentandhomeostasisofthesebaceousglandJ.SeminarsinCellandDevelopmentalBiology,2012,23(8):928-936.2 MERCURIOMG,GOGSTETTERDS.Androgenphysiologyandthecutaneouspiloscbaceousunit|JJ.JournalofGenderSpe

17、cificMedicine,2000,3(4):59-64.3 馬萍.周瑩.霍剛.布枯中美黃酮的控油功效所完J.日用心學(xué)品科學(xué),2016,39(2):60-62.4 TH1ELITZA,REINHOLDD,VETTERR.InhibitorsofdipeptidylpeptidaseIVandaminopeptidaseNtargetmajorpathogeneticstepsinacneinitiation|JJ.JournalofInvestigativeDermatology.2007.127(5):1042-1051.5 THIBOUTOTD.BAYNEE,THORNEJ.etal.I

18、mtnunolocalizalionof5alpha-reductaseisozymesinacnelesionsandnormalskinJ.ArchDermalol,2000.136(9):1125-1129.6 曾虹燕，周樸華，候團(tuán)章.紅車軸草有效成分的研究進(jìn)展J.中草藥,2001,32:189-190.7 白曉云，馬搶風(fēng),鮑晶琳，等.市售男士控油潔面泥使用效果和功效研究J.中國美容醫(yī)學(xué),2014,23(6):465-469.8 趙小敏，瞿欣.一種稻米提取物的皮膚保濕和抗老化功能研究J.中國美容醫(yī)學(xué),2015,24(4):35-38.9 穆艷蕾，楊卷婭，王文嶺，等.藍(lán)光治療痊瘡120例臨

19、床療效觀察J.中國美容醫(yī)學(xué).2007(1):80-82.10 朱文元.逐瘡M.南京:東南大學(xué)出版社.2004:278-279.11 KIMMK,CHOISY.BYUNHJ.etal.Comparisonofsebuinsecretion,skintype,pHinhunianswithandwitlioutacneJ.ArchDermatolRes,2006,298(3):113-119.12 GFATTERR,HACKIP,BRAUNF.EffectsofsoapanddetergentsonskinsurfacepH.stratumcorneumhydrationandiatcontentininfanlsJ|.Dermatology,1997,195(3):258-262.EvaluationofthesebumcontroleffectofredcloverextractMAOShi-nan1,CHENGDang-dangMOJun-yingjWANGFei-fei2(I.ShanghaiJiyanBio-pharmaceuticalCo.,Ltd.,Shangh