1、江淮學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計）題目樹舌靈芝多糖的提取及其抗氧化作用 學(xué)生姓名： 司楠楠 學(xué)號 01124068 系 別： 理工部 專業(yè)： 生物科學(xué)入學(xué)時間： 2012年 09月導(dǎo)師姓名： 吳慶喜 職稱/學(xué)位：講師/博士 畢業(yè)論文（設(shè)計）提交時間：二一六 年 四 月安徽大學(xué)江淮學(xué)院教學(xué)科研部制樹舌靈芝的提取及其抗氧化作用摘 要目的：研究樹舌靈芝多糖的提取條件及抗氧化作用。方法：本實驗采用水提醇沉的方法進(jìn)行靈芝多糖的提取，并對提取過程中的料液比、提取時間、提取溫度進(jìn)行單因素實驗分析和正交試驗，以多糖得率為指標(biāo)得到最佳提取條件。本文選取兩個指標(biāo)即DPPH的清除作用和-OH的清除作用研究靈芝多糖的抗氧化

2、活性。結(jié)果：正交試驗結(jié)果表明，最佳提取條件：提取溫度為90°C、提取時間為2h、料液比為1：15的條件下多糖得率為69.7%。結(jié)論：各提取因素對提取率的影響大小排序為：提取溫度>提取時間>料液比。靈芝多糖對DPPH和-OH都具有較強的清除作用，且對濃度有依賴關(guān)系，表明野生樹舌靈芝多糖具有較強的抗氧化活性。關(guān)鍵詞：樹舌靈芝多糖；單因素分析；正交試驗；抗氧化作用Extraction and antioxidation studies of polysaccharides from Ganoderma lucidumAbstractObjective: To study the

3、 extraction conditions and antioxidation of Ganoderma lucidum polysaccharides from Ganoderma lucidum. Methods: in this experiment, the water extraction and alcohol precipitation method for the extraction of Ganoderma lucidum polysaccharides, and analysis of single factor experiments and orthogonal t

4、est of extraction process of solid to liquid ratio, extraction time, extraction temperature, to polysaccharide yield as the index to get the best extraction conditions. In this paper, we selected two indicators, namely, the scavenging effect of DPPH and the scavenging effect of -OH on the antioxidan

5、t activities of Ganoderma lucidum polysaccharides. Results: orthogonal test results showed that the best extraction conditions: extraction temperature was 90 degrees C, extraction time was 2h, the ratio of material to liquid ratio of 1:15 was 69.7%. Conclusion: the effects of the extraction factors

6、on the extraction rate were as follows: extraction temperature > feed liquid ratio. The Ganoderma lucidum polysaccharides had strong scavenging effect on DPPH and -OH, and had a strong dependence on the concentration, which indicated that the Ganoderma lucidum polysaccharides had strong antioxida

7、nt activity.Key words: Ganoderma lucidum polysaccharides; Single factor analysis; Orthogonal test; Antioxidation目 錄第一章 引言1 1.1 樹舌靈芝簡介1 1.2 樹舌靈芝多糖簡介1 1.3 樹舌靈芝多糖的提取方法研究1 1.4 樹舌靈芝多糖的生物活性2 1.4.1 樹舌靈芝多糖的抗腫瘤作用 2 1.4.2 樹舌靈芝多糖的降血糖作用2 1.4.3 樹舌靈芝多糖的抗氧化作用2 1.5論文主要研究內(nèi)容及研究意義3第二章 材料、試劑、儀器3 2.1 材料3 2.2 試劑3 2.3 儀器設(shè)

8、備3第三章 方法4 3.1 原材料的處理4 3.2 樹舌靈芝多糖的提取工藝路線4 3.2.1 熱水浸提4 3.2.2 過濾4 3.2.3 濃縮4 3.2.4 醇沉4 3.2.5 離心4 3.2.6 再濃縮4 3.2.7 冷凍干燥并稱量4 3.3 單因素提取實驗4 3.3.1 不同提取溫度對多糖得率的影響4 3.3.2不同料液比對多糖得率的影響5 3.3.3不同提取時間對多糖得率的影響5 3.3.4樹舌靈芝多糖提取的正交試驗5 3.4樹舌靈芝粗多糖的含量測定5 3.4.1總糖含量的測定5 3.5抗氧化研究實驗6 3.5.1 實驗溶劑6 3.5.2實驗過程6 3.5.2.1對DPPH的清除能力測定

9、 6 3.5.2.2對羥基自由基的清除能力測定6 3.5.3數(shù)據(jù)處理7第四章 實驗結(jié)果分析7 4.1單因素提取對多糖得率的影響7 4.1.1提取溫度對多糖得率的影響7 4.1.2料液比對多糖得率的影響8 4.1.3提取時間對多糖得率的影響9 4.2正交試驗9 4.3多糖含量的測定10 4.3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線10 4.4抗氧化作用的研究11 4.4.1DPPH的清除作用分析11 4.4.2羥基自由基的清除作用分析11第五章 結(jié)論與展望12主要參考文獻(xiàn)14致 謝15第一章 引 言1.1 樹舌靈芝簡介 靈芝為多孔蓖科真菌靈芝的子實體。性味 性溫，味淡。氣特殊，味道苦澀。是中國最珍貴而又稀少的野生草

10、本植物。自古享有“諸藥為個病之藥，靈芝為百病之藥”的美譽。靈芝，在我國自古就有“仙草”的美譽，已有悠久的藥用和食用歷史，神農(nóng)本草經(jīng)、本草綱目都有靈芝的藥效記載1。樹舌靈芝又稱樹舌扁靈芝、老母菌、楓樹菌。子實體大型或特大型。無柄或幾乎無柄。菌蓋半圓形，扁半球形或扁平，表面灰色，漸變褐色，有同心環(huán)紋棱，有時有瘤，皮殼膠角質(zhì)，邊緣較薄。菌肉淺栗色，菌孔圓形。生于楊、樺、柳、櫟等闊葉樹的枯立木、倒木和伐樁上，是重要的木腐菌之一，會導(dǎo)致木材木質(zhì)部形成白色腐朽，可藥用。在中國和日本民間作為抗癌藥物。還可以治聞風(fēng)濕性肺結(jié)核，有止痛、清熱、化積、止血、化痰之功效。成分包括多糖、甾體化合物、三萜、脂類、氨基酸、

11、多肽、蛋白質(zhì)類、生物堿類、酚類、內(nèi)酯、香豆素類和甙類以及微量元素等。野生靈芝有非常豐富的藥理成分，在神農(nóng)本草經(jīng)和本草綱目中，都記載了靈芝的藥效，它能“治胸中結(jié)，溢心氣”，“入心生血，助心充脈”，“安神”、“保神”、“益肺氣”、“益脾氣”、“益精氣”等，對全身五臟之氣均具有補益作用2。圖1 樹舌靈芝Fig1: Ganoderma lipsiense 本實驗論文采用的是從安徽省霍山縣深山老林中得到的野生樹舌靈芝，其顏色為深灰色，其長度為27.75cm、寬度為35.2cm，重量在1公斤左右。1.2 樹舌靈芝多糖簡介多糖是由多個單糖分子以糖苷鍵結(jié)合而成的天然大分子化合物廣泛存在于植物、動物和微生物組織

12、中是生命有機體的重要組成部分，并且具有多種多樣的生物活性3。多糖是一類高分子活性的大分子物質(zhì)，大量藥理和臨床證明多糖具有抗腫瘤、抗炎癥及增強免疫和降低血糖等活性，近年來,天然產(chǎn)物多糖作為醫(yī)藥產(chǎn)品的前體已受到廣泛重視,多糖化合物已成為當(dāng)今新藥的發(fā)展方向之一。靈芝多糖是靈芝中最有活性的有效組分之一，并且具有多種藥理活性，如提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化，研究結(jié)果表明，靈芝的抗腫瘤活性是由于具有特定結(jié)構(gòu)的多糖，靈芝多糖除了具有增強免疫力的作用及抑制腫瘤的功能以外，還有顯著的抗突變，降血脂、血糖，抗病毒等功效4。樹舌靈芝多糖的抗腫瘤作用：目前許多研究證明靈芝多糖具有抗腫瘤活性。靈芝多糖主要是通過巨

13、噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，促進(jìn)IL-1、IL-2、TNF-，等細(xì)胞因子的分泌，提高機體的免疫監(jiān)視功能，從而減少腫瘤的發(fā)生5。靈芝多糖之所以能防止腫瘤的發(fā)生和抑制腫瘤的生長，主要是作為機體免疫調(diào)節(jié)劑，通過增強宿主免疫調(diào)節(jié)功能即宿主介導(dǎo)抗腫瘤活性來實現(xiàn)的6。樹舌靈芝多糖的降血糖作用：隨著社會的發(fā)展，人們生活水平的不斷提高，許多老年人都患有糖尿病，然而糖尿病也正向著年輕人發(fā)起攻勢，所以當(dāng)今社會對于糖尿病的防御已經(jīng)是措手不及，目前針對治療糖尿病的藥物主要為二甲雙胍片。通過文獻(xiàn)查閱可知，目前大部分研究主要通過靈芝多糖對胰腺組織的保護(hù)和抑制胰腺P細(xì)胞的凋亡來研究其降血糖的機理。結(jié)果表明其降血糖作用還是非常顯著的，

14、這一研究對于今后防治糖尿病有重大意義。 樹舌靈芝多糖的抗氧化作用，人體代謝過程中會因氧化作用而產(chǎn)生大量的自由基，在正常情況下，人體內(nèi)的自由基處于不斷產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡中，自由基的大量存在會影響生物大分子及細(xì)胞器的正常運作，最終造成機體不同程度的損傷，使機體衰老或者會誘發(fā)各種疾病。因此，研究某種物質(zhì)的抗氧化性質(zhì)主要是研究其對各種自由基（-OH、DPPH、超氧陰離子等）的清除作用。靈芝多糖具有減少機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生，增強免疫力的作用。通過文獻(xiàn)查閱，大部分資料表明對多糖體內(nèi)抗氧化能力的研究較多，而關(guān)于靈芝多糖在體外的直接清除作用研究較少，因此，本文主要研究靈芝多糖在體外的抗氧化活性。1.3 樹舌靈

15、芝多糖的提取方法研究 目前關(guān)于靈芝多糖的提取常用的方法為水提醇沉、酸提取法、堿提取法、高溫提取法以及酶法提取等。根據(jù)所查閱的資料表明，高溫提取法雖然效率非常高，但是溫度過高會使糖類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而對多糖的活性產(chǎn)生影響，不利于實驗的正常進(jìn)行。此外，對于富含淀粉類、黏液質(zhì)等成分的原料，高溫會造成糊化現(xiàn)象，使溶液黏度過大，不易過濾，從而給料液分離帶來困難7。酸提取法和堿提取法中，由于酸堿的濃度難以控制，有可能會使多糖發(fā)生分解，降低多糖的得率。在酸和堿的作用下，一部分原來不溶于水的多糖還可能發(fā)生分解，從而改變了多糖的成分，在某些情況下這種改變會減低多糖的活性8。另外這種酸堿的提取方法很可能會引

16、入一些雜質(zhì)離子，如：Na+、Cl+、SO42-等，會降低多糖的質(zhì)量，對后續(xù)的實驗造成困擾。酶法提取多糖雖然省時高效，但是酶具有分解作用，會降解一些糖苷鍵和蛋白質(zhì)類物質(zhì)。本文采取水提醇沉的方法提取樹舌靈芝多糖，其優(yōu)點較為經(jīng)濟，簡單，容易操作，儀器設(shè)備易得。在實驗過程中利用水浴鍋即可加熱，完成提取時對溫度的要求，利用乙醇可將糖沉淀，并且溶液中的乙醇還可以通過蒸發(fā)濃縮進(jìn)行回收，乙醇容易揮發(fā)，避免了對多糖的影響。1.4 論文主要研究意義根據(jù)查閱的許多文獻(xiàn)有可知，靈芝有很多價值，特別是含有的靈芝多糖有很豐富的生物學(xué)活性，在醫(yī)療、美容等方面有很大的研究進(jìn)展。本文主要研究靈芝多糖的提取方法，對不同料液比、提

17、取時間、提取溫度進(jìn)行對比，以粗多糖得率為指標(biāo)，確定最優(yōu)提取條件，為后續(xù)研究提供理論參考依據(jù)。對多糖的抗氧化能力進(jìn)行測定，分兩個方面羥基自由基的清除作用和DPPH的清除作用。本文目的是研究靈芝多糖的工藝優(yōu)化條件和抗氧化活性，為進(jìn)一步研究樹舌靈芝多糖奠定了基礎(chǔ)，為尋找一種天然高抗氧化性多糖提供理論依據(jù)。第二章 材料、試劑、儀器2.1 材料野生樹舌靈芝，在安徽省霍山縣深山中采得，在安徽大學(xué)經(jīng)沈業(yè)壽教授鑒定為樹舌靈芝，并在安徽大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院進(jìn)行加工處理。2.2 試劑（1）無水乙醇：上海振業(yè)化工有限公司 （2）DPPH: 梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司（3）維生素C: 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所 （

18、4）FeSO4 : 無錫市展望化工試劑有限公司 （5）水楊酸：麥克林 （6）過氧化氫:天津博迪化工股份有限公司（7） 甲醇：國藥集團化學(xué)試劑有限公司2.3 儀器設(shè)備 （1）電子天平：上海越平科學(xué)儀器有限公司 （2）冰箱：榮事達(dá) （3）烘箱：上海精宏實驗設(shè)備有限公司（4）KQ5200E型超聲波清洗器：昆山市超聲儀股份有限公司（5）DK-S24型電熱恒溫水浴鍋：上海精宏實驗設(shè)備有限公司 （6）METASH紫外可見分光光度計：上海元析儀器有限公司（7）SB-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司（8）3K15 SIGMA離心機第三章 方法3.1 原材料的處理將部分野生樹舌靈芝用打碎機將其打碎

19、呈粉末狀，用保鮮袋分裝好存放于冰箱中。3.2 樹舌靈芝多糖的提取工藝路線取靈芝粉末熱水法浸提多糖過濾去除濾渣收集上清液上清液濃縮濃縮液中加乙醇沉淀離心收集沉淀加水復(fù)溶旋蒸冷凍干燥粗多糖稱重計算粗多糖得率。3.2.1 熱水浸提將稱取好的靈芝粉末加入蒸餾水按一定的料液比放于恒溫水浴鍋中，在一定時間和溫度下進(jìn)行提取。3.2.2 過濾將上述溶液進(jìn)行抽濾，收集上清液，將濾渣再加入3.2.1中相同體積的蒸餾水于恒溫水浴鍋中再次提取，收集上清液，重復(fù)23次。合并上清液待用。3.2.3 濃縮將上清液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，依據(jù)實際情況對溫度和轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整，最后所得溶液體積大約10毫升。3.2.4 醇沉在所得

20、溶液中加入乙醇，用保鮮膜封口，靜置十個小時。3.2.5 離心將上述液體離心，4000r/min,10min,取沉淀，去上清液。3.2.6 加水復(fù)溶將上述沉淀加入蒸餾水在再次濃縮3.2.7 冷凍干燥并稱量將準(zhǔn)備好的小燒杯洗凈烘干，貼上標(biāo)簽，然后精確稱量每個小燒杯的重量m，將上述步驟中的清液置于準(zhǔn)備好的小燒杯中，冷凍干燥得粗多糖，再稱量培養(yǎng)皿與粗多糖的總重M，M-m即為粗多糖的重量。3.3 單因素提取實驗對樹蛇靈芝中多糖提取的料液比、提取時間、溫度三個因素進(jìn)行測定，最后多糖得率為指標(biāo)，得到提取多糖最優(yōu)的條件。3.3.1 不同提取溫度對多糖得率的影響在提取時間2h和料液比1:15的條件下，分別設(shè)置5

21、個溫度梯度60、70、80、90、100，進(jìn)行實驗。3.3.2不同料液比對多糖得率的影響在提取時間2h和溫度90°C下，設(shè)置五個不同梯度的料液比1:5、1:10、1:15、1:20、1：25，以粗多糖得率為標(biāo)準(zhǔn)，得到最佳料液比。3.3.3不同提取時間對多糖得率的影響在提取溫度90°C和料液比1:15的條件下，分別進(jìn)行五個不同梯度提取時間0.5、1.0、1.5、2.0、2.5。最終以多糖得率為標(biāo)準(zhǔn)，得到最佳提取時間。3.3.4樹舌靈芝多糖提取的正交試驗表1:正交試驗水平因素表9Table 1: experimental factors level table 水平提取溫度/&

22、#176;C (A)提取時間/h (B)料液比g/ml（C）17011:102801.51:1539021:20本實驗采用正交設(shè)計L9(3) 3實驗，設(shè)定三個參數(shù)，分別為提取時間，提取溫度，料液比。3.4 樹舌靈芝粗多糖的含量測定3.4.1 總糖含量的測定（1） 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線精確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖10mg于100ml容量瓶中定容。分別吸取0.0ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml、標(biāo)準(zhǔn)液于各試管中，用蒸餾水分別補齊至2.0ml；加入6%的苯酚溶液1.0ml與濃硫酸5.0ml混勻，室溫放置20分鐘；紫外分光光度計490nm處測得吸收值（OD）。以糖

23、含量為橫坐標(biāo)，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。表2:葡聚糖溶液配比Table 2: dextran solution ratio標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖0.1mg/ml(ml)00.20.40.60.81.01.21.4待測樣品2.0ddH2O(ml)2.01.81.61.41.21.00.80.60（2） 樣品糖含量計算準(zhǔn)確稱取100mg的粗多糖，加水充分溶解，然后定容于1000ml,按以上步驟操作，在490nm處測吸光值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樹舌靈芝多糖含量。3.5 抗氧化研究實驗3.5.1實驗溶劑0.13m/L DPPH溶液:稱取0.0052gDPPD溶于100ml甲醇中，即得。（DPPH溶液要避光保存，放在

24、棕色試劑瓶中。）400ug/ml母液：取靈芝多糖20mg于50ml容量瓶中，加入去離子水定容至50ml，即得。9mol/L 硫酸亞鐵溶液：取0.2502g 7水硫酸亞鐵定容至100 ml，即得。9mol/L水楊酸-乙醇溶液：取0.1242g水楊酸加無水乙醇定容至100ml，即得。8.8mmol/L過氧化氫溶液：取1ml過氧化氫定容至100ml,取定容后的溶液0.1ml再定容至100ml，即得。3.5.2 實驗過程以下實驗均設(shè)置陽性對照和陰性對照實驗。分別加入不同濃度的多糖溶液25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml、300ug/ml、400ug/ml，達(dá)到不同濃度梯度

25、。并做三組平行試驗取其平均值。3.5.2.1 對DPPH的清除能力測定 在6支試管中分別加入2mlDPPH，再加入一定濃度的母液（0.0025mg/ml-0.04mg/ml）2ml。選取甲醇為對照實驗，將試管中的溶液混合均勻后，黑暗反應(yīng)30分鐘后，在517nm處測吸光值。實驗結(jié)果重復(fù)3次，利用下列公式計算其清除率：清除率(%) =A0-（A-A1）/A0 ×100其中A0為空白組=2mlDPPH+2ml水，A為實驗組，A1為對照組。按照上式計算出多糖對DPPH的清除率，清除率越大抗氧化能力越大。3.5.2.2 對羥基自由基的清除能力測定 取10 mL具塞試管分別加入1 mL9 mmo

26、l/L FeS04 1 mL和1 mL 9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液，再加入不同濃度的母液（0.002mg/ml-0.04mg/ml）1ml，最后加入1ml8.8 mmol/LH2O2 。在37°C水浴30分鐘，于510nm處測得吸光值。記錄數(shù)據(jù),實驗重復(fù)3次，并以下列公式計算多糖對羥基自由基的清除率：清除率(%) =A0-（A-A1）/A0 ×100其中A0為空白組用蒸餾水替代樣品，A為實驗組，A1為對照組用蒸餾水替代H2O2。3.5.3 數(shù)據(jù)處理每組實驗均設(shè)定三個平行實驗，結(jié)果求平均值。第四章 實驗結(jié)果與分析4.1 單因素提取對多糖得率的影響4.1.1 提取溫度對多

27、糖得率的影響在提取時間為2h，料液比為1:15的條件下，不同溫度對多糖得率的影響如下圖所示：（以溫度作為橫坐標(biāo)，多糖得率為縱坐標(biāo)）圖2 :提取溫度對多糖得率的影響Table 2: Effect of temperature on polysaccharides extraction rate由圖1可知，隨著溫度的升高，多糖的得率逐漸增加，且增幅明顯，但是隨著溫度的升高，某些多糖的部分結(jié)構(gòu)會發(fā)生降解，為了保證多糖結(jié)構(gòu)不被破壞，所以選擇提取溫度在90左右為宜。4.1.2 料液比對多糖得率的影響在提取時間為2h，提取溫度為90的條件下，分別進(jìn)行不同料液比的實驗。結(jié)果如下：（以料液比作為橫坐標(biāo)，多糖得

28、率為縱坐標(biāo)）圖3:不同料液比的條件下多糖含量（單位：克/毫克）Figure 3: Content of polysaccharides in different liquid to liquid ratio (unit: g / mg)由圖2可知，隨著料液比的增加，多糖得率不斷上升，但是料液比在1:15左右時多糖得率的增加幅度明顯減少，提取率增加緩慢。增加料液比會使多糖得率不斷增加，但是所需原料也越來越多，會使實驗成本較高，并且在后續(xù)實驗中所加入的溶劑也會增多，雜質(zhì)離子增多，使最終的多糖質(zhì)量降低，所以綜合各方面因素考慮，最佳料液比為1:15。4.1.3 提取時間對多糖得率的影響在提取溫度為90

29、°C,料液比為1:15的條件下，設(shè)置不同時間對多糖進(jìn)行提取，結(jié)果如下：（以提取時間比作為橫坐標(biāo)，多糖得率為縱坐標(biāo)） 圖4:在提取不同時間的條件下多糖得率記錄結(jié)果（單位：克/毫克）Figure 4: In the extraction of the different times of the condition of the polysaccharide yield record results (unit: g / mg)由圖3可知，多糖提取率隨著提取時間的增長，多糖得率不斷增長但是隨后呈現(xiàn)下降的趨勢，在2h 左右多糖得率最大,所以最佳提取時間應(yīng)改是2h 。4.2 正交試驗本實驗采

30、用正交設(shè)計L9(3) 3實驗，設(shè)定三個實驗參數(shù)，分別為提取時間，提取溫度，料液比。結(jié)果如下：表3:正交試驗結(jié)果及分析Table 3:results and analysis of orthogonal test試驗號溫度/°C（A)時間/h(B)料液比（C)多糖得率/%1111 152122 21.23133 28.54212 42.15223 53.76231 52.87313 58.08321 63.79332 69.7K16.49311.56013.18440.583K214.90713.86714.014K319.18615.12413.378R12.6893.5430.82

31、9由圖5結(jié)果分析可知，極差R大小可以反映各因素對指標(biāo)影響程度，則提取溫度對多糖得率的影響最大，其次為提取時間，最后為料液比。從正交試驗實驗結(jié)果可知，最佳提取條件為A3B3C2。即提取溫度為90°C，提取時間為2h，料液比為1：15。4.3 總糖含量的測定4.3.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線（在490nm處測吸光值），結(jié)果如下圖：圖5：苯酚-硫酸法測定總糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig5: phenol - sulfuric acid method for determination of total sugar content of standard curve根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，由公式：y=0.0133x+0

32、.0015，當(dāng)y=1.118時，x=89.21，所以總糖含量為：89.21%。4.4 抗氧化作用的研究4.4.1 DPPH的清除作用分析黑暗反應(yīng)30 分鐘后，在517nm處測吸光值，然后根據(jù)清除率的公式進(jìn)行計算。所得結(jié)果如下所示： 圖6:樹舌靈芝多糖對DPPH的清除作用Fig6:Ganoderma lucidum polysaccharides polysaccharide on DPPH scavenging由上圖可以看出：陽性對照VC對自由基的清除作用非常的明顯，在所加VC的濃度為0.125mg/ml時就已經(jīng)接近了95%的清除率，清除效果并沒有隨VC濃度的增加而有明顯上升的趨勢，即清除效果

33、與VC含量沒有呈現(xiàn)明顯的正相關(guān)或負(fù)相關(guān)關(guān)系。而樹舌靈芝多糖對DPPH的清除率隨母液濃度的增加而增強，即清除效果與多糖含量呈明顯的正相關(guān)關(guān)系。人工靈芝子實體粗多糖隨母液濃度的增加，清除率越來越高，但是樹舌靈芝多糖的清除率仍高于人工靈芝子實體多糖。4.4.2 羥基自由基的清除作用分析 水浴加熱37°C 30min，在510nm處測得吸光值，然后根據(jù)清除率公式進(jìn)行計算。所得結(jié)果如下所示：圖7:樹舌靈芝多糖對-OH的清除作用Fig 7: scavenging effect of Ganoderma lucidum polysaccharides on -OH由上圖可以看出，陽性對照VC對-O

34、H的的清除效果非常明顯，在濃度為50mg/ml-100mg/ml之間清除率增加非?？?，之后隨著濃度增加清除率都在90%以上，所以VC的清除作用非常明顯。而樹舌靈芝多糖的清除率隨多糖濃度的增加而增大，即清除效果與多糖濃度呈正相關(guān)關(guān)系。人工靈芝子實體的清除率小于樹舌靈芝多糖。第五章 結(jié)論與展望本文的研究內(nèi)容即是樹舌靈芝多糖的提取和抗氧化性研究，在多糖提取中主要有提取方法和最佳提取工藝的研究，本實驗采用水提醇沉法提取靈芝多糖，設(shè)置單因素試驗對提取時間、提取溫度和料液比三個因素進(jìn)行分析，得到最優(yōu)提取條件。結(jié)果表明提取溫度是影響多糖提取率的最關(guān)鍵因素，各提取因素對水提醇沉法得到的多糖得率的影響順序為：提取溫度提取時間料液比。靈芝多糖的最佳提取條件為提取溫度90、料液比1:15、提取時間2h時為最佳提取條件。在實驗過程中也會存在一些誤差，如：稱量的準(zhǔn)確性、配溶