1、 專題二 微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)【目標(biāo)定位】了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進行微生物培養(yǎng)和無菌技術(shù)的操作。【自主預(yù)習(xí)】一、培養(yǎng)基：1概念：人們按照微生物對的不同需求，配制出供其的營養(yǎng)基質(zhì)叫培養(yǎng)基。可分為培養(yǎng)基和培養(yǎng)基。 2營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有、和，此外還要滿足微生物生長對、以及的要求。3培養(yǎng)乳酸桿菌時需在培養(yǎng)基中添加、培養(yǎng)霉菌時需將培養(yǎng)基PH調(diào)至、培養(yǎng)細菌時需將PH調(diào)至、培養(yǎng)厭氧微生物則需提供條件。思考1從細胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營養(yǎng)成分？二、無菌技術(shù)：閱讀“無菌技術(shù)”，討論回答下列問題：(一)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是，具體操作如下： 1對實驗操作的

2、、操作者的和進行。 2將用于微生物培養(yǎng)的、和等器具進行。 3為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在附近進行。4實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與相接觸。 (二)消毒和滅菌1消毒是指。常用的方法有、消毒法。2滅菌是指。常用的方法有：、滅菌。分別適用于那些用具？思考2無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有的目的是什么？思考3利用干熱滅菌箱對玻璃器皿滅菌時物品不能擺得太擠，目的是什么？思考4物品裝入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后，要首先打開排氣閥，煮沸并排除鍋冷空氣，其目的是；隨后關(guān)閉排氣閥繼續(xù)加熱，氣壓升至，溫度為，并維持min；最后切斷熱源，使溫度自然降溫，氣壓務(wù)必降至?xí)r打開鍋蓋，其目的是防止。

3、三、實驗操作-大腸桿菌的純化培養(yǎng)：本實驗所用的培養(yǎng)基是 ，本實驗可分成 和兩個階段進行。（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的操作步驟是：、。思考5在制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的稱量操作中，動作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不斷用玻璃棒攪拌的目的是什么？思考6牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供什么等營養(yǎng)物質(zhì)？2倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至左右時在酒精燈火焰附近操作進行。其過程是：在火焰旁右手拿，左手；使錐形瓶的瓶口；左手將培養(yǎng)皿，右手，立刻蓋上皿蓋。待平板冷卻凝固后，將平板。思考7錐形瓶的瓶口通過火焰的目的是什么？思考8平板倒置的目的是什么？思考9若皿蓋和皿底之間粘有培養(yǎng)基

4、，則該平板能否培養(yǎng)微生物？為什么？（二）純化大腸桿菌 微生物接種：最常用的是法和法。另外還有穿刺接種和斜面接種等。 1平板劃線法是的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。其操作步驟是：將在酒精燈火焰上灼燒直至。在酒精燈火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開大腸桿菌的菌種試管的棉塞。將菌種試管口通過火焰達到的目的。將冷卻的接種環(huán)伸入到。將菌種試管口再次通過火焰后塞上棉塞。將皿蓋打開一條縫隙，把接種環(huán)，蓋上皿蓋，不要劃破培養(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，冷卻后從劃線。重復(fù)上述過程，完成三、四、五區(qū)域劃線。注意不要將相連。將平板培養(yǎng)。思考10取菌種前灼燒接種環(huán)的目的是什么？為什么除第一次劃線外，其余劃線前都要灼燒接種環(huán)

5、？取菌種和劃線前都要求接種環(huán)冷卻后進行，其目的是？最后灼燒接種環(huán)的目的是？在作第二次以及其后的劃線操作時為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？2稀釋涂布平板法則是將菌液進行一系列的梯度，然后將進行培養(yǎng)。當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠高時，即可獲得單個細菌形成的。系列稀釋操作：取盛有mL水的無菌試管6支，編號101、102、103、104、105、106。用灼燒冷卻的移液管吸取mL菌液注入編號為101試管中，并吹打3次使之混勻。從101倍液中吸取mL菌液注入到編號為102試管吹打均勻，獲得102倍液。依此類推。思考11系列稀釋操作的注意事項是什么？涂布平板操作：將 浸在盛有的燒杯中。取少量（不超過），滴加到培養(yǎng)

6、基表面。將的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻。用涂布器將菌液地涂布在培養(yǎng)基的表面。涂布時可，使菌液分布均勻。四、結(jié)果分析與評價1培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是什么？，若有菌落形成，說明什么？2在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落顏色？形態(tài)？3培養(yǎng)12h和24h后的菌落大??？；菌落分布位置？原因？思考12在某培養(yǎng)基上出現(xiàn)了3種特征不同的菌落是什么原因？思考13頻繁使用的菌種利用什么法保存？長期保存菌種的方法是什么？【隨堂檢測設(shè)計】 1下列關(guān)于微生物營養(yǎng)的說法，正確的是 A同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源 B凡是碳源都能提供能量 c除水以外的無機物僅提供無機鹽 D無機氮源也能提供能量2細菌培養(yǎng)過程中分別采

7、用了高壓蒸汽、酒精、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌 A接種針、手、培養(yǎng)基 B高壓鍋、手、接種針 C培養(yǎng)基、手、接種針 D接種針、手、高壓鍋3以下關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的敘述錯誤的是 A操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌 B將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放人燒杯 C待培養(yǎng)基冷卻至50左右時進行倒平板D待平板冷卻凝固約510 min后將平板倒過來放置【拓展訓(xùn)練設(shè)計】1下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確的是 A培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì) B培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基 C固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基 D微生物在固體培養(yǎng)基上生長時，可

8、以形成肉眼可見的單個細菌2.不同培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含 A碳源、磷酸鹽和維生素 B氮源和維生素 C水、碳源、氮源和無機鹽 D碳元素、氧元素、氫元素、氮元素3獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是 A將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) D防止外來雜菌的入侵4下列常用的無菌操作中錯誤的是 A用酒精擦拭雙手 B用氯氣消毒水源C實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行 D玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)可用酒精擦拭5有關(guān)倒平板的操作錯誤的是 A將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上 B使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C將培養(yǎng)皿打開，培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上 D等待平板冷卻凝固后需要

9、倒過來放置6有關(guān)平板劃線操作正確的是 A使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過程中不再滅菌 B打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞 c將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板，劃三至五條平行線即可D最后將平板倒置，放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是 A首先將菌液進行一系列的梯度稀釋 B然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C再放在適宜條件下培養(yǎng) D結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落8涂布平板操作需要用到 A接種環(huán)、滴管、酒精燈 B接種環(huán)、移液管、酒精燈C涂布器、移液管、酒精燈 D涂布器、接種環(huán)、酒精燈9將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37恒溫箱的目

10、的是A對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用 B對比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C沒必要放人未接種的培養(yǎng)基 D為了下次接種時再使用10菌種保藏應(yīng)控制的條件是（1）濕度（2）低溫（3）干燥（4）有光（5）隔絕空氣（6）適當(dāng)有氧A（1）（4）（6）B（2）（3）（6） C（1）（5）（6） D（2）（3）（5）11平板冷卻凝后要將平板倒置，其意義是A利于大腸桿菌的接種 B防止雜菌污染C利于培養(yǎng)的冷卻 D 防止皿蓋冷卻水倒流入培養(yǎng)基12鑒定培養(yǎng)基的制作是否合格的方法是：將制備好的培養(yǎng)基放在中保溫1-2天看有無，如果沒有說明制作合格，反之則不合格。參考答案基礎(chǔ)知識一、1.營養(yǎng)物質(zhì) 生長繁殖 液體 固體2水.碳源

11、 氮源 無機鹽 PH 特殊營養(yǎng)物質(zhì) 氧氣3維生素，酸性，中性或微堿性，無氧思考1:C、H、O、N、P、S是構(gòu)成細胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量的97以上。二 （一）雜菌 1.空間 衣著 手，清潔和消毒 2.器皿 接種用具，培養(yǎng)基，滅菌 3. 酒精燈火焰 4.周圍的物品 （二）1.略 巴氏消 酒精 2.略 灼燒 干熱 高壓蒸氣思考2:防止感染實驗操作者。思考3避免妨礙熱空氣流通。思考4有利于鍋溫度升高，100k Pa，121，1530，零，容器中的液體暴沸，實驗操作、一1計算稱量溶化滅菌倒平板 思考5：防止牛肉膏吸收空氣中水分。防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。思考6糖維生素和有機氮2：50，錐形

12、瓶，拔出棉塞，迅速通過火焰，打開一條縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，倒過來放置思考7消滅瓶口的雜菌，防止雜菌感染培養(yǎng)基。思考8防止培養(yǎng)基冷卻過程中形成的水滴落到培養(yǎng)基表面。思考9不能?？諝庵须s菌會在這些粘附培養(yǎng)基上繁殖，并污染皿培養(yǎng)基。思考10增大接種面積，保持通氣并防止雜菌感染。答案。二、平板劃線 .稀釋涂布平板1通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，接種環(huán)，燒紅。，消滅試管口雜菌。菌液中取出一環(huán)菌種。，伸入平板劃35條平行線，第一區(qū)劃線末端開始向第二區(qū)域，第五區(qū)的劃線與第一區(qū)劃線，倒置放在培養(yǎng)箱中思考11消滅接種環(huán)上的微生物，的目的是消滅接種環(huán)上殘留菌種，防止高溫殺死菌種；防止細菌污染環(huán)境和操

13、作者。獲得由單個細菌形成的標(biāo)準(zhǔn)菌落。2不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，9mL，滅菌。，1。，1思考12操作中試管口和移液管應(yīng)在離火焰12cm處。整個操作過程中使用了1支移液管結(jié)果分析與評價1對照，培養(yǎng)基滅菌不徹底。2呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。3大小不同；菌落分布位置相同。原因是時間越長，菌落中細菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。思考14有培養(yǎng)基滅菌不徹底或雜菌感染等。思考15臨時保藏法和甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4冰箱中，每36個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點是保存時間較短，容易發(fā)生污染和變異；后者將菌種與無菌體積等量混合后保存在2

14、0冷凍箱中?！纠?】解析：此題考查學(xué)生對微生物的營養(yǎng)和能源的理解。對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自養(yǎng)細菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N。是無機物，也是微生物的碳源和氮源。硝化細菌所利用的氮源是無機氮源氨，同時氨也為硝化細菌提供用以化能合成作用的能源。答案：D啟示：含C、H、o、N的化合物既是微生物的碳源，又是微生物的氮源；有機碳源能提供能量，無機碳源不能提供能量；無機物也可提供碳源、氮源和能源?！纠?】 解析：此題考查學(xué)生對無菌技術(shù)的掌握。高壓蒸氣滅菌鍋是滅菌的一個設(shè)備，通常用于培養(yǎng)基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法?；鹧孀茻?，可以迅速徹底

15、地滅菌，適用于微生物的接種工具，如接種環(huán)。 答案：C 啟示：微生物培養(yǎng)過程中的無菌操作包括消毒和滅菌兩大類，分別又有各種不同的方法。對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌?！纠?】解析：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙。待培養(yǎng)基冷卻至50，用手觸摸錐形瓶剛剛不燙手，并且培養(yǎng)基處于溶化狀態(tài)。平板冷卻幾分鐘后還需倒置。答案：A啟示：固體培養(yǎng)基的制作步驟是：“計算稱量溶化滅菌倒平板” 順序不能顛倒。并且在制作過程特別是倒平板時徹底做到“無菌”?！纠?】解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。答案：B 基礎(chǔ)自測 一、1A 2C 3D 4D 5C 6C 7D 8D 9C 10B。11D。12。C。13。D。14。B