1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上第五屆溫州大學(xué)生物學(xué)科實驗技能大賽答案1.藥品配置中應(yīng)注意哪些問題？請給出應(yīng)用固體氯化鈉粉末配置1L用于細(xì)胞生物學(xué)實驗的生理鹽水的方法（包括儀器、藥品稱量等各個環(huán)節(jié)）（10分）注意事項：藥品本身的性質(zhì)（吸水性、氧化性、毒性、酸堿性、揮發(fā)性等）對應(yīng)的取樣工具、保護(hù)措施；藥品選用的純度級別；天平和量筒的正確使用；各種器具不可混用、取出的藥品不能放回、藥瓶蓋的放置等防止污染的方法；配制后存放的方法及標(biāo)簽（4分）細(xì)胞生物學(xué)實驗用生理鹽水配制：0.9%氯化鈉、去離子水(超純水)；（2分）在天平上放一張稱量紙，去皮，用藥勺取NaCl固體，稱取9.0 g；在燒杯中用少量去離子水溶解

2、，冷卻至室溫后，用玻璃棒引流，移入1000 ml容量瓶中；用蒸餾水少量2-3次沖洗燒杯，并將液體倒入容量瓶，向容量瓶中加入蒸餾水至刻度線下1 cm左右，用滴管逐滴加入蒸餾水至刻度線，蓋上瓶塞，輕輕倒轉(zhuǎn)容量瓶數(shù)次，將溶液混合均勻。（用1000 ml量筒量取1 L去離子水，放入燒杯中，將稱好的NaCl倒入燒杯，用玻璃棒攪拌至完全溶解）。將溶液倒入試劑瓶中蓋好蓋子，寫好標(biāo)簽配用。（4分）2.離心機可分為哪幾類？各類離心機有哪些應(yīng)用？使用離心機需要注意哪些問題？（10分）分類及應(yīng)用（6分）：a、制備型（分離生物大分子、細(xì)胞器和病毒等）、分析型（測試樣品沉降系數(shù)、分子量、構(gòu)象、純度等）、分析制備型；b、

3、低速離心機（分離大顆粒與溶液、血漿與血清等）、高速（DNA、RNA、各種細(xì)胞、無機物溶液、懸浮液及膠體溶液等分離濃縮和提純）、超速（亞細(xì)胞器、病毒、核酸、蛋白質(zhì)和多糖等）；c、臺式、多管微量式、細(xì)胞涂片式、高速冷凍式，大容量低速冷凍式；臺式低速自動平衡離心機（a、b、c任一種都對）注意事項（4分）1 離心機要放在平坦和結(jié)實的地面或?qū)嶒炁_上，不允許傾斜；2 通常離心機都會有登記表，請在使用前確實登記使用者、轉(zhuǎn)頭、轉(zhuǎn)速、時間；3 離心管一定要用天平平衡重量（重量平衡），蓋上離心管蓋子并旋緊；4 把平衡好的離心管對稱地放入離心陀中（位置平衡），蓋上離心陀的蓋子，注意有無旋緊；5 完成離心時，要等待離

4、心機自動停止，不允許用手或其他物件迫使離心機停轉(zhuǎn)，待轉(zhuǎn)頭完全靜止后，才能打開艙門，請盡快取出離心管，先觀察離心管是否完全，以及沉淀的位置，盡速把上清倒出，小心不要把沉淀弄混濁。3.請問哪些生物實驗需要進(jìn)行高壓滅菌（列舉三個以上）？常用的高壓滅菌條件是什么？如何進(jìn)行高壓滅菌及操作中的注意事項有哪些？（10分）在微生物實驗中，培養(yǎng)微生物所用的器具及培養(yǎng)基、培養(yǎng)液需要預(yù)先滅菌，以除去雜菌；被微生物等生物材料污染的玻璃器皿應(yīng)立即高壓滅菌，然后清洗；一些不要的菌種等，一定要消毒和高壓滅菌處理后方可棄掉。開展病原微生物類實驗所產(chǎn)生的廢棄物,在分類處置前,必須先自行高壓蒸汽滅菌；發(fā)酵實驗結(jié)束后活菌體必需加熱

5、殺死后就能排放；細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)所用的器具及培養(yǎng)基、培養(yǎng)液需要預(yù)先滅菌，以除去雜菌；基因工程操作所用的一切塑料器具（eppendorf管、tip等），在使用前都應(yīng)裝入盒子和瓶子中滅菌，且裝盒或裝瓶過程中都應(yīng)采用鑷子或戴上一次性手套進(jìn)行操作，不能直接用手去拿，嚴(yán)防手上雜酶污染。（任何三個都對，3分）對于一般的試劑、溶液或玻璃器皿等，一般是用121高溫滅菌20分鐘，裝液量多的或者含玉米漿的則需30分鐘甚至更長時間。而對于葡萄糖、乳糖等則需115高溫滅菌20-30分鐘。溫度太高容易變色。（主要是121）（2分）首先，檢查鍋內(nèi)蒸餾水量是否充足，第二，檢查個個閥門及開關(guān)是否工作正常。第三，將待滅菌的物

6、品用一層牛皮紙或兩層報紙包好，一定要包完整！放入鍋內(nèi)，物與物之間一定要有空隙。第四，蓋好鍋蓋，螺母對稱擰緊，打開放氣閥，關(guān)閉安全閥。第五，打開電源觀察放氣閥是否有蒸汽流出，確定后關(guān)閉放氣閥，待壓力表到達(dá)0.1-0.15kpa（溫度121左右）時計時，15-30分鐘，關(guān)閉開關(guān)。第六，待壓力表指針歸零后，打開放氣閥，按對稱方式打開鍋蓋，取出物品。（2分）注意事項:1.鍋內(nèi)水必須用蒸餾水或純化水。2.鍋蓋螺母必須對稱擰緊。3.一定要在放氣閥出大量蒸汽在關(guān)閉。4.當(dāng)滅菌時間結(jié)束時，必須等到壓力表歸零在打開。5.滅菌鍋超過最大耐受壓力后，放氣閥會自動彈開，此時鍋內(nèi)物品不能保證滅菌完全，需從新滅菌。高壓滅

7、菌液體終止時，不能快速排氣使壓力迅速降低；高壓滅菌鍋滅菌時，待滅菌的物品不能與含有腐蝕性抑制劑或化學(xué)試劑的物質(zhì)放在一起滅菌；（3分）4.動物解剖實驗中應(yīng)注意哪些問題？（10分）實驗預(yù)習(xí)：熟悉動物器官血管位置，了解待觀察部位。實驗動物檢疫、安撫：防止疾病感染及動物咬傷抓傷實驗器具的使用：防止玻璃器皿、注射器、手術(shù)刀的創(chuàng)傷；實驗操作：防止破壞關(guān)鍵部位、實驗記錄廢棄物：實驗動物所產(chǎn)生的糞便、尿液、毛發(fā)、皮屑、尸體；實驗動物房的污水和污物等，統(tǒng)一回收，做無害處理。5.實驗室常見的安全問題有哪些？（10分）人員安全：實驗服，平底覆蓋腳面的鞋，必要時需手套、護(hù)目鏡和口罩，保持實驗室通風(fēng)，禁止在實驗室內(nèi)吃喝

8、、喧鬧藥品安全：按藥品性質(zhì)分類存放，防變質(zhì)，防污染，有毒、有害、易燃和易爆物質(zhì)嚴(yán)格管理，禁止藥品外帶、食用等儀器安全：嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，如離心機配平、滅菌鍋和水浴鍋放干燒等水、電、煤氣安全：用時開啟，用完關(guān)閉，注意防火，離開實驗室前檢查實驗動物：實驗動物需專門渠道購買經(jīng)過檢疫，實驗過程中防止抓傷等，實驗結(jié)束后實驗材料回收，統(tǒng)一做無害處理實驗菌種、細(xì)胞、病毒等：使用時防止人員感染，實驗結(jié)束后實驗材料回收，經(jīng)滅活后統(tǒng)一處理6.如何正確的使用顯微鏡，如何制作洋蔥根尖細(xì)胞分裂的玻片？（10分）使用顯微鏡：取鏡和安放：1右手握住鏡臂，左手托住鏡座。 2把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺

9、邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。3轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。 4把一個較大的光圈對準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)(右眼睜開，便于以后同時畫圖)。轉(zhuǎn)動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，可以看到白亮的視野。5把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對通光孔的中心。6轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。7左眼向目鏡內(nèi)看，同時反方向轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意

10、事項：實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。（5分）制片：根的培養(yǎng)洋蔥的根用水培養(yǎng)。找一個奶瓶，盛滿水，將洋蔥底部浸入水中，放在實驗室北側(cè)的窗邊，室溫、自然陽光下，并每日換一次水，3-5日可取根。種子發(fā)芽培養(yǎng)時用直徑15cm的培養(yǎng)皿，底部鋪兩層浸濕的吸水紙，放在室溫（23°C）的條件下3-5日即可。 固定解離及染色：a從上午8時開始每隔1h選取一定數(shù)量的根放入酒精：兵醋酸=3：1的固定液中，室溫下浸泡10min，然后轉(zhuǎn)入70%的酒精溶液中保存待用。b、將固定以后的根轉(zhuǎn)入盛有15%HCl溶液的試管中

11、，再將試管放入盛有60°C-65°C的水溶液中解離約3min。c、將根從解離液中取出，放在載波片上，切取尖端1mm-3mm滴加0。2%的醋酸洋紅液1-3滴染色5min。 裝片的制作：染色以后的根尖之上，蓋上蓋波片，用拇指垂直輕壓蓋波片，以使細(xì)胞分散開。若要制成永久裝片，可用干冰法，取掉蓋波片，室溫下風(fēng)干一晝夜。 觀察先在低倍鏡下找到生長點部位，然后換上高倍鏡詳細(xì)觀察，并統(tǒng)計細(xì)胞分裂數(shù)目，計算分裂指數(shù)。 分裂指數(shù)=（分裂期的細(xì)胞數(shù)/分裂組織的細(xì)胞數(shù)）*100%（5分）7.什么是蛋白質(zhì)變性和核酸變性，他們的本質(zhì)分別是什么？引起其變性的因素有哪些？這些變性現(xiàn)象對生物學(xué)研究有何意義

12、？（10分）蛋白質(zhì)變性：在某些物理和化學(xué)因素作用下，其特定的空間構(gòu)象被破壞，也即有序的空間結(jié)構(gòu)變成無序的空間結(jié)構(gòu)，從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)改變和生物活性的喪失。變性的本質(zhì):破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)。引起蛋白質(zhì)變性的原因可分為物理和化學(xué)因素兩類。物理因素可以是加熱、加壓、脫水、攪拌、振蕩、紫外線照射、超聲波的作用等；化學(xué)因素有強酸、強堿、尿素、重金屬鹽、(SDS)等。核酸的變性：在物理和化學(xué)因素的作用下，維系核酸二級結(jié)構(gòu)的氫鍵和堿基堆積力受到破壞，DNA由雙鏈解旋為單鏈的過程。引起變性的因素很多，升高溫度、過酸、過堿、純水以及加入變性劑等都能造成核酸變性。應(yīng)用：去除有害物質(zhì)、有害生

13、物、生物產(chǎn)品制備、生物學(xué)檢測、生物基因改造等8.請問你對H7N9病毒的生物學(xué)特征有何認(rèn)識，并推測人們獲得這些信息的實驗手段有哪些？或列舉出對一種致病病毒進(jìn)行研究的方向與方法。（10分）H7N9型禽流感是一種新亞型流感病毒，基因組為分節(jié)段單股負(fù)鏈RNA。依據(jù)病毒顆粒外膜血凝素(H)和神經(jīng)氨酸酶(N)蛋白抗原性不同，命名。所有人類的流感病毒都可以引起禽類流感，但不是所有的禽流感病毒都可以引起人類流感。流感病毒普遍對熱敏感，對低溫抵抗力較強，65加熱30分鐘或煮沸(100)2分鐘以上可滅活。病毒在較低溫度糞便中可存活1周，在4水中可存活1個月，對酸性環(huán)境有一定抵抗力，在pH4.0的條件下也具有一定的

14、存活能力。在有甘油存在的情況下可保持活力1年以上?；騺碓碒7N9禽流感病毒基因來自于東亞地區(qū)野鳥和中國上海、浙江、江蘇雞群的基因重配。而病毒自身基因變異可能是H7N9型禽流感病毒感染人并導(dǎo)致高死亡率的原因。（3分）血清學(xué)檢驗方法的運用。利用抗原捕捉ELISA，篩選和排除可疑病原體；采用雙份血清IgG、IgM進(jìn)行檢測，分析抗體產(chǎn)生規(guī)律，摸清感染進(jìn)程通過體外培養(yǎng), 細(xì)胞病變效應(yīng)通過體外培養(yǎng)、濾過性、染色顯微鏡觀察等初步區(qū)分細(xì)菌或病毒電鏡觀察病毒形態(tài)病毒核酸基因的分子生物學(xué)及生物信息學(xué)鑒定：病毒基因抽提、確定類型；應(yīng)用已知病毒保守區(qū)PCR引物進(jìn)行PCR擴增，進(jìn)行病毒的基因組的酶切分析，擴增片段長度

15、多態(tài)性，在已有的基因庫中進(jìn)行同源性比對；RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性）DNA提取用酶切DNA用凝膠電泳分開DNA片段把DNA片段轉(zhuǎn)移到濾膜上利用放射性標(biāo)記的顯示特定的DNA片段（）和結(jié)果分析。研究和 AFLP（amplified fragment length polymorphism，擴增片段長度多態(tài)性）：主要包括制備，酶切片段擴增及凝膠電泳分析。研究病毒的分類和進(jìn)化。蛋白質(zhì)組學(xué)：純化病毒后進(jìn)行一維、二維電泳挖蛋白點測序，檢測試劑盒的研究：基因芯片、ELISA檢測試劑盒，（7分）9.生物工程包含哪幾個工

16、程門類？這些方向各自主要研究的是什么？（10分）生物工程包括四大工程，即遺傳工程(基因工程）、細(xì)胞工程、微生物工程(發(fā)酵工程）、酶工程(生化工程）。（也可以有生物反應(yīng)器工程）在這四大領(lǐng)域中，前兩者作用是將常規(guī)菌（或動植物細(xì)胞株）作為特定遺傳物質(zhì)受體，使它們獲得外來基因，成為能表達(dá)超遠(yuǎn)緣性狀的新物種“工程菌”或“工程細(xì)胞株”。后兩者的作用則是這一有巨大潛在價值的新物種創(chuàng)造良好的生長與繁殖條件，進(jìn)行大規(guī)模的培養(yǎng)，以充分發(fā)揮其內(nèi)在潛力，為人們提供巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。遺傳工程(基因工程）主要原理是用人工的方法，把生物的遺傳物質(zhì)，通常是脫氧核糖核酸(DNA)分離出來，在體外進(jìn)行基因切割、連接、重組

17、、轉(zhuǎn)移和表達(dá)的技術(shù)：基因的轉(zhuǎn)移已經(jīng)不再限于同一類物種之間，動物、植物和微生物之間都可進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移，改變宿主遺傳特性，創(chuàng)造新品種(系)或新的生物材料。細(xì)胞工程是應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的理論和方法，按照人們的設(shè)計藍(lán)圖，進(jìn)行在細(xì)胞水平上的遺傳操作及進(jìn)行大規(guī)模的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。當(dāng)前細(xì)胞工程所涉及的主要技術(shù)領(lǐng)域有細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞拆合、染色體操作及基因轉(zhuǎn)移等方面。通過細(xì)胞工程可以生產(chǎn)有用的生物產(chǎn)品或培養(yǎng)有價值的植株，并可以產(chǎn)生新的物種或品系。微生物工程(發(fā)酵工程）是指采用現(xiàn)代工程技術(shù)手段，利用微生物的某些特定功能，為人類生產(chǎn)有用的產(chǎn)品，或直接把微生物應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)過程的一種新技術(shù)。發(fā)酵工程的內(nèi)

18、容包括菌種的選育、培養(yǎng)基的配制、滅菌、擴大培養(yǎng)和接種、發(fā)酵過程和產(chǎn)品的分離提純等方面。酶工程(生化工程）就是將酶或者微生物細(xì)胞，動植物細(xì)胞，細(xì)胞器等在一定的生物反應(yīng)裝置中，利用酶所具有的生物催化功能，借助工程手段將相應(yīng)的原料轉(zhuǎn)化成有用物質(zhì)并應(yīng)用于社會生活的一門科學(xué)技術(shù)。它包括酶制劑的制備，酶的固定化，酶的修飾與改造及酶反應(yīng)器等方面內(nèi)容。酶工程的應(yīng)用，主要集中于食品工業(yè)，輕工業(yè)以及醫(yī)藥工業(yè)中。（每個2.5）10.你是如何理解生物學(xué)中的糖類和脂類？（10分）糖類：多羥基的醛或酮，及其聚合物和某些衍生物，高親水性化合物。能量直接供體（葡萄糖），機體骨架（纖維素），儲能物質(zhì)（淀粉），遺傳物質(zhì)的骨架（DNARNA），信號傳遞物質(zhì)（糖蛋白、糖脂等）